與肽圖譜相比，根據Genovis科學家的經驗，尤其是對于像抗體這樣的分子，許多人在常規實驗中做了太多的肽圖譜，而中級水平（Middle-level）的方法可以很好地工作。中級方法（IdeS酶切抗體）需要更少的實際操作步驟和較少的示例處理，所有這些都意味著過程中出錯的事情更少。我們的許多酶可以作為平臺方法，同樣的方法適用于絕大多數的抗體，這不是肽圖的情況下，可能需要優化整個樣品制備，LC分離，質譜設置和數據分析的每個不同的抗體分析。這些變化可能是很小的，但沒有一種適用于所有肽圖的方法。由于分析和數據分析的簡單性，中級方法非常適合自動化和高通量的工作流程。肽圖當然可以自動用于樣品制備，但高通量肽圖生成大量數據，仍然需要徹底分析。事實上，肽圖譜是一個多步驟的過程，每一個步驟都可能破壞方法，并可能導致破壞蛋白質的人工制品，很難交叉訓練給非專業人員。中級水平的方法很容易交叉訓練，我們的方法在質量控制實驗室中被成功地使用。肽圖譜是一種用于修飾分析和氨基酸確認的方法，但一旦完成了這一工作，我相信使用中級分析可以成功地更有效地完成抗體樣本的大部分工作。在抗體藥及核酸藥領域，倍篤生物產品線涵蓋藥物研發的全流程，抗體結構域分析蛋白酶、蛋白聚糖分析水解酶。河北IdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

Genovis的FabRICATOR（IdeS）酶 可用于 IgG 的所有人類亞類以及人源化和嵌合 IgG。該酶對其他物種的 IgG 也有活性，包括來自大鼠、猴子、兔子和綿羊的某些類別的 IgG。因此，FabRICATOR的高特異性在某些情況下會使其對鉸鏈區域的突變敏感，并損害酶活性。來自小鼠 IgG2a 和 IgG3 的片段可以由 FabRICATOR Z 生成，與 FabRICATOR 相比，FabRICATOR Z 在消化這些 IgG 方面具有更高的效率。然而，小鼠 IgG1 在鉸鏈下方具有不同的序列，并且不被 FabRICATOR Z 消化。對于這種抗體種類，FabULOUS 和 FabULOUS Fab 試劑盒可用于制備 Fab 片段。四川GlySERIASIdeS蛋白酶在抗體及核酸藥領域，倍篤生物產品線涵蓋藥物研發的全流程，抗體結構域分析蛋白酶、蛋白聚糖分析水解酶。

與IdeS不同。Genovis的IgASAPSub1是一種IgA1特異性酶，可在鉸鏈上方的一個特定位點消化人IgA1，產生完整且均質的Fab和Fc片段。IgASAPSub1可水解分泌物和血清IgA1。消化在1小時內完成，并且由于酶的特異性，如果孵育時間延長，則不存在過度消化的風險。該酶在pH值6.5至8.0下具有活性，不需要還原條件或輔助因子即可發揮活性。活性是在37°C下，但也可以在室溫下使用增加孵育時間進行消化。IgASAPSub1是從口腔鏈球菌克隆而來的，并在大腸桿菌中表達。該酶含有His標簽，分子量為148kDa。IgASAPSub1凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在1000個單位的小瓶中，用于消化1mgIgA1。

大多數商業zhiliao性抗體屬于IgG類，在Fc結構域中含有N-聚糖。一個重要的關鍵質量屬性是糖基化曲線，因為它會影響穩定性、溶解度、藥效學和藥代動力學特性。這種翻譯后修飾可能發生在生物工藝開發和制造過程中，因此需要密切監測。Genovis的FabRICATOR（IdeS）酶已成為一種被接受的快速表征單克隆抗體（mAb）的分析工具。FabRICATOR在鉸鏈下方消化IgG，產生F（ab'）2和Fc/2片段。單個FabRICATOR消解位點和質量譜的后續精度使Fc糖基化譜能夠檢測，從而可以監測批次間的一致性和其他關鍵質量屬性。發現GingisREX精氨酸殘基的特異性，Arg-C在賴氨酸和其他殘基的非特異性。

與IdeS不同，Romiplostim 由四個相同的血小板生成素 （TPO） 受體結合肽和一個 Fc 片段組成，通過柔性聚甘氨酸序列連接在一起。與度拉糖肽類似，用 Genovis的GlySERIAS Immobilized 在 37°C 下過夜，或用 GlySERIAS 凍干 1 小時并在 37°C 下過夜消化該蛋白質。 鏈間二硫鍵被還原，以便于通過反相LC-MS進行以下分析。與度拉糖肽的觀察結果類似，用固定化酶消化產生均質的 Fc/2，剩下一個連接子殘基，此處為甘氨酸殘基。這有助于識別專門位于Fc區域的修改。用凍干酶消化 1 小時得到 Fc/2，剩余 4 個甘氨酸殘基和少量的 Fc/2 仍與一個 TPO 肽連接。另一方面，這使得研究 Fc/2 和第yi個肽之間的連接區域成為可能，而不會受到第二個肽的干擾。用 GlySERIAS 凍干液過夜消化產生 2 個 Fc/2 變體，分別剩下 4 個和 1 個甘氨酸殘基。根據消化時間的不同，使用凍干產物釋放的肽以五或七種變體存在，接頭中殘留的甘氨酸殘基數量不同，而使用固定化產物釋放的肽以四種變體存在。IgASAP Sub1 可水解分泌物和血清 IgA1。河北IdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

用 Genovis的GlySERIAS Immobilized消化雙特異性 T 細胞接合器（BiTE）分子。河北IdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

與IdeS不同，融合蛋白是通過將兩種或多種蛋白質或肽的功能組合成一個量身定制的分子來創造的，以專門應對挑戰。連接此類蛋白質或肽結構域的常見方法是包含柔性連接子。這些連接子通常富含甘氨酸，例如甘氨酸殘基（G），或甘氨酸殘基散布絲氨酸殘基（GS）以形成重復序列。這為連接子提供了足夠的靈活性，不會干擾連接蛋白質結構域的功能。然而，這些新模式帶來了新的分析挑戰，需要新的工具來促進表征和產品質量監測。中級分析已成為分析單克隆抗體療法的標準方法，涉及將分子消化成幾個定義的亞基。它們足夠小，可以獲得高質量的質譜圖，并為產品質量屬性提供特定領域的信息。由于G和GS連接子對常見蛋白酶的降解具有抗性，因此很難分離結構域以進行深入分析。因此，Genovis開發了GlySERIAS，不同于IdeS酶，一種消化柔性富含甘氨酸的連接子的酶。GlySERIAS可以分離不同的功能域，并實現對融合蛋白、多特異性抗體和含有富含甘氨酸的連接子的各種mAb片段進行詳細表征的中級方法。河北IdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶