免疫組化實驗所用的組織和細胞標本是什么樣的？

實驗所用主要為組織標本和細胞標本兩大類，前者包括石蠟切片（病理大片和組織芯片）和冰凍切片，后者包括組織印片、細胞爬片和細胞涂片。其中石蠟切片是制作組織標本**常用、**基本的方法，對于組織形態(tài)保存好，且能作連續(xù)切片，有利于各種染色對照觀察；還能長期存檔，供回顧性研究；石蠟切片制作過程對組織內抗原暴露有一定的影響，但可進行抗原修復，是免疫組化中優(yōu)先的組織標本制作方法。

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免疫組化的DAB顯色時間如何把握？

1、DAB顯色時間不是固定的，主要由顯微鏡下控制顯色時間，到出現淺棕色本底時即可沖洗；

2、DAB顯色時間很短（如幾秒或幾十秒）就出現很深的棕褐色，這很可能說明你的抗體濃度過高或抗體孵育時間過長，需要下調抗體濃度或縮短你的抗體孵育時間；

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3、此外，若很短時間就出現背景很深，還有可能你前面的封閉非特異性蛋白不全，需要延長封閉時間；

4、DAB顯色時間很長（如超過十幾分鐘）才出現陽性染色，一方面可能說明你的抗體濃度過低或孵育時間過短（比較好一抗4度過夜）；另一方面就是封閉時間過長。 湖北病理免疫組化推薦英瀚斯生物，專業(yè)承接免疫組化等各類病理染色檢測！

免疫組化在臨床診斷中的應用前景廣闊，尤其是在**診斷和***中的作用越來越被認可。隨著腫瘤免疫***的快速發(fā)展，免疫組化不僅可以用來評估**的免疫表型，還能指導免疫***的選擇。例如，免疫組化可以幫助判斷PD-L1表達水平，為患者是否適合使用免疫檢查點抑制劑提供依據。除此之外，免疫組化在***性疾病、神經退行性疾病等領域的應用也將不斷拓展。隨著分子生物學、病理學和免疫學的深度結合，免疫組化有望成為臨床精細醫(yī)療的重要工具，為醫(yī)生提供更多有力的決策依據，推動個體化***的實施。

免疫組化結果背景染色較深的原因有哪些？

 （1）抗體濃度過高：一抗?jié)舛冗^高是常見的原因之一。解決辦法是，每次使用新抗體前應當對其工作濃度進行測試，使每一抗體個體化，找到適合自己實驗室的理想工作濃度，既使是即用型的抗體也應如此，不能只簡單的按說明書進行染色。

（2）抗體孵育時間過長或溫度較高：解決辦法是，嚴格執(zhí)行操作規(guī)程，比較好隨身佩帶報時表或報時鐘，及時提醒，避免因遺忘而造成時間延長。現在流行的二步法（Polymer）敏感性很高，要求一抗孵育的時間不是傳統的1小時，而是30分鐘，因此，要根據染色結果進行調整。 

（3）DAB變質和顯色時間太長：DAB比較好現用現配，如有沉渣應進行過濾后再用。配制好的DAB不應存放時間太長，因為在沒有酶的情況下，過氧化氫也會游離出氧原子與DAB產生反應而降低DAB的效力，未用完的DAB存放在冰箱里幾天后再用這種似乎節(jié)約的辦法是不可取的。DAB的顯色比較好在顯微鏡下監(jiān)控，達到理想的染色程度時立即終止反應。但是當染**太多時或用染色機時，這樣做似乎不現實，但至少應對一些新的或少用的抗體顯色時進行監(jiān)控，避免顯色時間過長。

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免疫組化的定量分析怎么做？

免疫組化的定量分析是通過圖像分析軟件對顯色結果進行定量評估。免疫組化常用的方法有光密度分析和陽性細胞計數。光密度分析是通過測量顯**域的光密度值，評估目標蛋白的表達水平。免疫組化陽性細胞計數是通過計數顯色陽性的細胞數量，評估目標蛋白的表達水平。定量分析需要考慮多個因素，如顯色強度、背景信號和切片厚度。此外，免疫組化定量分析的結果通常只能進行半定量分析，不能提供***的定量數據。 英瀚斯生物免疫組化，高效高質量出結果。福建免疫組化要多久

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目前幾種常用免疫組化方法簡單介紹

1）免疫熒光方法是**早建立的免疫組織化學技術。由于免疫熒光技術特異性強、靈敏度高、快速簡便，所以在臨床病理診斷、檢驗中應用較廣。它利用抗原抗體特異性結合的原理，先將已知抗體標上熒光素，以此作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原，在熒光顯微鏡下觀察。當抗原抗體復合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會發(fā)出一定波長的熒光，從而可確定組織中某種抗原的定位，進而還可進行定量分析。

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2）免疫酶標方法免疫酶標方法是繼免疫熒光后，于60年代發(fā)展起來的技術。基本原理是先以酶標記的抗體與組織或細胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡，對細胞表面和細胞內的各種抗原成分進行定位研究。免疫酶標技術是目前**常用的技術。本方法與免疫熒光技術相比的主要優(yōu)點是：定位準確，對比度好，染色標本可長期保存，適合于光、電鏡研究等。免疫酶標方法的發(fā)展非常迅速，已經衍生出了多種標記方法，且隨著方法的不斷改進和創(chuàng)新，其特異性和靈敏度都在不斷提高，使用也越來越方便。目前在病理診斷中廣為使用的有ABC法、SP三步法、即用型二步法檢測系統等。

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