免疫組化結果要如何分析？

 （1）陽性著色細胞計數法。在40*光鏡下，隨機選擇不重疊的10個視野，機器或人工計數陽性著色細胞，每組3~6張不同動物組織切片，然后進行組間比較即可。

（2）灰密度分析法。可以通過在不同組別和不同動物組織切片上選擇相同區域、相同條件下用image j進行灰密度分析，然后進行統計分析即可。

（3）評分法。用光學顯微鏡下對組織切片分別按染色程度（0~3分為陰性著色、淡黃色、淺褐色、深褐色）、陽性范圍進行評分（1~4分為0~25%、26~50%、51~75%、76~100%），**終可以分數相加，再進行比較。對于以上這幾種方法，各有利弊，請細心選擇。要想得到正確結果的前提是你要做出著色均勻、背景很淺的高質量切片。

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免疫組化的基本原理 

免疫組化（Immunohistochemistry, IHC）是一種利用抗原-抗體特異性結合的原理，通過顯色反應在組織切片上定位特定蛋白質的技術。該技術結合了免疫學和組織學的優點，能夠在細胞或亞細胞水平上精確顯示目標蛋白的分布和表達情況。免疫組化的基本原理是利用一抗與目標蛋白結合，再通過二抗與一抗結合，通過顯色系統（如DAB）使目標蛋白可視化。這種方法不僅能夠提供蛋白質的定位信息，還能通過半定量分析評估蛋白質的表達水平。 切片免疫組化推薦大鼠、小鼠組織免疫組化，找英瀚斯生物。

確定cancer分期，免疫組化技術應用于臨床可以進行處理哦，英瀚斯生物為您處理。cancer分期是判斷預后的一個指標，與是否浸潤、有無淋巴管或血管侵襲密切相關，而通過免疫組化方法可以判斷cancer是否浸潤、有無淋巴管或血管侵襲。層黏連蛋白和Ⅳ型膠原的單克隆抗體可以清楚的顯示基膜的主要成分，用于區分原位*和浸潤*，一旦上皮性*突破基膜為浸潤，未突破基膜為原位;顯示血管和淋巴管內皮細胞的標記物第八因子相關蛋白、D2-40等則可清楚顯示cancer對血管或淋巴管的浸潤。因此對許多cancer的良惡性鑒別及有無血管或淋巴管浸潤，免疫組化結果作為主要的鑒別依據。

免疫組化結果中的假陰性是指所有抗體標記的切片均呈陰性，無陽性信號，假陰性結果不是真實的反應。導致假陰性結果的原因有:(1)抗原修復方法選擇不當，根據不同的抗原特點采用不同的修復方法，大多數抗體要求熱修復，熱修復又包括高壓修復、微波修復及煮沸熱修復;而對某些細胞內抗原和細胞間質抗原需要用酶消化，如表皮生長因子(EGFR)要求胃蛋白酶(Pepsin)消化，而Vimentin則不用修復;(2)一抗本身的問題:一抗效價降低或失效。在免疫組化中染色結果的假陰性會導致錯診或漏診，進而影響臨床診斷及延誤醫療。解決這一問題的可通過設立陽性對照，比較兩者染色結果。若陽性對照有表達，表明試劑和染色體系及實驗步驟均無問題;若陽性對照無表達，則檢測過程中某一試劑或某個步驟存在問題，應逐一查找原因。病理免疫組化多少錢？

醫療和預后有關的免疫組化。與醫療及預后有關的標記物主要分以下為三類:(1)cancer基因標記物:如cancer基因C-erbB2、c-myc、P53蛋白等，卵巢上皮性cancer中P53的過表達與cancer的擴散、分化、術后殘存cancer灶呈正相關;乳腺cancer中表達C-erbB2的浸潤性cancer患者預后差;肺cancer中突變型P53基因蛋白表達增高，PTEN基因表達減弱，提示cancer預后不良。(2)細胞增殖性標記物:cancer細胞增生是否活躍直接影響著臨床的醫療與預后，如表皮生長因子受體(EGFR)、Ki-67、PCNA、cycling等可對cancer細胞的增生做出評價，表達指數越高，表明其增殖指數越活躍，惡性度增高，預后不良，其中以惡性淋巴瘤乳腺cancer較為明顯;在對乳腺cancer的研究中發現Ki-67、EGFR陽性者，淋巴結轉移率高，并與ji素受體的表達呈負相關。(3)類固醇ji素受體:如雌ji素受體(ER)、孕ji素受體(PR)等，應用更為范圍廣的的是子宮內膜cancer及乳腺cancer，如對乳腺cancer中ER、PR的檢測，有助于決定臨床醫療中是否需要加入內分泌ji素阻斷醫療，并能判斷預后，ER及PR陽性表達、原cancer基因(C-erbB-2)陰性表達病例對三苯氧胺等ji素醫療反應良好，而ERPR、C-erbB-2三種抗體均陰性(TNBC)患者采用三苯氧胺可能意義不大。南京有靠譜的能做免疫組化的公司嗎？切片免疫組化推薦

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免疫組化的局限性，可能會有假陽性。陽性信號定位不正確即為假陽性，包括著色不勻、背景著色、邊緣效應，另外組織的某些特定成分也能導致假陽性結果。假陽性可能的原因有:(1)一抗濃度及一抗是否失效，抗體有一個合適的濃度范圍且必須在有效期內使用，過期的抗體或者不著色，或者背景著色，形成假陽性;(2)試劑未充分覆蓋組織，組織邊緣的試劑易干濃度較組織中間高致深染;(3)抗體孵育時間過長，由于室溫的影響夏季孵育時間稍短，冬季孵育時間稍長;(4)操作過程中組織變干，造成組織邊緣收縮或損壞形成偽影，產生假陽性;(5)3，3'-二氨基聯苯胺(DAB)顯色時間太長，DAB宜現配現用，配制時間比較好在30min以內;(6)由于胞漿里含有較多的蛋白質，因此間質和胞漿中出現很多非特異性的染色，如內源性酶血紅蛋白、肌紅蛋白等造成的著色，可以通過血清封閉解決;乳腺cancer組織中的脂肪細胞、淋巴細胞也會產生非特異性的染色;(7)非特異性抗體吸附常見于壞死組織中，使壞死組織呈較高的背景染色，在免疫組化中應避免選擇壞死組織較多的蠟塊。山西大鼠免疫組化可以做什么