本課題在體外分離、培養和鑒定人牙髓干細胞、牙周膜干細胞及根尖牙rutou干細胞的基礎上，通過比較體內、外不同培養模式下，血小板裂解液對這三種牙源性干細胞增殖及分化的影響，以期找到PL應用于牙源性干細胞培養、誘導分化的較好方式，為研究相關機制及組織工程應用提供實驗基礎，同時為將來PL在臨床zhiliao方面的應用提供新的思路。結果如下。1.牙髓干細胞、根尖牙rutou干細胞和牙周膜干細胞的分離、培養和鑒定使用酶消化法或組織塊法分離獲得人原代DPSCs、SCAP和PDLSCs，利用有限稀釋法克隆化培養以純化傳代細胞；采用免疫細胞染色及流式細胞儀鑒定細胞STRO-1等表型，確定所獲細胞的間充質干細胞屬性。采用成脂誘導及成骨/成牙本質誘導驗證細胞的多向分化能力。2.血小板裂解液的制備及相關培養體系的建立使用10人份機**小板，混合后利用凍融裂解法制得滿足實驗需要的血小板裂解液PL；將PL制成品以一定的體積濃度比加入普通培養基及礦化誘導培養基配制成條件培養液；將擴增培養所獲的牙源性干細胞以平面培養或復合HA-TCP支架培養，營造不同的細胞培養空間環境。

血小板裂解液不能反復凍融。干細胞培養血小板裂解液的組成

細胞培養基制備1.比較好在4°C下解凍ELAREM Prime血小板裂解液過夜或在37°C水浴中解凍1小時。2.通過將10%ELAREM Prime血小板裂解液添加到基礎培養基（即MEMα、GlutaMAX補充劑、無核苷）和1%的青霉素/鏈霉素作為**終濃度來制備完整的細胞培養基。3.應在完全細胞培養基中加入肝素以抗凝。我們建議添加肝素的**終濃度為2IU/mL PL SUPPLEMENT(貨號PL-SUP-500)or 0.024mg/mL PL SUPPLEMENT-XF(貨號PL-SUP-500-XF).4.完整細胞培養基可在4°C下儲存，并穩定約4周儲存和穩定性ELAREM Prime在標簽上注明的失效日期之前是穩定的。ELAREM Prime在使用前在-20°C（或在-80°C進行長期儲存）冷凍儲存時穩定。解凍后，建議將未使用的ELAREM Prime樣品分裝并在-20°C下重新冷凍。應避免ELAREM Prime的重復凍融循環，因為這會導不溶性顆粒形成的增加。使用時，只需預熱一份完整的細胞培養基，并將剩余的培養基冷藏在4-8°C。GMP等級血小板裂解液斷貨血小板裂解液中的沉淀是怎樣形成的？

間充質間質細胞(MSCs)體外擴增的培養基一般添加胎牛血清FBS，但是考慮到異種ganran及免疫反應的風險，監管機構并不鼓勵使用。人血小板裂解液除了不存在異種免疫反應或牛病原體ganran的風險，有助于增強間充質干細胞的擴增，也相對容易地根據良好的生產規范程序生產，并已用于臨床應用，因此現如很多資料顯示血小板裂解液已被證明是擴增MSCs一種非常有效的FBS替代方法（參考文獻1）。 血小板裂解液由血漿組成，含有纖維蛋白原和凝血因子，對于一般細胞培養中涉及的含鈣培養基來說通常需要加入抗凝劑（常用肝素、Rivaroxaban利伐沙班、argatroban阿加曲班等）來防止凝膠形成，其中肝素很為常用。

Sexton的血小板裂解液系列產品使用干冰運輸，全程確保產品處于凍存狀態。接收后立即儲存在-20°C環境中，使用的時候必須使用37°C水浴解凍，而非4°C冰箱或室溫解凍方法，否則會產生更多碎片，影響性能。對于不立即使用的整瓶/袋解凍的血小板裂解液產品，建議將剩余體積制備成一次性使用的等分試樣。在滿足生物血清相容性和低溫要求的條件下，可以使用錐形管或較小的瓶子進行等分儲存。等分試樣的制備將減少血小板裂解液產品的冷凍/解凍循環。 血小板裂解液不能反復凍融，否則容易產生沉淀。

nLivenPR是一種細胞培養基補充劑人血小板裂解液產品，可作為生長因子的來源，代謝物和其他支持細胞生長的生物活性分子，對間充質干細胞，T細胞的擴增均有明顯的促進作用，并且介導T細胞體內的存活和殺傷作用。產品說明書將提供的信息包括產品的基本信息，如存儲條件、成分和體積。nLivenPR只在體外使用，不作為藥物成分。nLiven PR在市場上沒有任何臨床聲明或適應癥。Sexton公司沒有禁止將nLivenPR用作制造細胞（生物）材料的輔助材料擬用于臨床的產品。 血小板裂解液可用于多種細胞培養，如MSC間充質干細胞，角質細胞，成纖維細胞，內皮細胞等。Sigma血小板裂解液的方法

血小板裂解液為什么要使用肝素？干細胞培養血小板裂解液的組成

產品制造：nLivenPR由Sexton Biotechnologies制造，其質量體系經認證為符合ISO9001標準；制造過程根據制造商的要求進行控制質量體系。處理包括匯集大約100個供體來源的血小板單位，以破裂血小板膜，用0.5μm和0.2μm過濾器過濾，經過一系列的輻照和無菌填充流程。通過一系列的產品放行測試保持批次間的一致性；分析證書是有效的隨每批提供，以表明其符合所有放行標準。Sexton Biotechnologies申明生產nLivenPR所用的原材料成分均非人類動物起源。干細胞培養血小板裂解液的組成

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