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293細胞PEI轉染試劑使用比例

來源: 發布時間:2023-08-07

方法:1.細胞分盤:通過胰酶消化收集細胞,用適當的完全培養基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養皿上(根據實驗需要選擇培養皿,使細胞貼壁后所占總面積達到培養皿面積的70-90%)。根據細胞貼壁情況于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當細胞貼壁完全后即可開始轉染。轉染前換入2mL預熱的無血清培養基。2.制備PEI-DNA混合物:以60mm組織培養皿用420μL反應總體積為例。準備兩支1.5mL離心管,一管將質粒DNA(總量2-8μg為佳)加入240μLHBS中,混勻。另一管中則用HBS將100μM的PEI儲存液稀釋成10μM,充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中,充分混勻后室溫靜置20-30min。將這420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養基中,輕輕搖動平皿混勻,置于含5%~7%CO2的37℃溫箱孵育。注:每次用100μM的PEI儲存液前都需要先將其充分混勻,保證所取的濃度一致。3.培養6-10h后更換為37℃預熱的含有血清的培養基,繼續培養,16h左右可以觀測到報告基因的表達。更多關于PEI轉染試劑相關產品問題,歡迎咨詢上海曼博生物!Polysciences轉染試劑怎么樣?293細胞PEI轉染試劑使用比例

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線性PEI轉染試劑是一種陽離子聚合物,分子量25000,它能與核酸形成復合物,并使該復合物進入哺乳動物細胞。線性PEI轉染試劑廣適用于常見細胞系,如HEK-293、HEK293T、HepG2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3和Sf9等。該試劑即使在有血清存在的情況下,它仍然能的將核酸導入細胞。78bio公司提供的線性PEI轉染試劑具有如下優點:優越的轉染效率,重組蛋白的高表達水平,與含血清的培養基相兼容,低細胞毒性,易于操作?質量控制每批次線性PEI轉染試劑均經過轉染測試。將eGFP表達質粒(GeneCopoeiaCat.No.EX-EGFP-Lv01)用EndoFectinTM-Plus轉染試劑轉入亞融合狀態的HEK-293細胞,轉染16h后,超過95%的細胞表達eGFP。四川PEI轉染試劑怎么樣使用PEI轉染試劑的殘留檢測方法怎么開發?

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1、對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。

2、對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。

3、即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。

穩定轉染方法:1.接種細胞:轉染前,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養基稀釋適量DNA。用同樣的培養基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。更多關于PEI轉染試劑相關的產品信息,歡迎咨詢上海曼博生物!PEI轉染試劑對復合物孵化的時間是有要求的,一般建議5~20分鐘之間。

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穩定轉染方法:1.接種細胞:轉染前一晚,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養基稀釋適量DNA。用同樣的培養基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養板/培養皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養基,替換成無血清培養基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養基。用PEI轉染試劑時出現沉淀是什么原因?科研級PEI轉染試劑說明書

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隨著科學技術發展,醫藥冷鏈物流技術不斷涌現,同時在我國高度重視下,冷鏈物流標準逐漸完善。但我國醫藥健康仍存在體系不完善、物流成本高和技術、設施落后的問題。在市場機遇與現存問題面前,如何把握醫藥健康未來發展趨勢顯得尤為重要。我國高度重視血小板裂解液,WB自動孵育系統,微流控器官芯片,藍牙無線標簽機的供應保證工作,推動研發和供應保證也是深化醫藥衛生體制改進的重要任務。醫藥相關部門多次發布政策文件,鼓勵血小板裂解液,WB自動孵育系統,微流控器官芯片,藍牙無線標簽機的研發和生產,提高醫藥的供應保證能力。隨著西方健康服務理念的進入及國內需求市場的飛速增長,國內以體檢為重點的有限責任公司得到了飛速發展,尤其是近年來,健康服務機構飛速發展。盡管中國老年健康服務目前仍處于初始發展階段,但近年來我國出臺了一些扶持政策,市場空間逐漸打開。生物醫藥科技(人體干細胞、基因診斷與zhiliao技術開發和應用除外)領域內的技術開發、自有技術轉讓,并提供相關的技術咨詢和技術服務;計算機軟件的開發、設計、制作(音像制品、電子出版物除外)、銷售自產產品;實驗室試劑及耗材(藥品、危險品除外)、化工原料及產品(除危險化學品、監控化學品、煙花爆竹、民用baozha物、易制毒化學品)、儀器儀表、機械設備、電子設備、塑料制品、玻璃制品、辦公用品、電子產品的批發、進出口、傭金代理(拍賣除外)。【依法須經批準的項目,經相關部門批準后方可開展經營活動】是我國國民經濟重要組成部分之一,具有高產出、高危險、高技術密集型特點,有很強的技術壁壘。而且對于保護和增進大家健康、提高生活質量,為計劃生育、救災防疫、**戰備以及促進經濟發展和社會進步均具有十分重要的作用。293細胞PEI轉染試劑使用比例

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