如何高效率實現細胞轉染：瞬時轉染與穩定轉染常規轉染技術根據基因表達時間的長短可分為兩大類，一類是瞬時轉染，一類是穩定轉染（很長轉染）。瞬時轉染的細胞中，外源基因得以表達但它們并不會整合到細胞的基因組中，也就不會被復制。細胞中瞬時轉染的外源基因表達時間有限，通常*持續幾天，直到外源基因在細胞分裂過程中因各種因素丟失為止。在瞬時轉染質粒中往往都含有一個報告基因，來指示細胞中目標基因是否存在，這樣的報告基因一般可以在轉染后一兩天內檢測到。轉染試劑與細胞不匹配細胞轉染較適合的不是原代細胞。徐州正規細胞高效轉染試劑廠家直銷

細胞轉染，你至少要掌握以下幾點：主要有下面幾種方法：：化學法：磷酸鈣法、DEAE-右旋糖苷法、陽離子脂質體法；物理法：電穿孔法、顯微注射法、顆粒傳遞法；細菌介導法：逆轉錄細菌、腺細菌A. 陽離子脂質體法：帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內吞。特點：簡單通用，適用性廣，轉染效率高，重復性好，但轉染時需除血清，轉染效率隨細胞類型變化大。由于脂質體復合物與貼壁細胞的接觸機會遠大于懸浮細胞，所以貼壁比懸浮轉染效率要高。懸浮細胞建議使用電穿孔法。B. 電穿孔法：利用高壓電脈沖對細胞膜的干擾，使其形成利于核酸進入的微孔。徐州細胞高效轉染試劑報價瞬時表達分析所需的人力和時間比穩定表達少。

轉染的注意事項：瞬時和穩定表達DNA轉染后，轉入基因的表達可以在1－4天內檢測到。*有一部分轉入細胞的DNA被轉運到細胞核內進行轉錄并較終輸出mRNA到細胞質進行蛋白合成。幾天內，大部分外源DNA會被核酸酶降解或隨細胞分裂而稀釋；一周后就檢測不到其存在了。瞬時表達分析檢測未重組質粒DNA上基因的表達。因此，表達水平與位臵無關，不會受到周圍染色體元件的影響。瞬時表達分析所需的人力和時間比穩定表達少，但因為DNA攝入效率和表達水平在不同實驗中差異較大，實驗必須很小心。為了進行穩定表達，轉入的基因必須能和細胞同步復制。在轉染的質粒自發整合到宿主基因組上時就會如此。在一小部分轉染的細胞中，加入的DNA通過重組整合到基因組上。包含整合DNA的細胞很少，必須通過對藥物的抗性篩選進行擴增或通過表型變化進行鑒定。

細胞轉染的常用方法：細菌轉染：原理：對于用脂質體不能實現轉染的細胞，可以采用細菌轉染。可用于蛋白質過表達或克制，是臨床研究中較常用的方法。它通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中，可用于難轉染細胞、原代細胞的穩定性轉染。實驗步驟：通過基因克隆生成重組細菌 → 采用非細菌法轉染包裝細胞系，擴增并分離得到重組細菌顆粒→純化并滴定細菌液→轉導目的細胞（含有細菌特異性的受體）→去除培養物中的細菌，并加入新鮮培養基→分析細胞瞬時基因表達或沉默情況。使用基質珠做為固相支持可以使貼壁細胞懸浮生長。

細胞轉染操作方法：轉染 ，是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉染目前已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例；化學介導方法很多，如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術；生物介導方法，有較為原始的原生質體轉染，和現在比較多見的各種細菌介導的轉染技術。理想細胞轉染方法，應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優點。細菌介導的轉染技術，是目前轉染效率較高的方法，同時具有細胞毒性很低的優勢。但是，細菌轉染方法的準備程序復雜，常常對細胞類型有很強的選擇性，在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學介導的轉染方法，則各有其特點。建議選擇50%~80%區間密度進行細胞轉染。珠海細胞高效轉染試劑哪家好

在轉染過程中是可以使用血清的。徐州正規細胞高效轉染試劑廠家直銷

細胞轉染為什么不能加血清：不同的細胞及轉染試劑要求轉染的條件是不同 的。較好是在靠前次實驗前做一個預實驗，比如：HeLa，293，CHO，COS7， MCF－7，HepG2等細胞，是否加血清，對不同的細胞是有不同的影響的，有些細胞是可以有血清的，有些加血清就會受影響。轉染后在6小時左右較好換液且換為有血清的培養基，其一因為普通轉染試劑對細胞的毒性作用大，其二可降低因血清的缺乏引起的細胞的死亡。轉染時不加血清是防止血清的干擾作用，轉染后可適時加入。加入過早會引起未轉染細胞的優勢生長，過晚會引起較多細胞死亡。可實時觀察1/5細胞變圓的時候加入血清。徐州正規細胞高效轉染試劑廠家直銷

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