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來源: 發布時間:2025-03-19

外泌體的提取方法:1.超速離心法(差速離心)。超離法是較常用的外泌體純化手段,采用低速離心、高速離心交替進行,可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡單,獲得的囊泡數量較多而廣受歡迎,但過程比較費時,且回收率不穩定(可能與轉子類型有關),純度也受到質疑;此外,重復離心操作還有可能對囊泡造成損害,從而降低其質量。2.密度梯度離心。在超速離心力作用下,使蔗糖溶液形成從低到高連續分布的密度階層,是一種區帶分離法。通過密度梯度離心,樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,但步驟繁瑣,耗時,對離心時間極為敏感。來源于細胞內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中。重慶正規外泌體提取試劑廠家批發價

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PS不是你想有,想有就能有,迄今為止所發現的外泌體,并非所有的外膜表面都暴露PS。例如,細菌來源的外泌體膜表面沒有PS,因此,本款試劑不能提取這種外泌體。現在的研究尚未得知是否所有的外泌體上都會露出PS,但是上述的外泌體標記根據細胞種類不同表現出的信號強弱差大,通過利用本試劑盒PS親和法捕捉、提取外泌體是較好的方法。:這個MagCapture?ExosomeIsolationKitPS,1次提取的外泌體量大概是多少?實驗樣品的種類和體積不同,提取的外泌體量也不一樣。Wako的操作實例中,一次提取操作可獲得蛋白量約30μg/mL(BCA法檢測),粒子數1~2×1010(NanoSightLM10檢測)(經莫能菌素鈉刺激外泌體分泌的K562培養上清5mL濃縮為1mL后,對其進行提取)。另外,和光驗證了從1mL正常人混合血清提取一次,可回收約34μg/mL蛋白質(BCA法檢測),約5×109/mL的粒子數(NanoSightLM10檢測)。本試劑盒終可獲得100μL的洗脫液。金華外泌體提取試劑靜置10~15分鐘,留取沉淀物備用。

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1983年,外泌體初次于綿羊網織紅細胞中被發現,1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細胞在正常及病理狀態下均可分泌外泌體。其主要來源于細胞內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中。所有培養的細胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應功能的精確分子機制剛剛開始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,參與細胞間通訊,對外泌體的研究興趣日益增長,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創診斷的開發。如何高效地提取外泌體是實現這項新興液體活檢技術臨床常規化應用的關鍵

外泌體(exosomes)是活細胞經過"內吞-融合-外排"等一系列調控過程而形成的膜性囊泡,來源于晚期核內體(也稱為多囊泡體),直徑約為30-150nm,密度在1.13-1.21g/ml,天然存在于血液、唾液、尿液及母乳等體液中,同時外泌體也存在于組織和細胞間隙中。人體中幾乎所有類型的細胞均能產生外泌體,人體中大約有1014個外泌體,大約平均每個細胞產生1000-10000個。外泌體中含有核酸(DNA、miRNA、lncRNA、mRNA、tRF等)、蛋白和脂類,在細胞間物質和信息轉導中發揮重要作用,研究表明其在干細胞、免疫調控、瘤轉移、血管生成以及生物標志物等領域都發揮著不可替代的作用。通過超速離心(120000g/分鐘)20小時以上才能獲得足夠的外泌體量。

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外泌體鑒定:外泌體分離之后,需要經過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標志物,多角度進行鑒定。l透射電鏡鑒定法:簡稱TEM,適合外泌體雙層囊膜超微結構觀察,即通常為茶托型或一側凹陷的半球形。l納米顆粒追蹤分析法:簡稱NTA,該方法能保證外泌體原始狀態、檢測速度快,檢測后能提供外泌體粒徑和濃度信息。lWesternblot分子標志物檢測:外泌體標志蛋白包括四跨膜蛋白家族,如CD9、CD63和CD81;細胞質蛋白,如肌動蛋白(Actin)和鈣磷脂結合蛋白(Annexins);使用可截留100KD分子量的膜,通過離心截留上清中的外泌體,截留完成后。外泌體的提取方法:密度梯度離心。太原正規外泌體提取試劑廠家

將沉淀物用PBS緩沖液進行懸浮,使外泌體懸浮于液體上層。重慶正規外泌體提取試劑廠家批發價

外泌體的提取分離:1、超濾離心。由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,大于一般蛋白質,利用不同截留相對分子質量(MWCO)的超濾膜對樣品進行選擇性分離,便可獲得外泌體。超濾離心法簡單高效,且不影響外泌體的生物活性,是提取細胞外泌體的一種新方法。2、磁珠免疫法。外泌體表面有其特異性標記物(如CD63、CD9蛋白),用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結合,即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡便、不影響外泌體形態完整等優點,但是效率低,外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,不利于下游實驗,難以普遍普及。重慶正規外泌體提取試劑廠家批發價

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