免疫組化染色呈陰性結果的原因有哪些？

1、抗體濃度和質量問題以及抗體來源選擇錯誤。不是抗體濃度越高就越易出現陽性結果，抗原抗體反應有前帶和后帶效應，必須摸索比較好濃度。

2、抗原修復不全，對于甲醛固定的組織必須用充分抗原修復來打開抗原表位，以利于與抗體結合；建議微波修復用高火4次*6min試試。有人做過實驗，這是比較好的時間和次數。若不行，還可高壓修復。

3、組織切片本身這種抗原含量低。

4、血清封閉時間過長。

5、DAB孵育時間過短。

6、細胞通透不全，抗體未能充分進入胞內參與反應。

7、開始做免疫組化，建議一定要首先做個陽性對照片，排除抗體等問題。 英瀚斯生物，可做免疫組化定量分析。安徽病理免疫組化檢測

免疫組化在臨床應用中，還能及時準確的發現微小轉移灶。英瀚斯生物專業做實驗外包服務，一站式醫學科研平臺。采用常規病理方法難以檢出的實體瘤轉移稱為微小轉移灶。在常規組織切片中，辨別單個或幾個轉移性cancer細胞很難，淋巴結內竇性組織細胞增生與某些cancer的早期轉移有時也不易區別，而采用免疫組化方法，有助于及時準確的發現微小(cancer)轉移灶。對乳腺cancer而言主要是腋窩淋巴結的檢測，淋巴結微轉移患者預后差，這對進一步醫療和預后判斷十分有意義。細胞免疫組化是什么病理報告中的免疫組化到底有什么作用?

免疫組化染色切片的好壞直接影響著病理醫生對其染色結果的判斷，進而影響病理診斷，所以制作一張良好的免疫組化切片至關重要，它需要病理醫生與病理技師兩者間的相互協調，密切配合和共同努力，病理醫生選擇抗體，設置對照，判讀結果，指導技術;而技術人員進行實驗操作，保證染色質量。在免疫組化切片的制作過程存在多個環節，每一環節的失誤都可能影響檢測結果，如抗原保存，蛋白酶消化，增強技術及對抗體的管理、使用和試劑的濃度等等，因此制作一張高質量的免疫組織化學切片是多方面相互配合的結果。

英瀚斯生物為您整理免疫組化實驗步驟

1、石蠟切片置于65℃烘箱中烘片2h，脫蠟至水，用PBS沖洗三次，每次5min。

2、切片置于EDTA緩沖液中微波修復，中火至沸后斷電，間隔10min低火至沸。

3、自然冷卻后PBS洗3次，每次5min。4、切片放入3%過氧化氫溶液，室溫下孵育10min，以阻斷內源性過氧化物酶。

5、PBS洗3次，每次5min，甩干后5%BSA封閉20min（封閉電荷）。

6、去除BSA液，每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織，4℃過夜。

7、PBS洗3次，每次5min。

8、去除PBS液，每張切片加50μl-100μl相應種屬的二抗，4℃孵育50min。

9、PBS洗3次，每次5min。

10、去除PBS液，每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液，顯微鏡控制顯色。

11、顯色完全后，蒸餾水或自來水沖洗，蘇木素復染，1%鹽酸酒精分化（1s），自來水沖洗，氨水返藍，流水沖洗。

12、切片經過梯度酒精（70-100%）10min一個梯度，脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固。 免疫組化樣本如何處理？

免疫組化的質量控制免疫組化的質量控制是確保實驗結果可靠性和重復性的關鍵步驟。質量控制包括實驗前的抗體驗證、實驗中的陽性對照和陰性對照，以及實驗后的結果評估。抗體驗證是通過Western blot或免疫熒光等方法驗證抗體的特異性和靈敏度。陽性對照是使用已知表達目標蛋白的組織或細胞，確保實驗系統的有效性。陰性對照是使用不表達目標蛋白的組織或細胞，排除非特異性結合。結果評估是通過圖像分析軟件對顯色結果進行定量評估，確保實驗結果的可靠性。做免疫組化意味什么？安徽病理免疫組化檢測

英瀚斯生物自有專業病理染色實驗室，可做免疫組化。安徽病理免疫組化檢測

免疫組化的抗原修復

很多抗原的可視性可以通過抗原修復來提高，抗原修復可以打破福爾馬林固定時形成的蛋白質交聯，從而使被掩藏的抗原顯現出來。抗原修復技術包括不同時間長度的加熱或者利用蛋白酶來做酶消化，例如蛋白酶K，胰蛋白酶或胃蛋白酶。加熱的方法通常會用到微波爐，高壓鍋，蒸箱或水浴。將樣品在接近100°C高溫加熱20分鐘后再冷卻同等的時間。**常用的抗原修復液有a)檸檬酸鹽緩沖劑,pH6.0,b)Tris-EDTA,pH9.0和c)EDTA,pH8.0.如需要可用檸檬酸鹽緩沖劑做抗原修復：檸檬酸鹽緩沖劑配方:10mM檸檬酸鈉,0.05%Tween-20,pH6.0或10mM檸檬酸,0.05%Tween-20,pH6.0將含有檸檬酸鈉或檸檬酸鹽緩沖劑的染色盤放到蒸箱或者水浴中，預熱到95-100°C。將切片浸沒于染色盤中。蓋子虛掩，孵育20-40分鐘(研究者需自己決定比較好的孵育時間)。關掉蒸箱或水浴，將染色盤置于室溫下，讓切片冷卻20分鐘。在TBS-Tween-20中漂洗切片2次，每次2分鐘。開始封閉步驟。 安徽病理免疫組化檢測