細(xì)胞凍存經(jīng)驗(yàn)談:選對(duì)凍存培養(yǎng)基才是王道：研究人員經(jīng)常需要冷凍細(xì)胞并保存，以供后續(xù)實(shí)驗(yàn)或臨床使用。基本過(guò)程相當(dāng)簡(jiǎn)單：慢慢冷凍細(xì)胞，將凍存管放入液氮中，并在需要時(shí)快速解凍。凍存培養(yǎng)基能支持細(xì)胞并防止冰晶形成。不過(guò)，Malfavon的體驗(yàn)告訴我們，使用不同的凍存培養(yǎng)基，結(jié)果那可是大不同。一些經(jīng)驗(yàn)老道的研究人員自己制備凍存培養(yǎng)基。不過(guò)，那些面對(duì)脆弱細(xì)胞（比如原代和多能細(xì)胞）的研究人員，則更喜歡購(gòu)買標(biāo)準(zhǔn)化的商業(yè)產(chǎn)品。一些非常敏感的細(xì)胞系也許能從添加物中受益，以避免細(xì)胞在解凍時(shí)凋亡。無(wú)血清凍存液使用方法：將加有凍存液的細(xì)胞懸液分裝至凍存管中。南京無(wú)血清細(xì)胞凍存液哪家好

細(xì)胞凍存和復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)：一般來(lái)說(shuō)，細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)移和保存，較佳的策略是進(jìn)行低溫保存（-70℃~-196℃），而細(xì)胞深低溫保存的基本原理是：在-70℃以下時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的酶活性均已停止，即代謝處于完全停止?fàn)顟B(tài)，故而可以長(zhǎng)期保存。細(xì)胞低溫保存的關(guān)鍵，在于通過(guò)0~20℃階段的處理過(guò)程，在此溫度范圍內(nèi)，冰晶呈針狀，極易招致細(xì)胞的嚴(yán)重?fù)p傷。經(jīng)過(guò)前人的長(zhǎng)期試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的凍存及復(fù)蘇基本原則是慢凍速融，這樣可以較大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷。珠海正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液廠家批發(fā)價(jià)將融化后的含細(xì)胞的冷凍保存液迅速析出置于新鮮培養(yǎng)基中充分混勻。

如何提高細(xì)胞凍存成功率：無(wú)菌！無(wú)菌！無(wú)菌！要折騰嬌貴的細(xì)胞寶寶，必須要在無(wú)菌超凈環(huán)境下才行。超凈工作臺(tái)，所有的儀器用品提前滅菌，培養(yǎng)箱什么的定期用酒精擦干凈。微生物污染對(duì)細(xì)胞的影響經(jīng)常是開始的時(shí)候沒(méi)發(fā)現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)的時(shí)候已經(jīng)結(jié)束了，所以千萬(wàn)要小心。除了操作中的各種小細(xì)節(jié)，還有一個(gè)實(shí)驗(yàn)雷區(qū)，就是配制細(xì)胞凍存液。常見的凍存液配制要遵循培養(yǎng)基+血清+DMSO的成分要求，根據(jù)細(xì)胞實(shí)際判斷成分配比，還建議使用程控儀，注意配制溫度，一個(gè)不小心就又會(huì)影響細(xì)胞的存活效果。

以前在另一家實(shí)驗(yàn)室的時(shí)候，凍存細(xì)胞根本就沒(méi)有講究這些標(biāo)準(zhǔn)操作。凍存的細(xì)胞有293T、PT67、C2C12、MEF(鼠胚胎成纖維細(xì)胞）、HelaS3、HelaD、U2OS、HKC、RK3E、ECO、H292、HSY、COS7、SupT1等。將細(xì)胞酶消化后直接參與離心，加入凍存液（含90%的血清和10%的DMS0)，直接放在-80℃冰箱。兩三天后移入液氮中，較久保存，幾年后細(xì)胞的活力仍沒(méi)有什么受損，照常能復(fù)蘇，成活率高。但有三點(diǎn)須注意：（1）一是細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)要好，不能長(zhǎng)得過(guò)稀，同樣也不能過(guò)密，細(xì)胞的狀態(tài)看起來(lái)相當(dāng)健康。70%密度的要保存的細(xì)胞須再長(zhǎng)24h才能全滿，萬(wàn)一細(xì)胞狀態(tài)不好，可以酶消化后再繁殖一次；（2）凍存細(xì)胞的量要留心，不能太密也不能太稀，一般1OOmm培養(yǎng)皿的細(xì)胞凍存為3~4管；（3）存放在-80℃冰箱的時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)，一兩天后轉(zhuǎn)移到液氮罐里。我們也曾取出存放在-80℃冰箱的細(xì)胞，半年還有30%~50%的細(xì)胞有活性，但一年的細(xì)胞就沒(méi)有活的。無(wú)血清凍存液特性：不需回溫，完全即用型。

細(xì)胞凍存：取出凍存管，注明細(xì)胞名稱，代數(shù)，日期。離心后，以無(wú)菌吸管吸棄上清，不要吸到底部的細(xì)胞沉淀。將細(xì)胞沉淀與凍存液充分混勻，根據(jù)計(jì)數(shù)結(jié)果，將細(xì)胞總數(shù)調(diào)節(jié)成細(xì)胞數(shù)量為5-10*105/ml為宜。將細(xì)胞凍存懸液分裝進(jìn)細(xì)胞凍存管中，一般2ml的凍存管中裝入1-1.5ml凍存液為宜。嚴(yán)密封口后，使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1℃。或者，將裝有細(xì)胞的凍存管放入異丙的醇凍存盒中，然后將凍存盒置于–80℃條件下過(guò)夜。若無(wú)凍存盒及其他凍存裝置，可以先將凍存管置于4℃30min，再-20℃凍存1h直至完全冷凍，再轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱過(guò)夜。第二天將已經(jīng)冷凍的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到液氮容器中，置于液氮上方的氣相空間中儲(chǔ)存無(wú)血清凍存液特性：不含動(dòng)物成分。廈門南昌無(wú)血清細(xì)胞凍存液

待凍存管中細(xì)胞混合液完全融化后，立即加入1 ml細(xì)胞培養(yǎng)基于該冷凍管中與細(xì)胞混合。南京無(wú)血清細(xì)胞凍存液哪家好

無(wú)血清凍存液使用方法：1、收集懸浮細(xì)胞或貼壁細(xì)胞，離心去除上清培養(yǎng)液。2、加入適量的細(xì)胞凍存液，重懸細(xì)胞，調(diào)節(jié)密度至1-5x10*↑/mL。3、將加有凍存液的細(xì)胞懸液分裝至凍存管中。4、將凍存管直接轉(zhuǎn)移至-80C水箱中冷凍保存。5、儲(chǔ)存條件：2-8C保存，年有效：-20C保存，兩年有效。無(wú)血清凍存液注意事項(xiàng)：1、請(qǐng)選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行凍存。2、凍存液加入細(xì)胞后，請(qǐng)盡快放入-80C冰箱凍存。3、本產(chǎn)品凍存細(xì)胞可以在-80°C冰箱保存3年以上。4、若需長(zhǎng)期凍存細(xì)胞，請(qǐng)轉(zhuǎn)移至液氮罐中貯存。5、凍存液中含DMSO成分，為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套。南京無(wú)血清細(xì)胞凍存液哪家好