鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法。各個材料及其重量配比為鼠尾膠原蛋白∶聚乙烯醇∶殼聚糖為余量為水，采用冷凍干燥工藝制備。本發明所制備的止血材料主要采用鼠尾膠原蛋白制備，較傳統的止血材料不可吸收、容易引起機體過敏、止血效果差等缺點，本發明所制備的止血材料具有人體內可吸收，生物相容性好；止血效果快，具有很強的親水性；同時可啟動血小板的凝聚，一旦血小板凝聚，就可形成血栓，進而促使血漿結塊阻止血流。同時，膠原表面的特定區域可以與細胞表面存在的類似纖連蛋白的糖蛋白結合，可以起到防止腸粘連的功效。鼠尾膠原醋酸溶解：氯仿的量約為膠原溶液的10%。寧波重慶鼠尾膠原

鼠尾Ⅰ型膠原：組裝液的配置：1.50mmol/L甘氨酸+200mmol/L氯化鉀100mL，用1mol/L氫氧化鈉調節酸堿度至9.2。2.膠原纖維的重構吸取膠原10μL至小培養皿中，倒入0.5mL自組裝液，室溫放置20min。予自組裝液自組裝24h。吸取0.05%戊二醛2mL至小培養皿中，將自組裝24h的膠原浸泡在戊二醛中。然后將膠原經去離子水、50%乙醇、100%乙醇依次漂洗后進行TEM觀察。3.生物礦化形成仿生骨材料靜滴配置鈣磷礦化液將25mL鈣液(10mmol/L二水氯化鈣+150mmol/L氯化鈉+50mmol/L三羥甲基氨基甲烷+0.02%三氮化鈉)倒入燒杯中，滴入聚丙烯(PAA)至濃度350μg/mL；滴加1mol/L的氯化氫，調節酸堿度至7.4，然后緩慢滴入25mL磷液(6mmol/L磷酸氫二鈉)，約16滴/min。唐山正規鼠尾膠原供應商鼠尾膠原、多聚賴氨酸和明膠作為基質包被培養器皿。

鼠尾Ⅰ型膠原：選擇適當的骨修復材料是治好骨缺損的中心環節。目前，臨床上常用的有人工骨移植、自體骨移植和同種異體骨移植。其中，人工骨材料多為磷酸三鈣、半水硫酸鈣等含有鈣和磷的無機礦物材料[1-2]，由于不含自體骨組織中的有機大分子Ⅰ型膠原蛋白，其臨床療效遠遠低于自體骨組織。但是，自體骨移植和同種異體骨移植均來源于人類自身骨組織，數量有限，難以滿足臨床需要。因此，研發與人類自體骨組織化學成分和分子結構相近的仿生骨材料，成為全世界骨組織工程學者孜孜以求的目標。由于天然骨組織是Ⅰ型膠原蛋白和羥基磷灰石鈣生物礦化的產物，在分子結構上，羥基磷灰石鈣晶體是以Ⅰ型膠原纖維為模板，呈片狀鑲嵌在膠原纖維分子間隙，沿著膠原纖維的長軸縱向礦化生長。本研究仿生天然骨組織的分子結構，酸解提取鼠尾肌腱的Ⅰ型膠原蛋白，重構形成Ⅰ型膠原纖維，然后將Ⅰ型膠原纖維放置在礦化液中模擬人體內骨生物礦化，通過透射電子顯微鏡(TEM)和電子衍射觀察羥基磷灰石鈣晶體在膠原纖維內部的骨生物礦化。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便，成本低廉。

一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法：膠原蛋白是脊椎動物和無脊椎動物支持結構的主要組成。在人的身體中這是皮膚、筋、軟骨、骨骼及結締組織的較主要的蛋白質。膠原蛋白占人體蛋白質總量的三分之一，不論來源于哪一種動物或哪一種組織的膠原都有許多共同特性。氨基酸組成中約有三分之一為甘氨酸，有脯氨酸和羥脯氨酸。根據其遺傳分子結構遺傳基因的差別，膠原蛋白分為20幾個亞型。但較為常見的為Ι、Π、ΙΙΙ型膠原蛋白，即間質膠原蛋白。其中I型較為豐富且品質優良。I型膠原蛋白分布非常普遍，是主纖維束的主要成分，給結締組織以強度；是較豐富的膠原蛋白類型，尤其是在皮膚真皮、骨、筋和腱中。使用前需要加入適當體積的細胞培養液預平衡。

酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原及相對分子質量和濃度檢測鼠尾肌腱在醋酸溶液的酸解作用下，其腱性組織被水解成膠凍狀溶液，從而分解成鼠尾Ⅰ型膠原蛋白分子。抽取鼠尾Ⅰ型膠原150μL滴在薄膜上，可形成液滴狀膠原蛋白凝膠(，其生物力學強度極差，一碰即散。將鼠尾膠原蛋白進行SDS-PAGE，結果顯示：Ⅰ型膠原蛋白原液在相對分子質量130000附近有明顯條帶，另一條帶的相對分子質量大于170000(圖2)。膠原蛋白濃度為1.8mg/mL。吸取礦化液倒入小培養皿中，將鼠尾Ⅰ型膠原纖維浸泡在礦化液中。礦化2、6d后，分別將礦化后的Ⅰ型膠原纖維進行TEM和電子衍射觀察。鼠尾膠原醋酸溶解：稀釋一定數量的膠原溶液。金華正規鼠尾膠原進貨價

開蓋在超凈臺上過夜晾干，也可以在室溫放置1小時后。寧波重慶鼠尾膠原

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用說明：不含細胞的三維膠原的制備（以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例）：將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中，加入690ulH2O。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結），立即混勻。再加入100ul10×PBS或10×培養液，混勻后立即加到培養器皿中(混勻后pH為7左右，如果PBS或培養液中沒有加酚紅，初次使用時需要用pH試紙測試)。將培養器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后，轉移到培養箱內。如果配制中使用的是10×PBS，使用前需要加入適當體積的細胞培養液預平衡。寧波重慶鼠尾膠原