細(xì)胞水平的功能性檢測是藥物篩選和生物學(xué)研究的基礎(chǔ)。均相化學(xué)發(fā)光為此提供了多種穩(wěn)健的檢測方案。比較經(jīng)典的是基于ATP含量的細(xì)胞活力/增殖/毒性檢測。活細(xì)胞內(nèi)的ATP與熒光素酶-熒光素反應(yīng)直接偶聯(lián),產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光信號,其強度與活細(xì)胞數(shù)成正比。該方法操作簡單(一步加樣裂解/檢測),靈敏度高,線性范圍寬。此外,針對細(xì)胞凋亡,可通過檢測Caspase酶活性(使用化學(xué)發(fā)光的Caspase底物)或膜磷脂酰絲氨酸外露(使用與化學(xué)發(fā)光檢測偶聯(lián)的Annexin V類似物)來進(jìn)行均相分析。這些方法均實現(xiàn)了在微孔板中對細(xì)胞狀態(tài)的快速、定量評估。均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)如何降低檢測誤差,確保準(zhǔn)確性?吉林均相化學(xué)發(fā)光均相發(fā)光解決方案

在分子診斷領(lǐng)域,均相發(fā)光技術(shù)的應(yīng)用遠(yuǎn)不止于基礎(chǔ)的實時熒光定量PCR(qPCR)。它正推動該領(lǐng)域向著更高靈敏度、更強特異性和更便捷的操作模式演進(jìn)。例如,在數(shù)字PCR(dPCR)這一定量技術(shù)中,雖然目前主流依賴熒光檢測,但基于化學(xué)發(fā)光的均相檢測方案正在探索中。其設(shè)想是將PCR反應(yīng)體系分割成數(shù)萬個微滴后,利用化學(xué)發(fā)光探針(如基于魯米諾或吖啶酯的體系)進(jìn)行檢測:在擴增陽性微滴中,探針被切割或構(gòu)象改變觸發(fā)化學(xué)發(fā)光反應(yīng),通過計數(shù)發(fā)光的微滴數(shù)目即可實現(xiàn)核酸分子的定量。這種方法可能免除對復(fù)雜激發(fā)光學(xué)系統(tǒng)的依賴,并有望利用某些化學(xué)發(fā)光體系更高的信噪比特性,進(jìn)一步提升對極低豐度靶標(biāo)的檢出能力。遼寧CRET技術(shù)均相發(fā)光優(yōu)點專注體外診斷,均相化學(xué)發(fā)光凍干試劑,品質(zhì)值得信賴!

均相發(fā)光技術(shù)比較明顯的優(yōu)勢是其操作的極度簡便性所帶來的高通量檢測能力。由于摒棄了所有分離步驟,典型的均相發(fā)光檢測只需將樣本、識別元件(如抗體)和發(fā)光試劑依次加入微孔板中,混合孵育后即可直接讀數(shù)。這種“加樣-孵育-檢測”的模式,將復(fù)雜的多步流程簡化為一步或兩步,不僅大幅縮短了檢測時間(通常可在幾分鐘到一小時內(nèi)完成),還大限度地減少了人為操作誤差和交叉污染的風(fēng)險。這一特性使其完美適配現(xiàn)代自動化液體處理系統(tǒng)和多通道檢測儀,能夠輕松實現(xiàn)每天處理數(shù)萬甚至數(shù)十萬個樣本的超高通量篩選,在藥物發(fā)現(xiàn)、功能基因組學(xué)等需要海量數(shù)據(jù)積累的領(lǐng)域具有不可替代的價值。
均相發(fā)光技術(shù)也普遍用于細(xì)胞水平的分析,如細(xì)胞活力、凋亡和化合物毒性篩選。例如,基于ATP含量的細(xì)胞活力檢測:活細(xì)胞含有豐富的ATP,細(xì)胞裂解后釋放的ATP可與熒光素酶反應(yīng)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光,發(fā)光強度與活細(xì)胞數(shù)量成正比。整個過程在同一個孔中加入裂解/檢測試劑即可完成,是均相操作的典范。對于細(xì)胞凋亡,可通過檢測caspase酶活性(使用熒光底物或發(fā)光底物)來實現(xiàn)均相分析。細(xì)胞毒性檢測則可測量因細(xì)胞膜損傷而釋放的胞內(nèi)酶(如乳酸脫氫酶LDH)活性,通過偶聯(lián)的發(fā)光反應(yīng)來定量。這些方法實現(xiàn)了對細(xì)胞狀態(tài)的快速、高通量、自動化評估。浦光生物均相化學(xué)發(fā)光,一步到位!

GPCR是比較大的藥物靶點家族,其功能研究涉及配體結(jié)合、第二信使產(chǎn)生、下游信號通路活化等多個層面。均相發(fā)光技術(shù)多方面滲透于此領(lǐng)域。對于配體結(jié)合競爭實驗,可采用TR-FRET,將受體標(biāo)記供體,配體標(biāo)記受體。對于GPCR活化后比較關(guān)鍵的cAMP積累或IP3/DAG產(chǎn)生,均有成熟的均相檢測試劑盒。例如,cAMP檢測常采用基于抗體競爭原理的均相發(fā)光免疫分析。細(xì)胞裂解后,內(nèi)源性cAMP與加入的標(biāo)記cAMP競爭結(jié)合有限量的抗cAMP抗體。抗體結(jié)合事件通過FRET或Alpha技術(shù)被檢測,信號強度與內(nèi)源性cAMP濃度成反比。這類方法直接在細(xì)胞裂解液中進(jìn)行,快速、靈敏,完美契合GPCR激動劑/拮抗劑的高通量篩選。均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)的檢測流程是怎樣的,復(fù)雜嗎?吉林均相化學(xué)發(fā)光均相發(fā)光解決方案
浦光均相發(fā)光檢測試劑盒,操作簡便,快速獲得可靠結(jié)果!吉林均相化學(xué)發(fā)光均相發(fā)光解決方案
適配體是通過體外篩選得到的單鏈DNA/RNA分子,能特異性結(jié)合小分子、蛋白質(zhì)甚至細(xì)胞。將適配體的高特異性與均相化學(xué)發(fā)光的高靈敏度結(jié)合,催生了新型生物傳感器。設(shè)計策略包括:構(gòu)象開關(guān)型:適配體與化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物(如吖啶酯)和淬滅基團相連,結(jié)合靶標(biāo)后構(gòu)象變化,改變發(fā)光效率。分裂型:將化學(xué)發(fā)光酶或催化其反應(yīng)的組分分割,分別與分裂的適配體序列連接,靶標(biāo)存在時適配體重組,恢復(fù)發(fā)光活性。鄰近連接型:兩個適配體分別結(jié)合靶標(biāo)的不同部位,拉近其攜帶的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)組分(如供體/受體珠),觸發(fā)信號。這些傳感器在環(huán)境監(jiān)測、食品安全和生物標(biāo)志物檢測中潛力巨大。吉林均相化學(xué)發(fā)光均相發(fā)光解決方案