紫外可見分光光度計的主要類型:雙光束分光光度計。雙光束紫外可見分光光度計就是有兩束單色光的紫外可見分光光度計。其光路設計基本上與單光束分光光度計相似。區(qū)別是在單色器與吸收弛之間加了一個切光器,其作用是以一定的頻率把一個光束交替分為強度相等的兩柬光,使一路通過參比溶液,另一路通過樣品溶液。然后由檢測器交替接收參比信號和樣品信號。接收的光信號轉變成電信號后,由前置放大器放大,并進一步解調、放大、補償?shù)龋Y尾由顯示系統(tǒng)顯示。其光路系統(tǒng)。實驗室研究人員希望省錢購入專門儀器定量核酸、蛋白或者細菌的生長情況。雙光束紫外可見分光光度計怎么樣
購買紫外可見分光光度計需注意幾點:1、雜散光。它指不應該有光的地方有了光。它是光譜測量中誤差的主要來源。這個值當然越小越好了。2、光度準確度。光度準確度指實際測量的光度讀數(shù)值與真值之差。它是用戶對儀器的直接要求,每個用戶都必須重視。3、噪聲。噪聲也是儀器的重要指標之一。它表征儀器的做稀溶液的能力。這個指標也是越小越好。4、光譜帶寬。指從單色器射出的單色光譜線強度輪廓曲線的1/2高度處的譜帶寬度。表征儀器的光譜分辨率。按照比耳定律,光譜帶寬應該是越小越好的,但是如果儀器的光源能量弱,光學傳感器的靈敏度低時,光譜帶寬小了,也得不到理想的測量結果的。所以,選擇和使用儀器時一定注意。全自動紫外可見分光光度計排名紫外可見分光光度計的具體使用方法。
波長小于200nm的紫外光會被空氣吸收,只能在真空中傳播,因此稱為真空紫外(VUV)。因此,普通的UV-Vis吸收光譜儀不能測量200nm以下的信號。如果要測量VUV波段光譜,需要保持光路真空,光譜儀結構會更加復雜,也更加昂貴。①單光束UV:傳統(tǒng)的紫外,單光源發(fā)射單光束,全程密閉,通過光柵,照射樣品,由光電倍增管監(jiān)測器檢測。缺點:測完空白再測試樣品,全波段分析時間較長(一般2min)。②比例雙光束UV:單光源單光束,全程密閉,通過光柵,加入棱鏡,把光分為兩束,分別照射樣品與空白,再合并光,進入光電倍增管檢測器,通過差減法計算結果。好處:空白樣品同時檢測。缺點:靈敏度下降,全波段分析時間較長
原子吸收分光光度計波長重復性的測試方法:波長重復性的測試方法,一般是在波長準確度的三次(或五次)測試的結果中,取較大值與較小值之差作為波長重復性。也可取三次測試的平均值,與三次測試中的較大值(或較小值)之差作為波長重復性。還可用多次測試曲線的包絡線的中線的較大值與較小值之差作為波長重復性。具體操作比較簡單,此不贅述。需要注意的是,不能說某原子吸收分光光度計的波長重復性為“0”。比如:某研究人員對設計波長重復性指標為0.2nm的原子吸收分光光度計進行檢測后,在自檢報告中寫到:“實測波長重復性數(shù)據(jù)為0”。其實正確的寫法應是:波長重復性優(yōu)于0.2nm,或小于0.2nm。紫外分光光度計的光柵是一系列等寬、等距離的平行狹縫,以光的衍射現(xiàn)象和干涉現(xiàn)象為基礎。
為了保障在190~1100nm區(qū)域內的高信噪比,目前的儀器均采用兩只光源燈互補使用,即在紫外區(qū)采用氘燈,而在可見區(qū)使用鎢燈,兩只燈的選擇采用旋轉光源鏡來切換。眾所周知,紫外可見分光光度計的光源部需要經(jīng)常更換光源燈(鎢燈或氘燈),一般來說這種工作均由儀器廠家的工程師來進行;如果儀器用戶自己可以掌握這種更換和調整技術,既能節(jié)約等待時間又能節(jié)省維修費用,可謂一舉兩得。雖然有些用戶也曾經(jīng)自行嘗試過這種工作,但往往效果不太理想,究其原因則是沒有掌握要領,他們將這種更換光源燈的工作看做與更換室內照明燈泡的性質一樣,認為只要換上的光源燈被亮即萬事大吉;為此,我談談這方面的調整要領。一般簡易型分光光度計的光源室**設計了一支鎢燈來涵蓋整個波長區(qū)域的使用,由于鎢燈的能量在紫外區(qū)很弱,因此、此類儀器在紫外區(qū)的測量信號的噪聲較大。也有**的紫外分光光度計,同理、光源燈就改用一支氘燈了。檢測器的功能是通過光電轉換元件檢測透過光的強度,將光信號轉變成電信號。水質紫外可見分光光度計單價
紫外可見分光光度計的日常維護:溫度和濕度是影響儀器性能的重要因素。雙光束紫外可見分光光度計怎么樣
紫外-可見吸收光譜為什么有些化合物是有色的,而另一些化合物卻沒有?共軛與顏色有什么關系?我們必須對光譜中可見光部分和附近的不同波長處的光吸收進行精確測量。商業(yè)光譜儀可對光譜中近紫外和可見部分光吸收進行精確測量。可見光區(qū)域的光子能量為36-72kcal/mol,近紫外線區(qū)域(至200nm)的能量范圍擴展至143kcal/mole。波長小于200nm的紫外線輻射難以處理,因此很少用作結構分析的常規(guī)工具。當一束光照射物質時,上述能量會激發(fā)分子電子至更高能量的軌道。下圖顯示了有機分子中發(fā)生的各種電子激發(fā)的示意圖,其包含六個躍遷。通常,只有三個低能量躍遷是通過200至800nm光的能量實現(xiàn)的,也就是說,能夠吸收200-800nm區(qū)域光的分子應具有π電子系統(tǒng)和具有未成對電子對的雜原子。這種吸光基團稱為生色團。當樣品分子暴露于具有與分子內可能的電子躍遷相匹配能量的光時,電子受光子激發(fā)從高的占據(jù)分子軌道(HOMO)躍遷到低的未占據(jù)分子軌道(LUMO),一些光能將被吸收,所產生的物質稱為激發(fā)態(tài)物質。光譜儀記錄吸收波長以及每個波長的吸收程度,所得光譜用吸光度(A)與波長的關系圖表示。吸光度通常在0(無吸收)到2(99%吸收)的范圍內。雙光束紫外可見分光光度計怎么樣