根據(jù)模板設(shè)計(jì)，無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)可分為線性模板和環(huán)狀模板表達(dá)。線性模板（如PCR產(chǎn)物）無(wú)需克隆，快速啟動(dòng)表達(dá)，但穩(wěn)定性差、產(chǎn)量較低，適用于Batch體系的快速篩選。環(huán)狀模板（如質(zhì)粒DNA）通過(guò)克隆技術(shù)制備，穩(wěn)定性高且產(chǎn)量提升，適合CECF體系的大規(guī)模生產(chǎn)（如抗體或抗原制備）。此外，結(jié)合T7/T3/SP6啟動(dòng)子的偶聯(lián)轉(zhuǎn)錄/翻譯系統(tǒng)（如TNT系統(tǒng)）可直接以DNA為模板，簡(jiǎn)化流程并提高效率。以上形式可根據(jù)需求組合使用，例如原核CECF系統(tǒng)+環(huán)狀模板用于工業(yè)化生產(chǎn)，或真核Batch系統(tǒng)+線性模板用于快速篩選。??兔網(wǎng)織紅細(xì)胞裂解物??（RRL）和??小麥胚芽裂解物??（WGE）是兩類常見(jiàn)真核平臺(tái),用于體外蛋白表達(dá).無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)陰性

國(guó)內(nèi)生物醫(yī)藥行業(yè)對(duì)CFPS的價(jià)值認(rèn)知不足，傳統(tǒng)企業(yè)更依賴成熟的細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)（如CHO、大腸桿菌）。許多藥企認(rèn)為無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)只適用于“科研級(jí)小試”，對(duì)其在藥物開(kāi)發(fā)（如ADC定點(diǎn)偶聯(lián)）、mRNA疫苗抗原快速制備等工業(yè)化潛力持觀望態(tài)度。同時(shí)，無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)在復(fù)雜蛋白表達(dá)（如糖基化抗體）上的局限性也削弱了市場(chǎng)信心。相比之下，歐美已形成“CRO+藥企”的協(xié)同生態(tài)（如Moderna與CFPS服務(wù)商合作），而國(guó)內(nèi)缺乏此類模范案例，導(dǎo)致技術(shù)推廣缺乏驅(qū)動(dòng)力。293f細(xì)胞蛋白表達(dá)產(chǎn)業(yè)鏈添加 2 mM 鎂離子可使 ??大腸桿菌體外蛋白表達(dá)??產(chǎn)量提高 60%。

無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)在快速響應(yīng)公共衛(wèi)生事件和jun shi應(yīng)用中表現(xiàn)突出。例如，在COVID-19期間，無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)被用于數(shù)小時(shí)內(nèi)合成病毒抗原，加速疫苗候選物篩選。美國(guó)DARPA支持的“生物制造”項(xiàng)目利用凍干無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)試劑，在戰(zhàn)場(chǎng)環(huán)境中按需生產(chǎn)止血蛋白或抗體，實(shí)現(xiàn)便攜式、無(wú)需冷鏈的即時(shí)生物制造。這類場(chǎng)景凸顯了無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)在時(shí)效性和環(huán)境適應(yīng)性上的不可替代性。根據(jù)應(yīng)用需求，無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)可整合非天然氨基酸（通過(guò)修飾tRNA）、脂質(zhì)體（用于膜蛋白表達(dá)）或翻譯后修飾酶（如糖基化酶）。

盡管前景廣闊，無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)市場(chǎng)仍面臨成本控制和規(guī)模化生產(chǎn)的挑戰(zhàn)。目前反應(yīng)體系依賴昂貴的裂解物和能量試劑，限制了大規(guī)模應(yīng)用，但新型工程化裂解物（如敲除核酸酶的E. coli提取物）和能量再生系統(tǒng)的開(kāi)發(fā)有望降低成本。未來(lái)，無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)技術(shù)可能與AI驅(qū)動(dòng)的蛋白設(shè)計(jì)、連續(xù)生物制造工藝結(jié)合，進(jìn)一步拓展在細(xì)胞zhi liao、人造肉（如無(wú)細(xì)胞合成血紅蛋白）等新興領(lǐng)域的應(yīng)用。Goverment與資本對(duì)生物制造的投入（如美國(guó)《國(guó)家生物技術(shù)和生物制造計(jì)劃》）也將加速無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)的商業(yè)化進(jìn)程，使其成為千億美元合成生物學(xué)市場(chǎng)的重要支柱技術(shù)。大腸桿菌裂解物添加含T7啟動(dòng)子的線性DNA后，利用其??高密度核糖體??快速啟動(dòng)蛋白表達(dá)。

在中國(guó)，無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)（CFPS）的推廣面臨he xin原料依賴進(jìn)口的挑戰(zhàn)。商業(yè)化裂解物、高效能量再生系統(tǒng)等關(guān)鍵試劑仍以Thermo Fisher、Merck等國(guó)際品牌為主，國(guó)產(chǎn)替代品在活性和穩(wěn)定性上存在差距，導(dǎo)致成本居高不下。此外，無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)工藝的規(guī)模化放大技術(shù)尚未成熟，反應(yīng)體系均一性、產(chǎn)物收率等問(wèn)題限制了其在GMP生產(chǎn)中的應(yīng)用。盡管國(guó)內(nèi)科研機(jī)構(gòu)（如中科院、清華大學(xué)）在基礎(chǔ)研究上取得突破，但產(chǎn)學(xué)研轉(zhuǎn)化效率較低，缺乏類似Synthelis的專注無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)的本土企業(yè)，難以形成完整的產(chǎn)業(yè)鏈條。通過(guò)體外蛋白表達(dá)，只需在裂解物中添加對(duì)應(yīng)mRNA，就能在裂解物中安全實(shí)現(xiàn)dusu合成及機(jī)制研究。誘導(dǎo)蛋白表達(dá)服務(wù)

線性化質(zhì)粒經(jīng)酚氯純化后（濃度≥0.5 μg/μL），適用于 ??T7 啟動(dòng)子介導(dǎo)的體外蛋白表達(dá)??。無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)陰性

無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)（CFPS）雖然具有快速、靈活等優(yōu)勢(shì)，但仍存在一些關(guān)鍵缺點(diǎn)。首先，成本較高，商業(yè)化裂解物、能量試劑和酶的價(jià)格昂貴，小規(guī)模實(shí)驗(yàn)單次反應(yīng)成本可達(dá)數(shù)百元，大規(guī)模生產(chǎn)的經(jīng)濟(jì)性尚未完全解決。其次，蛋白產(chǎn)量較低，反應(yīng)通常在幾小時(shí)內(nèi)終止，產(chǎn)量（0.1-1 mg/mL）遠(yuǎn)低于細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)（如大腸桿菌可達(dá)10 mg/mL以上）。此外，復(fù)雜蛋白表達(dá)受限，原核裂解物缺乏真核翻譯后修飾能力（如糖基化），而真核裂解物成本更高；部分蛋白可能因折疊不完全而喪失活性。技術(shù)操作上，反應(yīng)條件（pH、離子強(qiáng)度等）需精細(xì)調(diào)控，且線性DNA模板易降解，增加了實(shí)驗(yàn)難度。CFPS目前更適合小規(guī)模應(yīng)用，在超長(zhǎng)蛋白（>100 kDa）表達(dá)和工業(yè)化連續(xù)生產(chǎn)方面仍面臨挑戰(zhàn)。未來(lái)需通過(guò)開(kāi)發(fā)低成本試劑、優(yōu)化能量再生系統(tǒng)和自動(dòng)化工藝來(lái)突破這些瓶頸。無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)陰性