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浙江PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究

來源: 發布時間:2024-10-07

GlycOCATCH用于純化粘蛋白型O-糖基化蛋白和肽。它是基于無活性的Genovis的OpeRATOR?酶,該酶經過工程改造,可以高親和力結合O-糖基化蛋白和肽。GlycOCATCH的應用包括O糖蛋白和肽的特異性富集或去除、糖組學、復雜樣品的研究和生物制藥的表征。1. 粘蛋白型O-糖基化蛋白和肽的特異性富集;2. 可靠 - 高親和力結合;3. 快速且易于使用的工作流程。不需要輔助因子或特殊緩沖液。GalNAcEXO中的酶來源于Akkermansia muciniphila,在大腸桿菌中表達,帶有His標簽,分子量為52 kDa。1. 用于方法開發的靈活格式;2. 可以結合酶以提高效率;3. 適用于自動化工作流程; 4. 即用型 - 只需加水即可!用于水解糖蛋白上GalNAc殘基的凍干酶。Genovis的GalNAcEXO凍干劑以凍干粉末的形式提供,裝在2000單位的小瓶中,用于水解2mg糖蛋白上的GalNAc殘基。SialEXO酶來源于Akkermansia muciniphila,并在大腸桿菌中表達。浙江PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究

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對Genovis的ImpaRATOR處理的樣品的分析表明,ImpaRATOR很好地消化了所有三種底物并產生了相似的糖肽,但預期的聚糖種類不同。用ImpaRATOR處理的樣品比其他樣品含有更多的變異,因為每種肽都檢測到多種聚糖結構。觀察到的聚糖種類主要是單唾液酸化和二唾液酸化he心1結構,這與依那西普的預期一致。用ImpaRATOR或OpeRATOR消化的SialEXO預處理樣品均產生具有裸核1結構的肽,但攜帶在ImpaRATOR消化樣品中觀察到的Tn抗原的肽T205-P207除外。依那西普用 SialEXO 和 GalactEXO 預處理,然后用 ImpaRATOR 消化,得到含有 Tn 抗原的肽。總之,這些數據證明了ImpaRATOR的高聚糖底物接受度。ImpaRATOR處理的依那西普顯示出與相應的去唾液酸化OpeRATOR處理樣品略有不同的消化模式。例如,OpeRATOR在兩個O-糖基化氨基酸之間消化的效率比ImpaRATOR更有效。具有完整唾液酸或Tn抗原的依那西普被OpeRATOR消化得非常弱(數據未顯示)。河北瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶瑞典GenovisGalactEXO中的酶來源于Akkermansia muciniphila,并在大腸桿菌中表達。

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GlycOCATCH?親和純化:用于粘蛋白型O-糖蛋白和肽親和純化的富集樹脂。GlycOCATCH親和純化以方便的離心柱形式提供。該產品包含:4 個 GlycOCATCH 親和純化微離心柱,每個柱能夠結合 50 μg 粘蛋白型 O-糖蛋白(總共 200 μg)。Genovis的SialEXO 凍干 200 單位,用于去除唾液酸;OpeRATOR 凍干 200 單位,用于結合的 O-糖蛋白的可選洗脫方法。1. 靶向 O-糖蛋白富集;2. 復雜樣品的特異性凈化;3. 用于改進 MS 分析的樣品制備。O-糖基化蛋白和肽的特異性富集:O-連接聚糖參與多種生物過程,包括抑制病原體引起的gan染、炎癥反應、造血和細胞信號傳導。

Fc N-聚糖在抗體的效應功能中起著至關重要的作用,但可能會增加蛋白質表征測定的復雜性。在天然條件下用PNGase F去除Fc N-糖可以表征游離N-糖以及去糖基化抗體的功能和結構。 為了證明PNGase F固定化和PNGase F凍干在天然反應條件下有效去除Fc N-聚糖,對zhiliao性抗體曲妥珠單抗進行了處理。圖2中的質量數偏移表明,在37°C下用Genovis的PNGase F凍干或PNGase F固定化孵育1小時后,曲妥珠單抗上的Fc N-聚糖成功去除,與在溶液中用PNGase F凍干處理的樣品相比,沒有酶干擾用PNGase F固定處理的樣品的分析。OglyZOR 是一種內切糖苷酶用于確認O-糖的存在和降低樣品的異質性。

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genovis分析依那西普和曲妥珠單抗游離聚糖:為了確認依那西普和曲妥珠單抗中半乳糖損失的LC-MS數據,進行了釋放的N-聚糖分析。標記的N-聚糖的分離清楚地表明了依那西普和曲妥珠單抗上半乳糖的丟失,如半乳糖基化聚糖物種的信號丟失所示。該酶是一種有價值的工具,可降低樣品異質性,用于分析攜帶α連接的 GalNAc 殘基作為未成熟截短he心 1 的復雜 O-糖蛋白。1. 高效 α-N-乙酰半乳糖胺酶 – 快速、完全去除 Tn-抗原和 α1-3-連接的 GalNAc;2. 實現完全糖基去除,以改善蛋白質表征;3. 可固定在即用型離心柱中。在天然條件下使用OmniGLYZOR Microspin色譜柱,可在3小時內有效去除C1 抑制劑O-聚糖。河北高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發

PNGase F是一種非常成熟的工具。O-糖的去除可能更具挑戰性,現有的O-糖釋放化學方法不太適合下游分析。浙江PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究

由于蛋白質的O-糖模式的異質性和O-糖結構的OpeRATOR特異性,形成了重疊的肽,從而可以獲得O-糖位點的完整圖譜為了進行比較,相同材料的標準胰蛋白酶消化物, 顯示難以分析的少量且非常大的糖肽。使用Genovis的OpeRATOR進行O-糖位點定位:OpeRATOR 是一種 O-聚糖特異性蛋白酶,可消化絲氨酸和蘇氨酸糖基化位點的粘蛋白型 O-糖蛋白 N 端。這會產生攜帶O-糖的糖肽,并能夠使用質譜法進行O-糖分析、O-糖肽圖譜以及中級分析。下面是OpeRATOR消解位點的示意圖。浙江PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究

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