制備液相色譜柱正確使用方法(附萬立演示視頻)
制備液相色譜柱正確使用方法(附萬立演示視頻)
“色譜柱”各位實驗員們應該經常和它打交道吧,作為制備液相色譜實驗的“心臟”,其初始狀態直接決定分離精度與使用壽命,本期,我們就帶大家拆解新柱試用的全流程,文中附上萬立儀器實操演示,新手也能一次搞定!
一、色譜柱試用前,請務必做好以下準備:
1、檢查色譜柱外觀:觀察柱體是否有磕碰變形,兩端接口螺紋是否完好,若有包裝破損,立即聯系廠商更換。
2、查看標簽:重點記錄3個關鍵參數 —— 耐受壓力、pH耐受范圍、尺寸。
3、沖洗儀器:在安裝之前,先沖洗儀器管路,要保證系統管路中是沒有雜質的狀態,無緩沖鹽等,防止污染新的色譜柱。
4、檢查系統連接:確保所有管路接頭緊密,無泄漏。
5、流動相與樣品準備:
①盡量使用流動相溶解樣品。
②使用色譜純試劑和超純水,并經過0.45 μm或更小孔徑濾膜過濾和脫氣。
二、主要步驟:沖洗和平衡(含視頻演示)
新柱出廠時殘留的生產溶劑等雜質,可能會導致基線噪聲和鬼峰。必須通過沖洗去除雜質,再用流動相平衡固定相,這步是試用成功的關鍵。
1、活化與平衡
①可以先用100%的甲醇或者乙腈沖洗,選擇小流速(20ml/min),沖洗10-20倍柱體積;
②再用甲醇:水或者乙腈:水(1:1),沖洗10倍柱體積。
2、起始流動相平衡
沖洗后用起始流動相平衡柱體,使固定相與流動相達到分配平衡,若流動相含緩沖鹽,先以 5% 有機相-水相沖洗10倍柱體積,再切換至目標比例,避免鹽在柱內析出。
為了更直觀地展示以上流程,我們特別錄制了一段在萬立制備液相色譜系統上的實操視頻片段,具體操作可參考視頻演示哦!
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三、試用結束后的保存
實驗完成后,必須對色譜柱進行正確沖洗和保存,以備下次使用。還是以反相色譜柱為例:
1、采用甲醇:水或者乙腈:水(8:2),讓這個比例的有機溶劑填滿色譜柱。
2、將色譜柱兩端用堵頭密封好,并貼上標簽,注明保存介質和日期,置于干燥處存放。
小貼士:保存教學我們也有具體操作視頻哦!
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結語:正確試用色譜柱,是保證制備純化結果可靠性、延長色譜柱使用壽命的關鍵第一步。遵循“準備-平衡-測試-保存”的科學流程,并采用像萬立儀器這樣穩定可靠的設備和直觀的軟件,讓每一次制備實驗都更加高效和安心。希望本篇內容對您有所幫助!如有任何疑問,歡迎在評論區留言討論。
聲明:部分內容來源于網絡、《液相色譜實戰寶典》,本篇文章只是用于科普,不作任何商業用途,如涉及內容或其他問題,請聯系我們。
本文所述為通用性操作規程,具體步驟請務必以您所使用的色譜柱說明書和實驗室SOP為準。視頻演示供參考。