分光光度計使用注意事項1、紫外可見分光光度計在開機前將樣品室內的干燥劑取出,儀器自檢過程中禁止打開樣品室蓋。2、筆式PH計測定時,禁止將試劑或液體物質放在儀器的表面上,如有溶液溢出或其它原因將樣品槽弄臟,要盡可能及時清理干凈。3、比色皿內溶液以皿高的2/3~4/5為宜,不可過滿以防液體溢出腐蝕儀器。測定時應保持比色皿清潔,池壁上液滴應用擦鏡紙擦干,切勿用手捏透光面。測定紫外波長時,需選用石英比色皿。4、實驗結束后將比色皿中的溶液倒盡,然后用蒸餾水或有機溶劑沖洗比色皿至干凈,倒立晾干。關電源將干燥劑放入樣品室內,蓋上防塵罩,做好使用登記,得到管理老師認可方可離開。一般連續光源主要用于分子吸收光譜法。中國紫外可見分光光度計賣價
紫外可見分光光度計等光譜分析儀器的主要部件:樣品容器不同的光譜儀中,樣品容器的結構差異較大,在反射光譜儀中甚至沒有專門的樣品容器,在吸收光譜中,樣品容器也稱為吸收池。吸收池一般由光透明的材料制成。在紫外光區,采用石英材料;可見光區,則用硅酸鹽玻璃;紅外光區,則可根據不同的波長范圍選用不同材料的晶體制成吸收池的窗口。檢測器檢測器是將一種類型的信號轉變成另一種類型的信號的器件,如在分光光度計中的光電管,是將光能轉變成電能的元件。檢測器可分為兩類,一類對光子有響應的光檢測器,另一類為對熱產生響應的熱檢測器。光檢測器有硒光電池、光電管、光電倍增管、半導體等。熱檢測器是吸牧輻射并根據吸收引起的熱效應來測量人射的強度,包括真空熱電偶、熱釋電檢測器等。 常見紫外可見分光光度計比較分子的紫外可見吸收光譜是由于分子中的某些基團吸收了紫外可見輻射光后,電子能級躍遷而產生的吸收光譜。
一般來說,紫外光分光光度計分為單光束和雙光束兩類。顧名思義,單光束型主要是依賴單束光進行測量。一束給定波長的光通過對照物,然后再通過實際樣品溶液,就能得到吸光結果。雙光束型則是通過一個斬光輪(mirroredchopperwheel)將一束光分成兩束,分別測量對照樣品和實際樣品。可以很小化光漂移(lampdrift)和減少測量時間。一些雙光型光度計不利用斬光輪,而是利用一種光束分光器來代替,將一束光分成兩束平行的光然后同時測量對照樣品和目的樣品。因為增加了測量的速度,所以雙光束分光光度計在測量一些溶液隨時間動態變化的研究中大有用處。分光光度計的光譜也是需要考慮的一個重要因素。實驗室研究人員希望省錢購入專門儀器定量核酸、蛋白或者細菌的生長情況。例如AmershamBiosciencesofPiscataway公司的GeneQuantII能在230、260、280、320、595和600nm的波長下測量樣品。果果需要更大的靈活性,研究者可以考慮一種更高性能的寬光譜儀器,可以程序性地進行ELISAs分析和比色分析。
分光光度計的簡單原理:分光光度計采用一個可以產生多個波長的光源,通過系列分光裝置,從而產生特定波長的光源,光源透過測試的樣品后,部分光源被吸收,計算樣品的吸光值,從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。核酸的定量:核酸的定量是分光光度計使用頻率比較高的功能。可以定量溶于緩沖液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA,以及RNA。核酸的比較高吸收峰的吸收波長260nm。每種核酸的分子構成不一,因此其換算系數不同。定量不同類型的核酸,事先要選擇對應的系數。如:1OD的吸光值分別相當于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。測試后的吸光值經過上述系數的換算,從而得出相應的樣品濃度。測試前,選擇正確的程序,輸入原液和稀釋液的體積,爾后測試空白液和樣品液。然而,實驗并非一帆風順。讀數不穩定可能是實驗者的問題。靈敏度越高的儀器,表現出的吸光值漂移越大。 單色器的功能是將光源發出的復合光分解并從中分出所需波長的單色光。
紫外可見分光光度計在有機分析中的應用分析。利用特征吸收峰法鑒別有關物質利用某些化合物在紫外區的特征吸收峰,可以判別物質。如,氯霉素分子中的硝基是由它的紫外光譜確定的。在紫外區的298nm和278nm處,氯霉素會出現芳香硝基的特征吸收峰。五元環酮和羧基酯的紅外光譜特征吸收峰都在1740cm-1附近,因此,用紅外光譜法,難以區分它們。但是,在紫外光譜中,只有五元環酮在210nm以上有吸收,因此,可以鑒別。(2)利用紫外光譜譜圖的方法鑒別有機化合物通過對比兩個有機化合物的紫外光譜圖,可以鑒別它們。(3)利用π鍵反應減小干擾在紫外可見分光光度計的使用過程中,有時很強的吸收會引起干擾作用,如:有些稠環化合物對某些波長的吸收就很強,這時,可采用化學,c鍵反應去除。例如有機化合物蒽具有三個大冗鍵,在波長252nm處有溝吸收,它的摩爾吸光系數會對一些在此也有吸收的化合物產生干擾,可讓它與丁烯二酸酐發生Diels-Alder加成反應。這個反應的結果,原來三個大π鍵的共軛系統就被破壞,原先很強的吸收就被減弱,干擾就會減小。 光源必須具有足夠的輸出功率和穩定性。常見紫外可見分光光度計比較
紫外可見分光光度計主要特點:普遍的應用領域。中國紫外可見分光光度計賣價
樣品吸光度會受到透射比的強烈影響,兩者之間存在A=logT這個關系式,其中A指的是樣品吸光度,T指的是透射比,當投射比也就是T的誤差較大的時候,那么就會使樣品吸光度也就是A的誤差更加大。所以,假如透射比不夠準確,那么就會影響到紫外可見分光光度計檢定中的數據的準確性,透射比的準確性會受到波長,比色皿托盤不正,光密封不到位,光譜帶寬變化等等因素的影響,導致透射比的誤差超出范圍,從而導致儀器測量的不準確性可能加大。中國紫外可見分光光度計賣價
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