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發(fā)布時(shí)間:2025-04-26
天然培養(yǎng)基血清種類:目用于組織培養(yǎng)的血清主要是牛血清,培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也用人血清、馬血清等。選擇用牛血清培養(yǎng)細(xì)胞的原因:來(lái)源充足、制備技術(shù)成熟,3%甘露醇發(fā)酵培養(yǎng)基、經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的應(yīng)用考驗(yàn)人們對(duì)其有比較深入的理解。牛血清對(duì)絕大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞都是適合的,但并不排除在培養(yǎng)某種細(xì)胞時(shí)使用其他動(dòng)物血清更合適。牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量比較大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份,3%甘露醇發(fā)酵培養(yǎng)基,具有極為重要的功能。牛血清分為小牛血清,3%甘露醇發(fā)酵培養(yǎng)基、新牛血清、胎牛血清。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。顯然,胎牛血清是品質(zhì)比較高的,因?yàn)樘ヅ_未接觸外界,血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分較少。自制培養(yǎng)基需要小心配比,防止成分誤差或者污染。3%甘露醇發(fā)酵培養(yǎng)基

半固體培養(yǎng)基(half-solid medium) 在液體培養(yǎng)基中加人0.2%~0.5%的瓊脂粉,加熱溶解后冷卻即成,以倒置不流動(dòng)的較軟狀態(tài)為宜,一般供細(xì)菌動(dòng)力試驗(yàn)、菌種傳代、保存和儲(chǔ)運(yùn)標(biāo)本之用。固體培養(yǎng)基(solid medium) 培養(yǎng)基中含有足量的凝固劑(瓊脂粉>0.5%),在常溫下能保持固體狀態(tài)。此類培養(yǎng)基大都用于微生物的分離、純化、藥敏試驗(yàn)及菌苗制造。如營(yíng)養(yǎng)瓊脂、營(yíng)養(yǎng)斜面、SS瓊脂、TCBS瓊脂等。此外,還有一些特殊用途的培養(yǎng)基,如用血清或雞蛋做凝固劑配成的呂氏血清斜面培養(yǎng)基、雞蛋斜面培養(yǎng)基等。GAM半固體培養(yǎng)基(不含葡萄糖)液體培養(yǎng)基普遍應(yīng)用于微生物菌株的生長(zhǎng)、染色及細(xì)胞背景下的細(xì)胞培養(yǎng)等方面。

bFGF是一個(gè)肝素結(jié)合的多膚類絲裂源,普遍分布于各種組織中。bFGF 是一種重要的細(xì)胞增殖分化調(diào)節(jié)劑,可刺激多種細(xì)胞的增殖。有研究發(fā)現(xiàn)它對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞也有促增殖作用。bFGF 主要是與細(xì)胞膜上FGF受體結(jié)合發(fā)揮作用,刺激與增殖有關(guān)的基因表達(dá)。Thomson 等認(rèn)為,像其他體外培養(yǎng)的人體細(xì)胞一樣,hES 細(xì)胞要求 bFGF 的存在以促進(jìn)增殖。同理EGF(上皮生長(zhǎng)因子) , 是人體內(nèi)的一種活性物質(zhì),由53個(gè)氨基組成的活細(xì)胞,藉由刺激表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體之酪氨酸磷酸化,達(dá)到修補(bǔ)增生肌膚表層細(xì)胞,據(jù)說(shuō)對(duì)受傷、受損之表皮肌膚擁有很好的療效,其較大特點(diǎn)是能夠促進(jìn)細(xì)胞的增殖分化。所以加入它們都是促進(jìn)細(xì)胞增殖的。
通常用心、腦或其他臟器浸液配制厭氧菌培養(yǎng)基,并常需加入硫乙醇酸鈉、半胱氨酸、肉渣、還原鐵、活性炭等還原劑或除氧材料。在液體培養(yǎng)基中還可加入刃天青或亞甲基藍(lán)作為氧化還原指示劑,以觀察培養(yǎng)基的含氧程度。心、腦浸液、肝塊、肉渣中含有不飽和脂肪酸,能吸收培養(yǎng)基中的氧。硫乙醇酸鈉、半胱氨酸是較強(qiáng)的還原劑,能消耗溶解在培養(yǎng)基中的氧。干燥的活性炭和脫脂棉同樣能吸收培養(yǎng)基中的氧。所以培養(yǎng)基中加入還原劑和吸收材料,目的都是為造成培養(yǎng)基的缺氧環(huán)境,使培養(yǎng)基保持較低的氧化還原電勢(shì)。此外,還可在培養(yǎng)基表面加一層液體石蠟,以隔絕培養(yǎng)基與大氣的接觸。固體培養(yǎng)基則通過(guò)向液態(tài)培養(yǎng)基中加入凝膠劑來(lái)制成,以便在培養(yǎng)過(guò)程中提供可視化定位細(xì)胞的單元。

培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度合適時(shí)微生物才能生長(zhǎng)良好,營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度過(guò)低時(shí)不能滿足微生物正常生長(zhǎng)所需,濃度過(guò)高時(shí)則可能對(duì)微生物生長(zhǎng)起抑制作用,例如高濃度糖類物質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽、重金屬離子等不僅不能維持和促進(jìn)微生物的生長(zhǎng),反而起到抑菌或殺菌作用。另外,培養(yǎng)基中各營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)之間的濃度配比也直接影響微生物的生長(zhǎng)繁殖和(或)代謝產(chǎn)物的形成和積累,其中碳氮比(C/N)的影響較大。嚴(yán)格地講,碳氮比指培養(yǎng)基中碳元素與氮元素的物質(zhì)的量比值,有時(shí)也指培養(yǎng)基中還原糖與粗蛋白之比。例如,在利用微生物發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸的過(guò)程中,培養(yǎng)基碳氮比為4/1時(shí),菌體大量繁殖,谷氨酸積累少;當(dāng)培養(yǎng)基碳氮比為3/1時(shí),菌體繁殖受到抑制,谷氨酸產(chǎn)量則大量增加。 培養(yǎng)基應(yīng)適合不同類型細(xì)菌的生長(zhǎng),包括需氧菌和厭氧菌。YPD瓊脂
培養(yǎng)基是細(xì)胞和微生物生長(zhǎng)所需的基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和環(huán)境條件。3%甘露醇發(fā)酵培養(yǎng)基
不同類型微生物生長(zhǎng)對(duì)氧化還原電位(F)的要求不一樣,一般好氧性微生物在F值為+0.1V以上時(shí)可正常生長(zhǎng),一般以+0.3一+0.4V為宜,厭氧性微生物只能在F值低于+0.1V條件下生長(zhǎng),兼性厭氧微生物在F值為+0.1V以上時(shí)進(jìn)行好氧呼吸,在+0.1V以下時(shí)進(jìn)行發(fā)酵。F值與氧分壓和pH有關(guān),也受某些微生物代謝產(chǎn)物的影響。在pH相對(duì)穩(wěn)定的條件下,可通過(guò)增加通氣量(如振蕩培養(yǎng)、攪拌)提高培養(yǎng)基的氧分壓,或加入氧化劑,從而增加F值;在培養(yǎng)基中加入抗壞血酸、硫化氫、半胱氨酸、谷胱甘肽、二硫蘇糖醇等還原性物質(zhì)可降低F值。3%甘露醇發(fā)酵培養(yǎng)基
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