在Genovis，我們的策略是幫助客戶(hù)進(jìn)行中級(jí)（或亞基）分析，這是我們的工作，特別是我們的蛋白質(zhì)酶切產(chǎn)品。完整質(zhì)量和肽圖譜是蛋白質(zhì)表征的常用方法，我們發(fā)現(xiàn)，與簡(jiǎn)單但信息有限的完整質(zhì)量和高度復(fù)雜但信息豐富的肽圖譜相比，中級(jí)方法具有優(yōu)勢(shì)。通過(guò)執(zhí)行中級(jí)描述，您可以生成從完整的質(zhì)量實(shí)驗(yàn)中獲得的所有信息，具有額外的優(yōu)勢(shì)。在對(duì)抗體進(jìn)行完整質(zhì)量分析時(shí)，很難明確地識(shí)別某些修飾。質(zhì)譜儀器正在改進(jìn)，可以更有效地分析更大的分子，但通過(guò)使用我們的SmartEnzymes，如IdeS，可以將抗體分解成更小的片段，這提高了這些實(shí)驗(yàn)可以執(zhí)行的分辨率，因此，增加了鑒定修飾的信心。此外，你不僅能夠更好地識(shí)別修改，而且你能夠?qū)⑺鼈兌ㄎ坏降鞍踪|(zhì)上的單個(gè)結(jié)構(gòu)域，這是你在完整水平上無(wú)法做到的。如mAb在生產(chǎn)或儲(chǔ)存過(guò)程中的氧化，它可能會(huì)影響zhiliao產(chǎn)品的質(zhì)量。江西GingisREXIdeS蛋白酶

抗體的氧化是可能影響抗體功能的關(guān)鍵質(zhì)量屬性，需要密切定量和表征。它可能導(dǎo)致mAb的體內(nèi)半衰期、功效和穩(wěn)定性降低。Genovis的FabRICATOR（IdeS）消化產(chǎn)生的抗體亞基是研究抗體氧化的理想選擇。酶解的穩(wěn)健性允許在受監(jiān)管的環(huán)境中監(jiān)測(cè)抗體亞基氧化。Genovis的FabRICATOR（IdeS）是一種IgG特異性半胱氨酸蛋白酶，可消化鉸鏈下方單個(gè)氨基酸位點(diǎn)的抗體，產(chǎn)生均質(zhì)的F（ab'）2和Fc片段。該酶用于基于抗體的療法（如mAb、ADC、生物類(lèi)似藥和Fc融合蛋白）的表征、質(zhì)量控制、穩(wěn)定性測(cè)試、生產(chǎn)監(jiān)測(cè)和克隆選擇。高度特異性-鉸鏈下方的一個(gè)消化位點(diǎn)快速–在30分鐘內(nèi)生成均勻的片段池實(shí)現(xiàn)基于抗體的生物zhiliao藥物的表征和質(zhì)量控制可固定在即用型離心柱中河南FabRICATORIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶FabRICATOR（IdeS）酶是生物制藥行業(yè)中普遍使用的工具。

為了讓所有實(shí)驗(yàn)室都能同時(shí)快速自動(dòng)消化多種抗體，Genovis的FabRICATORMagIC的設(shè)計(jì)具有靈活性，適用于一系列自動(dòng)化平臺(tái)。我們?cè)赥hermoScientific?KingFisher?純化系統(tǒng)上優(yōu)化了FabRICATORMagIC的工作流程，但它可以轉(zhuǎn)移到其他自動(dòng)化平臺(tái)，如果沒(méi)有自動(dòng)化，在振動(dòng)臺(tái)上也能同樣出色地工作。消解后，將含有處理樣品的深孔板直接轉(zhuǎn)移到LC-MS的自動(dòng)進(jìn)樣器中進(jìn)行快速色譜分析，或轉(zhuǎn)移到其他分析方法進(jìn)行分析。FabRICATORMagIC與在消解緩沖液中添加0.05%聚山梨醇酯20兼容，以極大限度地減少自動(dòng)化系統(tǒng)中可能發(fā)生的純粹壓力。使用KingFisher儀器處理樣品時(shí)，樣品制備非常簡(jiǎn)單。將樣品、樹(shù)脂和緩沖液移液到指定的孔或板中，然后將板放入儀器中。設(shè)計(jì)用于FabRICATORMagIC的BindIt?協(xié)議將控制每個(gè)步驟的孵育溫度和時(shí)間。

一些應(yīng)用（如結(jié)合研究）具有高度靈敏度，因此在制備中需要不含殘留酶的純抗體片段。因此，Genovis的 IgG 特異性蛋白酶也以固定化酶提供，可快速輕松地生成均質(zhì) F（ab'）2 和 Fc/2 片段。FabRICATOR Immobilized 含有固定化的 FabRICATOR （IdeS），用于制備來(lái)自多種 IgG 的 F（ab'）2 和 Fc 片段（對(duì)于兔 IgG，請(qǐng)咨詢(xún)），而小鼠 IgG2a 和 IgG3 可以使用含有 FabRICATOR Z Immobilized 的 FabRICATOR Z Fab2 試劑盒進(jìn)行處理 。 為了生成和純化完整的 F（ab'）2 和 Fc/2 片段，使用 FabRICATOR Fab2 試劑盒處理曲妥珠單抗，并通過(guò) SDS-page 進(jìn)行分析。首先，在室溫下在FabRICATOR固定化離心柱上消化抗體15分鐘，然后進(jìn)行短離心步驟。在 CaptureSelect ? 離心柱上純化 F（ab'）2 片段，并通過(guò)降低 pH 值，然后立即調(diào)整回中性 pH 值，一步洗脫結(jié)合的 Fc 片段。使用 FabRICATOR Fab2 試劑盒從酶切到收集片段的過(guò)程大約需要 1 小時(shí)FabDELLO 是從 Bdellovibrio 細(xì)菌克隆而來(lái)的，并在大腸桿菌中表達(dá)。該酶含有 His 標(biāo)簽，分子量為 32 kDa。

Genovis的半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA （IgdE）與IdeS酶一樣是特異性蛋白酶。在二維核磁共振波譜 （2D-NMR） 之后，可以通過(guò) HOS 分析在精確的原子水平上評(píng)估 mAb 的關(guān)鍵質(zhì)量屬性。從Genovis的FabALACTICA Immobilized獲得均相Fab和Fc片段的工作流程，是評(píng)估嵌合單克隆抗體英夫利昔單抗中HOS的理想選擇，在海報(bào)“FabALACTICA產(chǎn)生純和均相的mAb亞基，促進(jìn)2D-NMR波譜分析”中進(jìn)行了描述。來(lái)自生成的 Fab 和 Fc 片段的高質(zhì)量信號(hào)和光譜分辨率導(dǎo)致能夠觀察 Fab 和 Fc 之間的結(jié)構(gòu)變化、氧化和非氧化樣品之間的差異，并通過(guò)觀察原子分辨率來(lái)比較原研劑和生物仿制藥的 HOS。可以用Genovis的GlySERIAS固定化酶（瓊脂糖珠共價(jià)偶聯(lián)）消化度拉糖肽。甘肅GingisKHANIdeS蛋白酶

Genovis的FabULOUS來(lái)源于化膿性鏈球菌，在大腸桿菌中表達(dá)，分子量為 29 kDa，該酶含有 His 標(biāo)簽。江西GingisREXIdeS蛋白酶

與IdeS不同，為了獲得更均勻的度拉糖肽融合蛋白的消化產(chǎn)物，用Genovis的GlySERIAS固定化蛋白質(zhì)消化該蛋白質(zhì)，該蛋白由與瓊脂糖珠共價(jià)偶聯(lián)的GlySERIAS酶組成。通過(guò)將酶偶聯(lián)到樹(shù)脂上，可以增加酶與蛋白質(zhì)的比率，從而可以進(jìn)一步加速反應(yīng)，以獲得更完整的連接子消化。此外，該酶不會(huì)存在于樣品制備中，可能會(huì)干擾樣品分析。為了進(jìn)行比較，度拉糖肽在37°C下用GlySERIAS固定化過(guò)夜，或用GlySERIAS凍干1小時(shí)并在37°C下過(guò)夜消化。 為了降低樣品復(fù)雜性，使用內(nèi)切糖苷酶GlycINATOR凍干去除Fc聚糖，并減少鏈間二硫鍵。通過(guò)反相LC-MS對(duì)樣品的分析表明，GlySERIAS Immobilized幾乎完全消化了Fc結(jié)構(gòu)域中的連接子，留下了接近均質(zhì)的Fc/2產(chǎn)物，其中含有來(lái)自連接子的一個(gè)絲氨酸殘基。用 GlySERIAS 凍干 1 小時(shí)或過(guò)夜消化，兩者都會(huì)產(chǎn)生幾種 Fc 產(chǎn)物，并附著不同數(shù)量的絲氨酸和甘氨酸殘基。GLP-1肽在所有三個(gè)樣品中以?xún)煞N變體存在。使用GlySERIAS固定化消化的均質(zhì)Fc/2能夠詳細(xì)研究特定于Fc區(qū)域的質(zhì)量屬性。此外，在樣品中未觀察到干擾分析的酶峰。作為補(bǔ)充，F(xiàn)c/2 產(chǎn)物在用 GlySERIAS 凍干消化后殘留部分連接子，有助于研究位于 GS 連接子的修飾。江西GingisREXIdeS蛋白酶