總RNA的定義：總RNA=mRNA+tRNA+rRNA，即：總RNA就是指mRNA、tRNA、rRNA的總和。這是在還沒有發現lncRNA等microRNA的時候的概念。但是卻被各大公司默認的概念，一直延續至今。所以各位可以去各大公司的網站，看一看總RNA提取試劑盒案例提供的RNA電泳圖，只有表示總RNA的2條帶——28s和18s；表示microRNA的5s帶，要不沒有，要不很弱。那么mRNA在哪里呢？從RNA電泳圖上能不能看到呢？真正成熟的mRNA，主要集中在28s和18s之間和上下的熒光背景（一般每條基因mRNA量很少，所以，整體一般看不到明顯帶，只表現為28s和18s中間和上下的連續的涂抹帶）。研缽150度烘烤4小時，離心管、吸頭用DEPC處理。徐州昆明RNA提取試劑

RNA提取注意事項：所有實驗所用的泵頭、離心管等消耗品均要使用RNase-free的；整個過程要在無RNase污染的條件下進行，通常可以在無菌操作臺中進行實驗，并用75%的酒精進行擦拭殺菌，如有必要也可在實驗前噴灑一些商用的RNase壓制劑；所有相關溶液的配制要使用RNase-free水或DEPC水(包括75%酒精也需要用無水乙醇與DEPC水配制)；溶液的配制使用移液器進行操作，切勿使用量筒等中間器皿；研缽、研棒、鑷子、剪刀等用錫箔紙包好后，200℃干熱滅菌4h；實驗過程中一定要戴手套和口罩；異丙醇、氯仿、乙醇等試劑要使用未開封的，或者開封之后直接分裝至小容量離心管的，以避免多次使用的交叉污染；南京正規RNA提取試劑銷售廠家RNA提取試劑TRIpure是基于世界上使用較普遍的異硫氰酸胍/酚法研制而成的總RNA抽提試劑。

酵母RNA的提取方法：濃鹽法。酵母菌外層是厚達1.2μm的細胞壁，其化學成分是葡聚糖（30-40%）和甘露聚糖（30%），此外，脂類8.5-13.5%，蛋白質6-8%，還含有幾丁質，酵母菌的葡聚糖，分子是為240000道爾頓，是一種分枝聚合物，葡聚糖與甘露糖之間由蛋白質維系起來。近10%的甘露聚糖的側鏈通過磷酸二酯鍵與磷酸邊接，所有這些連接方式都使得酵母提取物首要的也是關鍵的是如何破壞細胞壁。破壁方法有自溶破壁、酶法破壁等多種方法，而用高濃度鹽溶液處理，同時加熱，以改變細胞的通透性，就可以使核酸從細胞內釋放出來。由于RNA鈉鹽易溶于水,在含鹽的菌體溶液中,RNA有較高的溶解度,這樣,通過控制溫度使蛋白質變性沉淀,通過離心將RNA及蛋白質和脫核酵母菌體分離,從而達到提取之目的。其中食鹽起到自溶促進劑，以及防腐與脫臭的作用。

RNA提取試劑注意事項：1、需自備氯仿，異丙醇，DEPC，75%乙醇(DEPC水配制)，和DEPC水。2、所有離心管，泵頭及相關溶液都必須無RNA酶污染。耐高溫器物可150℃烘烤4小時以去除RNA酶，其它器物去除RNA酶可考慮用0.01%的DEPC水浸泡過夜，然后滅菌，烘干。溶液需用DEPC水配制。加0.01%(體積比)diethylpyrocarbonate(DEPC)至重蒸水或MiliQ級水中，處理過夜，滅菌即成DEPC水。3、使用凍存的細胞或組織抽提總RNA的效果通常比新鮮的細胞或組織差一些。因為在細胞或組織凍融過程中一些細胞或組織內的RNase會被釋放出來并剪切樣品。如果不能及時抽提RNA，推薦先加入適量TRIReagent，并裂解樣品后凍存。普通的提取實驗用國產的試劑盒就足以，價格不高，基本上各地均有現貨。

植物RNA快速提取試劑盒：1.固體組織破碎設備。可用下列裝置之一：1)玻璃勻漿器。泡酸清潔，用高壓滅菌蒸餾水洗滌數次。2)研缽。適用于液氮凍存組織的研磨，清洗方法同玻璃勻漿器。3)高速機械勻漿器(Polytron，Tekmar或類似產品)，打開開關，在蒸餾水中清洗分散器頭數次。2.高壓蒸汽30分鐘消毒一次性吸頭離心管。RNA沉淀溶解之后，應嚴格使用高壓消毒的一次性用品。然而PlantRNAtrip能在RNA酶污染環境下工作，在裂解步驟可使用未高壓但潔凈的一次性吸頭和離心管，但光推薦在緊急情況下這樣做。3.普通雙蒸水，高壓消毒20分鐘。用于沖洗器皿，配制瓊脂糖凝膠和電泳用緩沖液。DEPC處理的雙蒸水。加DEPC到水中至終濃度為0.01%v/v，室溫過夜，高壓消毒30分鐘。用于溶解RNA，配制TE緩沖液和75％乙醇。4.濕冰。在冰上進行操作有助于減少RNA降解。5.其它用品。電泳槽，雙蒸水沖洗。離心機和加樣器，無需處理。6.戴手套。注意某些實驗如提取質粒DNA如使用極大量RNA酶，為防污染，須較全仔細清洗實驗器具和實驗區域。拭子RNA提取試劑的選擇？操作簡便性。正規RNA提取試劑廠家批發價

總RNA提取試劑：適用于植物材料、各種微生物及培養細胞等樣品中提取總RNA。徐州昆明RNA提取試劑

酵母總RNA快速提取試劑盒(離心柱型)：一、原理簡介。改進的異硫氰酸胍/酚一步法裂解細胞和滅活RNA酶，然后總RNA在高離序鹽狀態下選擇性吸附于離心柱內硅基質膜，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟,去蛋白液和漂洗液將細胞代謝物、蛋白等雜質去除，較后低鹽的RNasefreewater將純凈RNA從硅基質膜上洗脫。二、試劑盒特點：1、離心吸附柱內硅基質膜全部采用進口世界有名公司特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復性好。克服了國產試劑盒膜質量不穩定的弊端。2、結合了異硫氰酸胍/酚一步法試劑穩定性好，純度高和離心柱方便快捷的優點，不需要異丙醇沉淀和乙醇洗滌過程，RNA可以直接從離心柱上洗脫避免了過度干燥不易溶解問題。3、獨有的RL裂解液配方，可以有效的消除基因組污染。4、多次漂洗去蛋白過程，提取RNA純度更高。5、有效的去除了無用的5S在總RNA中含量，提高了純度~徐州昆明RNA提取試劑

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