RNA的提取：眾所周知，Trizol是一種RNA提取試劑，內(nèi)含異硫氰酸胍和酚等物質(zhì)，能迅速破碎細(xì)胞和溶解細(xì)胞中的其他成分，壓制細(xì)胞釋放出核酸酶，維持細(xì)胞中RNA的穩(wěn)定性，我們可以在反應(yīng)物中加入Trizol后搖勻，在加入氯仿離心，這樣的話我們的RNA就進(jìn)入了水相中，再用異丙醇沉淀水相中的RNA，即可達(dá)到提取總RNA的目的了。首先我們需要稱取一定量的預(yù)處理好的廢酵母配10%左右的酵母溶液,在一定溫度下,加入一定濃度的氯化鈉,之后加入NaOH溶液調(diào)節(jié)反應(yīng)的pH,攪拌抽提一定時(shí)間后,離心分離上清液,調(diào)節(jié)pH至等電點(diǎn),經(jīng)酒精沉淀獲得核糖核酸,用水定容至100mL取1m適當(dāng)稀釋,調(diào)pH7.0,這樣的話RNA就出現(xiàn)了，分別測(cè)定吸光值A(chǔ)260和A280并計(jì)算A260/A280，就可以測(cè)定RNA的提取率了。當(dāng)然啦，我們還可以進(jìn)行深入研究，如測(cè)定Nacl的濃度，PH的大小，以及抽提時(shí)間對(duì)RNA提取率的影響啦。適用樣品：全血，哺乳動(dòng)物細(xì)胞，細(xì)菌細(xì)胞和菌類細(xì)胞。重慶正規(guī)RNA提取試劑廠家

Trizol是一種總RNA抽提試劑，內(nèi)含異硫氰酸胍等物質(zhì)，能迅速裂解細(xì)胞，壓制細(xì)胞釋放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法進(jìn)行提取組織或細(xì)胞中的RNA。原理:在勻質(zhì)化或溶解樣品中，Trizol試劑可保持RNA的完整性，同時(shí)能破壞細(xì)胞及溶解細(xì)胞成分。加入氯仿離心后，裂解液分層成水相和有機(jī)相。RNA存在于水相中。水相轉(zhuǎn)移后，RNA通過異丙醇沉淀回收。移去水相后，用乙醇可從中間相沉淀得到DNA，加入異丙醇沉淀可從有機(jī)相得到蛋白質(zhì)。異硫氰酸胍氯化銫超速離心法:原理：使用蛋白質(zhì)變性劑異硫氰酸胍有效壓制RNA酶的活性，經(jīng)過起始密度為1.78g/ml的氯化銫介質(zhì)，進(jìn)行密度梯度超速離心，RNA沉淀于管底，而DNA與蛋白質(zhì)在上清液中。使用這種方法，不但能得到高質(zhì)量的RNA，而且能同時(shí)分離出細(xì)胞染色體DNA。重慶正規(guī)RNA提取試劑廠家異硫氰酸胍屬于解偶劑，是一類強(qiáng)力的蛋白質(zhì)變性劑，可溶解蛋白質(zhì)。

常用總RNA提取試劑：異硫氰酸胍法和Trizol法是動(dòng)物組織及動(dòng)物細(xì)胞總RNA提取較常用的方法，異硫氰酸胍法操作簡(jiǎn)單快捷，適用于樣本足夠大的常規(guī)動(dòng)物組織；Trizol法裂解能力較強(qiáng)，尤其適合小樣本及特別難提取的組織，如兔子皮膚，動(dòng)物結(jié)締組織等總RNA的提取；另外Trizol作為一種通用型的裂解試劑，還可以用于植物組織、細(xì)菌、菌類等組織的提取。對(duì)于含多糖多酚的植物組織如油茶、茶葉、油菜等還可以使用CTAB法進(jìn)行總RNA的提取。提取RNA時(shí)我們經(jīng)常遇到的問題是：(1)RNA產(chǎn)量較低；(2)RNA有嚴(yán)重的鹽類污染；(3)RNA有嚴(yán)重的有機(jī)溶劑污染；(4)樣品降解等問題。

石蠟包埋組織RNA快速提取試劑盒（離心柱型）：原理簡(jiǎn)介：改進(jìn)的異硫氰酸胍/酚一步法裂解細(xì)胞和滅活RNA酶，然后總RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟，漂洗液將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除，較后低鹽的RNasefreewater將純凈RNA（RNA）從硅基質(zhì)膜上洗脫。試劑盒特點(diǎn)：1、離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界有名公司特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好。克服了國(guó)產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。2、結(jié)合了異硫氰酸胍/酚一步法試劑穩(wěn)定性好，純度高和離心柱方便快捷的優(yōu)點(diǎn)，不需要異丙醇沉淀和乙醇洗滌過程，RNA可以直接從離心柱上洗脫避免了過度干燥不易溶解問題。3、獨(dú)有的MRL裂解液配方，可以有效的消除基因組污染。4、多次漂洗去蛋白過程，提取RNA純度更高~植物RNA提取試劑產(chǎn)品特點(diǎn)：是富含多酚或淀粉的植物組織中，提取高純度的總RNA。

RNA提取試劑TRIpure是基于世界上使用較普遍的異硫氰酸胍/酚法研制而成的總RNA抽提試劑。在破碎和溶解細(xì)胞時(shí)能保持RNA的完整性。無論是人、動(dòng)物、植物還是細(xì)菌組織，該方法對(duì)少量的組織(50-100mg)和細(xì)胞(5×106)以及大量的組織(≥1g)和細(xì)胞(>107)均有較好的分離效果。TRIpure試劑操作上的簡(jiǎn)單性允許同時(shí)處理多個(gè)樣品，所有的操作可以在一小時(shí)內(nèi)完成。TRIpure抽提的總RNA能夠避免DNA和蛋白的污染，故而能夠作RNA印跡分析、斑點(diǎn)雜交、poly(A)+選擇、體外翻譯、RNA酶保護(hù)分析和分子克隆等。和進(jìn)口品牌實(shí)驗(yàn)對(duì)照顯示，公司的產(chǎn)品質(zhì)量已經(jīng)達(dá)到甚至超過了進(jìn)口產(chǎn)品的質(zhì)量~較佳方法是保證樣品完全裂解，但相同的裂解方案換了一個(gè)樣本可能就沒轍了。無錫正規(guī)RNA提取試劑供應(yīng)商

總RNA提取試劑：自備新開封或?qū)ｉT氯仿，異丙醇，75%乙醇，DEPC處理水。重慶正規(guī)RNA提取試劑廠家

RNA提取醇沉淀不是越多就越好。有些實(shí)驗(yàn)方案會(huì)推薦，在異丙醇沉淀后，用乙醇沉淀兩次。實(shí)際上，任何提取實(shí)驗(yàn)，都會(huì)在純度和得率這一對(duì)矛盾中取舍。醇沉淀會(huì)將脂溶性雜質(zhì)去掉，但部分非脂溶性的雜質(zhì)依然會(huì)連同RNA一起被沉淀下來。因此，多整幾次，并不會(huì)讓RNA的純度翻倍，反而還會(huì)有降低得率的風(fēng)險(xiǎn)。一般情況下，異丙醇和乙醇各沉淀一次即可。但是，倘若預(yù)計(jì)RNA濃度很低，那就只能放棄純度，在低溫沉淀數(shù)小時(shí)，以換來較高的得率。圍繞DEPC的玄學(xué)。許多實(shí)驗(yàn)方案會(huì)推薦使用0.1%DEPC處理RNA相關(guān)用水，以滅活RNase。這一點(diǎn)是要肯定的。不過，在使用DEPC的過程中，又充斥著一些玄學(xué)。高壓滅菌后的DEPC水，會(huì)有一股“香甜”的味道。許多人會(huì)以為那是殘留的DEPC而不敢用。實(shí)際上，這只是DEPC分解成CO2和乙醇后，產(chǎn)生的一些揮發(fā)性酯類副產(chǎn)物。重慶正規(guī)RNA提取試劑廠家