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來源: 發布時間:2025-10-17

數字PCR(dPCR)是近年來引起重視并迅速發展起來的一種突破性的核酸定量分析技術。該技術先將核酸模板進行稀釋,分配到大量 的反應單元中,使每個反應單元中只有單個模板分子,然后進行PCR擴增反應,擴增結束后對每個反應室的熒光信號進行統計學分析,來定量DNA拷貝數。數字PCR采用先擴增后定量,因此不依賴擴增曲線的循環閾值(Ct),也無需采用內參基因和標準曲線,準確度高、重現性好,可以實現***定量分析。由于其獨特的技術優勢,已經在臨床診斷、轉基因成分定量、單細胞基因表達分析、環境微生物檢測和下一代測序等研究領域顯示出巨大的優勢和應用前景。浚和(上海)儀器科技有限公司為您提供數字PCR ,歡迎新老客戶來電!海南易操作數字PCR維修

數字PCR

在定量PCR時,我們常常糾結一個問題,究竟是相對定量還是***定量呢?如今,你無需糾結了,因為數字PCR(digitalPCR)來了。盡管這兩種技術有些類似,都是估計起始樣品中的核酸量,但它們有一個重要的區別。定量PCR是依靠標準曲線或參照基因來測定核酸量,而數字PCR則讓你能夠直接數出DNA分子的個數,是對起始樣品的***定量。因此特別適用于依靠Ct值不能很好分辨的應用領域:拷貝數變異、突變檢測、基因相對表達研究(如等位基因不平衡表達)、二代測序結果驗證、miRNA表達分析、單細胞基因表達分析等。黑龍江小型數字PCR維修數字PCR ,就選浚和(上海)儀器科技有限公司,有需求可以來電咨詢!

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數字PCR檢測及分析原理在上世紀90年代就被提出來了,但是無奈受限于當時的技術條件,樣本稀釋及分配都是靠手工來完成的,受到很多因素的干擾和限制;并且結果分析對于研究者來說也十分枯燥與繁瑣,因此在很長一段時間dPCR發展停滯不前。后來由于微流控技術與微納集成制造工藝的發展解決了dPCR過程中的幾個關鍵技術問題,推動了dPCR的研究與商業化的發展。目前根據dPCR樣本稀釋分配的方式,基本可分為三大類,一種是基于大規模集成微流控芯片;第二種是使用微反應室/孔板;第三種是微滴式。但不論是走芯片式還是微滴式,其基本原理都是將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應器或者微滴當中,每個反應器的核酸模板數少于1或者等于1。經過PCR擴增之后,有一個核酸分子的模板的反應器就會給出熒光信號,沒有模板的反應器沒有熒光信號。根據相對比例和反應器的體積,可以推算出原始溶液的核酸濃度。

目前數字PCR技術在臨床領域已經有著非常***且***地應用,例如在病原微生物檢測中的應用:HBV檢測、HIV檢測、甲型流感病毒檢測等;在產前診斷中的應用:13/18/21號染色體三倍體檢測、遺傳性耳聾檢測、地中海貧血檢測及優生五項的病毒檢測等;在**靶向***相關基因檢測中的應用:肺*EGFR基因突變、ALK基因融合檢測、結直腸*KRAS、BRAF基因突變檢測、乳腺*HER2基因擴增檢測、神經膠質瘤IDH基因突變檢測等。以**靶向***相關基因檢測為例,在**形成的超早期,會出現**細胞的壞死和凋亡,這些凋亡或壞死的**細胞會釋放其DNA進入外周血,因此通過分析循環血液中是否含有**特異的游離DNA就可以達到**早期篩查的目的。然而此時DNA含量極低,對檢測的靈敏度和精確性要求極高,目前只有數字PCR技術可以檢測出來。另外進行個體化***時,需要對基因組樣本進行分析,此時利用數字PCR技術也能**提高結果的可信性,進而建立合理***方案。浚和(上海)儀器科技有限公司為您提供數字PCR ,有需求可以來電咨詢!

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無創產前檢查鐮狀細胞貧血(sicklecellanemia)是HBB基因突變引起的常染色體顯性遺傳病,有嚴重的危害,可以導致高達5%的胎兒死亡率及4.62%的孕婦死亡率。而精細有效的無創產前診斷是預防鐮狀細胞貧血患兒出生的有效方法。研究人員采用dPCR技術檢測孕婦胎兒游離DNA(cff-DNA)HBB基因突變。結果顯示,dPCR技術能夠確定87%的男性胎兒(n=45)和75%的女性胎兒(n=20)H BB基因的突變狀態。當cff-DNA濃度大于7%時,可以**的檢測出HBB基因突變[3],可以說是相當厲害了。數字PCR ,就選浚和(上海)儀器科技有限公司。山西立式數字PCR聯系方式

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研究方向無創產前篩查無創傷的產前診斷,如21號染色體為3倍體的唐氏綜合征、已知父母基因型的胎兒地貧檢測或已知父母基因型的其它核酸病檢測(孟德爾相關遺傳疾病)。目前標本來源主要為血液,而待檢測的胎兒DNA受到母體DNA的干擾,影響了檢測的準確性。而QX200檢測系統獨特的微滴化技術完全可以作為二代測序法的補充來進行的無創傷產前診斷,從而提高工作效率及節約成本。轉基 因食品或成分的檢測目前在確定轉基因作物或成分的含量時采取定量PCR的標準曲線法,這種方法需要依賴于已知濃度的標準品(CertifiedReferenceMaterialsCalibrants,CRMCs)。ddPCR***定量的方式可以徹底解決這些標準物質的定標工作。海南易操作數字PCR維修

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