熒光染料法原理:一些熒光染料(如 SYBR Green I)能特異性地結(jié)合到雙鏈 DNA 上。在 PCR 反應(yīng)體系中,隨著 DNA 擴增產(chǎn)物的不斷增加,與雙鏈 DNA 結(jié)合的熒光染料也越來越多,熒光信號強度與 PCR 產(chǎn)物的數(shù)量呈正相關(guān)。通過檢測熒光信號的強度變化,就可以實時監(jiān)測 PCR 反應(yīng)的進程。過程:在 PCR 反應(yīng)的每一個循環(huán)中,當(dāng)溫度降低到退火溫度時,引物與模板結(jié)合,DNA 聚合酶開始延伸引物,合成新的 DNA 鏈。此時,熒光染料會結(jié)合到新合成的雙鏈 DNA 上,儀器會在特定的時間點檢測熒光信號的強度。隨著循環(huán)次數(shù)的增加,熒光信號逐漸增強,當(dāng)信號強度達到設(shè)定的閾值時,對應(yīng)的循環(huán)數(shù)被稱為閾值循環(huán)數(shù)(Ct 值)。定量依據(jù):在一定的范圍內(nèi),起始模板量與 Ct 值呈對數(shù)關(guān)系。即起始模板量越多,達到閾值所需的循環(huán)數(shù)越少,Ct 值越小;反之,起始模板量越少,Ct 值越大。通過已知濃度的標準品建立標準曲線,再根據(jù)待測樣本的 Ct 值,就可以在標準曲線上計算出其對應(yīng)的起始模板量。如 FAM、ROX 等常用染料的通道,以實現(xiàn)多重 PCR 檢測,同時對多個目標基因進行定量分析。常州熒光定量PCR儀哪個好

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實時熒光定量 PCR 儀在多個領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用,以下是一些主要的應(yīng)用領(lǐng)域:疾病診斷:可對病毒、細菌等病原體的核酸進行檢測,如、病毒、結(jié)核桿菌等,實現(xiàn)疾病的早期診斷。例如,在期間,實時熒光定量 PCR 儀是檢測核酸的重要工具,通過檢測患者樣本中病毒的核酸量,判斷是否以及的程度。疾病監(jiān)測:對于一些慢性疾病,如、心血管疾病等,實時熒光定量 PCR 儀可監(jiān)測相關(guān)基因的變化,輔助醫(yī)生了解疾病的發(fā)展進程、效果以及預(yù)測疾病的復(fù)發(fā)風(fēng)險。例如,通過檢測患者體內(nèi)特定基因突變的頻率和拷貝數(shù),評估的惡性程度和后的殘留情況。藥物研發(fā):在藥物研發(fā)過程中,可用于研究藥物對基因表達的影響,篩選具有潛在作用的藥物靶點。同時,還可監(jiān)測藥物過程中患者體內(nèi)基因的變化,為個體化提供依據(jù)。例如,通過檢測患者在使用某種藥物前后腫瘤細胞中相關(guān)基因的表達水平,判斷藥物是否有效,并調(diào)整方案。受到儀器的整體性能、光學(xué)系統(tǒng)設(shè)計、熒光染料質(zhì)量以及數(shù)據(jù)處理算法等多種因素的綜合影響。

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減少非特異性信號的干擾,從而提高檢測的靈敏度。常州熒光定量PCR儀哪個好
以下是一些判斷熒光定量 PCR 儀光路系統(tǒng)是否需要校準的方法:熔解曲線異常峰形改變:熔解曲線的峰形變得不規(guī)則、寬化或出現(xiàn)多個峰,而樣品和實驗條件均無變化時,可能是光路系統(tǒng)對熒光信號的檢測精度下降,導(dǎo)致熔解曲線的分析結(jié)果不準確,此時需要考慮對光路系統(tǒng)進行校準。Tm 值偏移:熔解曲線的 Tm 值(解鏈溫度)與預(yù)期值相比出現(xiàn)明顯偏移,且排除了引物設(shè)計、反應(yīng)條件等因素的影響,可能是光路系統(tǒng)的熒光檢測存在誤差,影響了對 DNA 雙鏈解鏈過程的準確監(jiān)測,需要對光路進行檢查和校準。常州熒光定量PCR儀哪個好