細胞分盤：通過胰酶消化收集細胞，用適當的完全培養基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養皿上（根據實驗需要選擇培養皿，使細胞貼壁后所占總面積達到培養皿面積的70-90％）。根據細胞貼壁情況于含5％CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當細胞貼壁完全后即可開始轉染。轉染前換入2mL預熱的無血清培養基。2.制備PEI-DNA混合物：以60mm組織培養皿用420μL反應總體積為例。準備兩支1.5mL離心管，一管將質粒DNA（總量2-8μg為佳）加入240μLHBS中，混勻。另一管中則用HBS將100μM的PEI儲存液稀釋成10μM，充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中，充分混勻后室溫靜置20-30min。將這420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養基中，輕輕搖動平皿混勻，置于含5％～7％CO2的37℃溫箱孵育。注：每次用100μM的PEI儲存液前都需要先將其充分混勻，保證所取的濃度一致。3.培養6-10h后更換為37℃預熱的含有血清的培養基，繼續培養，16h左右可以觀測到報告基因的表達。

PEI轉染試劑不含動物源成分。不同分子量PEI轉染試劑官方代理商

穩定轉染方法：

1.接種細胞：轉染前，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數（不建議用胰酶）。調整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養的器皿，每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養基稀釋適量DNA。用同樣的培養基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比，每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同）。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管。 高性價比PEI轉染試劑使用比例用PEI轉染試劑時，一般和DNA的比例是多少呢？

穩定轉染方法1.接種細胞：轉染前一晚，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數（不建議用胰酶）。調整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養的器皿，每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養基稀釋適量DNA。用同樣的培養基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比，每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同）。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管。更多關于Polysciences PEI相關內容歡迎咨詢上海曼博生物！

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哪家有GMP等級的PEI轉染試劑？

材料：質粒DNA指數生長的真核細胞PEI（聚乙烯亞胺）1×HBS（pH7.4）配方：PEI儲存液（100μM）：稱取125mgPEI粉末溶解于50ml1×HBS（pH7.4）中，0.2μm濾膜過濾，儲存于4℃備用。1×HBS（pH7.4）：將8.76gNaCl溶解于900ml超純水，加入20ml1M的HEPES，調pH值到7.4，定容至1L，過濾（0.2μm濾膜）后儲存于4℃備用。方法：1．細胞分盤：通過胰酶消化收集細胞，用適當的完全培養基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養皿上（根據實驗需要選擇培養皿，使細胞貼壁后所占總面積達到培養皿面積的70-90％）。根據細胞貼壁情況于含5％CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當細胞貼壁完全后即可開始轉染。轉染前換入2mL預熱的無血清培養基。

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對大多數細胞來而言，每1μgDNA使用3.0μLPEIMAX轉染試劑都能獲得較高轉染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1.5~4μL體積線性PEIMAX轉染試劑進行優化。.PEIMAX(MW40,000)為Polysciences公司生產的化合物產品，每批產品出廠前都經過嚴格的檢測,保證每批產品都100%合格、穩定且品質高,但由于作為轉染試劑使用過程中有很多實驗室因素(配置方法，PH,水純度,稱量的準度,dnaRNA純度,細胞狀態，細胞品系…)造成溶解出現問題或者轉染效率出現差異,所以廠家只受理該產品純度，分子量及重量缺失破損等相關投訴，針對極個別客戶溶解問題和轉染效率問題我們能友善解決。不同分子量PEI轉染試劑官方代理商

上海曼博生物醫藥科技有限公司是一家集研發、制造、銷售為一體的****，公司位于自由貿易試驗區達爾文路16幢104室，成立于2019-02-15。公司秉承著技術研發、客戶優先的原則，為國內血小板裂解液，WB自動孵育系統，微流控器官芯片，藍牙無線標簽機的產品發展添磚加瓦。主要經營血小板裂解液，WB自動孵育系統，微流控器官芯片，藍牙無線標簽機等產品服務，現在公司擁有一支經驗豐富的研發設計團隊，對于產品研發和生產要求極為嚴格，完全按照行業標準研發和生產。上海曼博生物醫藥科技有限公司研發團隊不斷緊跟血小板裂解液，WB自動孵育系統，微流控器官芯片，藍牙無線標簽機行業發展趨勢，研發與改進新的產品，從而保證公司在新技術研發方面不斷提升，確保公司產品符合行業標準和要求。上海曼博生物醫藥科技有限公司以市場為導向，以創新為動力。不斷提升管理水平及血小板裂解液，WB自動孵育系統，微流控器官芯片，藍牙無線標簽機產品質量。本公司以良好的商品品質、誠信的經營理念期待您的到來！