免疫組化的特點：

1）特異性強。免疫學的基本原理決定抗原與抗體之間的結合具有高度特異性，因此，免疫組化從理論上講也是組織細胞中抗原的特定顯示，如角蛋白（keratin）顯示上皮成分，LCA顯示淋巴細胞成分。只有當組織細胞中存在交叉抗原時，才會出現交叉反應。

2）敏感性高。在應用免疫組化的起始階段，由于技術上的限制，只有直接法、間接法等敏感性不高的技術，那時的抗體只能稀釋幾倍、幾十倍；現在由于ABC法或SP三步法的出現，使抗體稀釋上千倍、上萬倍甚至上億倍仍可在組織細胞中與抗原結合，這樣高敏感性的抗體抗原反應，使免疫組化方法越來越方便地應用于常規病理診斷工作。

3）定位準確、形態與功能相結合。該技術通過抗原抗體反應及呈色反應，可在組織和細胞中進行抗原的準確定位，因而可同時對不同抗原在同一組織或細胞中進行定位觀察，這樣就可以進行形態與功能相結合的研究，對病理學領域開展深入研究是十分有意義的。

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免疫組化的實驗步驟

免疫組化的實驗步驟通常包括組織固定、切片、抗原修復、封閉、一抗孵育、二抗孵育、顯色和復染等。首先，組織樣本需要經過固定（如福爾馬林固定）以保持其形態結構。然后，將固定后的組織包埋在石蠟中并切成薄片。抗原修復是為了暴露被固定過程掩蓋的抗原表位，常用的方法有熱修復和酶消化。封閉步驟是為了減少非特異性結合，通常使用血清或BSA。一抗孵育是關鍵步驟，一抗與目標蛋白特異性結合。二抗孵育則是通過二抗與一抗結合，并連接顯色系統。，通過顯色和復染使目標蛋白可視化。 江西動物組織免疫組化注意事項常見的免疫組化方法有哪些？

免疫組化的抗原修復

很多抗原的可視性可以通過抗原修復來提高，抗原修復可以打破福爾馬林固定時形成的蛋白質交聯，從而使被掩藏的抗原顯現出來。抗原修復技術包括不同時間長度的加熱或者利用蛋白酶來做酶消化，例如蛋白酶K，胰蛋白酶或胃蛋白酶。加熱的方法通常會用到微波爐，高壓鍋，蒸箱或水浴。將樣品在接近100°C高溫加熱20分鐘后再冷卻同等的時間。**常用的抗原修復液有a)檸檬酸鹽緩沖劑,pH6.0,b)Tris-EDTA,pH9.0和c)EDTA,pH8.0.如需要可用檸檬酸鹽緩沖劑做抗原修復：檸檬酸鹽緩沖劑配方:10mM檸檬酸鈉,0.05%Tween-20,pH6.0或10mM檸檬酸,0.05%Tween-20,pH6.0將含有檸檬酸鈉或檸檬酸鹽緩沖劑的染色盤放到蒸箱或者水浴中，預熱到95-100°C。將切片浸沒于染色盤中。蓋子虛掩，孵育20-40分鐘(研究者需自己決定比較好的孵育時間)。關掉蒸箱或水浴，將染色盤置于室溫下，讓切片冷卻20分鐘。在TBS-Tween-20中漂洗切片2次，每次2分鐘。開始封閉步驟。

免疫組化技術應用于臨床cancer良惡性的判斷，英瀚斯生物為您介紹。對于反應性增生還是cancer性增生，可用免疫球蛋白(Ig)的輕鏈抗體檢測B淋巴細胞增生的單克隆或多克隆性來區別。在濾泡反應性增生時，濾泡反應中心的細胞不表達細胞凋亡蛋白(bcl-2)，bcl-2陰性;而在濾泡性淋巴瘤中，由于90%以上cancer性濾泡細胞有bcl-2的高表達，bcl-2陽性。而增殖細胞核抗原(PCNA)，周期素(Cycling)，核抗原(Ki-67)通過對cancer細胞增生的程度作出評價，從而提示增生細胞的良惡性。免疫組化實驗原理，操作步驟盡在英瀚斯實驗外包。

免疫組化實驗流程介紹：

英瀚斯生物為您整理總結免疫組化詳細步驟：

1、SP三步法

1）石蠟切片，常規脫蠟至水。

2）0.3%或3%H2O2去離子水（無色液體）孵育10-30分鐘，以滅活內源性過氧化物酶活性。

3）蒸餾水沖洗，PBS浸泡5分鐘

4）候選步驟：采用抗原修復：微波（建議30分鐘內4次中火）、高壓、酶修復方法。自然冷卻，再用3分鐘×3次.

5）血清封閉：室溫15-30分鐘，盡可能與二抗來源一致。傾去，勿洗。

6）滴加適當比例稀釋的一抗，37℃孵育2~3小時或4℃過夜（比較好復溫）。PBS沖洗，3分鐘×5次。

7）滴加生物素標記的二抗，室溫或37℃孵育30分鐘-1h。

8）PBS沖洗，3分鐘×5次。

9）滴加SP（鏈霉親和素-過氧化物酶），室溫或37℃孵育30分鐘-1h。

10）PBS沖洗，3分鐘×5次。

11）顯色劑顯色（DAB等）。

12）自來水充分沖洗。

13）可進行復染，脫水，透明。

14）選擇適當的封片劑封片。 做免疫組化的目的是什么？四川小鼠免疫組化實驗

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確定來源不明的轉移瘤的原發部位，臨床上免疫組化也可以進行操作。對于來源不明的轉移瘤，用免疫組化技術有助于確定惡性cancer的組織學來源，進一步確定原發部位。如角蛋白抗體(CK20)在胃腸道cancer、膽管cancer、胰腺cancer中陽性，而在肺cancer、乳腺cancer、腎cancer中陰性;Tg陽性可考慮甲狀腺轉移;波形蛋白(Vimentin)陽性支持肉瘤的診斷;前列腺特異性抗原(PSA)陽性可考慮前列腺轉移;甲狀腺球蛋白陽性可考慮甲狀腺濾泡細胞cancer;肌動蛋白(Actin)、肌球蛋白(Myosin)、結蛋白(Desmin)、肌紅蛋白(Myoglobin)陽性可考慮橫紋肌肉瘤;S-100蛋白陽性支持黑色素瘤的診斷;等等這些都為cancer的醫療及預后提供了依據。湖北切片免疫組化注意事項