樣本制備關(guān)鍵細胞懸液均勻性:細胞團會導致計數(shù)偏高(算法可能將團塊誤判為單個細胞),需充分吹打或過濾(用 40-70μm 細胞篩)。染色時間:臺盼藍染色超過 5 分鐘可能導致活細胞被染色,影響活率計算,需嚴格控制時間。濃度適配:濃度過低(<1×10?個 /mL)會導致計數(shù)誤差大,可減少稀釋倍數(shù);濃度過高(>1×10?個 /mL)會導致細胞重疊,需增加稀釋倍數(shù)。2. 儀器與耗材維護計數(shù)板清潔:重復使用的計數(shù)板需用無水乙醇或 75% 酒精擦拭,避免殘留細胞或染料影響下次計數(shù);禁止用硬物刮擦計數(shù)池。鏡頭保護:若圖像模糊,用鏡頭紙輕輕擦拭鏡頭,勿用酒精或其他試劑。定期校準:按儀器說明書定期校準(如用標準微球溶液),確保計數(shù)準確性。3. 結(jié)果驗證若對結(jié)果存疑,可通過顯微鏡手動計數(shù)(血細胞計數(shù)板)進行比對。同一樣本多次計數(shù)(3 次以上),取平均值以減少誤差。計數(shù)儀對這些電信號進行分析和處理,從而得到細胞的數(shù)量、大小、熒光強度等信息。高校熒光細胞計數(shù)儀詢問報價

高通量樣本加載儀器通過多通道微流控芯片(如6孔、8孔、96孔板適配)或自動化進樣系統(tǒng),同時加載多個樣本(如一次處理6-384個樣本),每個樣本分配到**的微通道或反應池,避免交叉污染。光學系統(tǒng)掃描光源:采用LED或激光作為光源,提供明場(白光)或熒光激發(fā)光(特定波長,如488nm激發(fā)AO,535nm激發(fā)PI)。物鏡與相機:配備高分辨率顯微物鏡(通常20-40倍)和高速CCD/CMOS相機,對每個樣本的多個視野(如每個樣本掃描10-30個視野)進行快速成像,確保覆蓋足夠多的細胞,減少統(tǒng)計誤差。自動化移動平臺:載物臺通過精密電機控制,實現(xiàn)X/Y軸自動移動,快速切換不同樣本和視野,完成全樣本掃描(整個過程通常在1-5分鐘內(nèi)完成)。江蘇高速自動化系統(tǒng)細胞計數(shù)儀功能懸浮細胞(如 PBMC):庫爾特原理或微流控阻抗法更高效。

手工計數(shù)(血細胞計數(shù)板法)是傳統(tǒng)的細胞計數(shù)基準,可直接驗證自動計數(shù)儀的準確性。操作步驟:取同一份細胞懸液,按自動計數(shù)儀標準流程計數(shù)(重復 3 次,取平均值)。同時用血細胞計數(shù)板手工計數(shù):取 10μL 細胞懸液(或染色后的混合液)滴加至計數(shù)板計數(shù)室,顯微鏡下計數(shù) 4 個角 + 中心共 5 個大方格的細胞數(shù)。計算濃度:濃度(個 /mL)=(5 個方格總細胞數(shù) ÷5)×10?× 稀釋倍數(shù)。比較兩種方法的結(jié)果:若偏差在10%-15% 以內(nèi),說明自動計數(shù)儀準確性可接受;若偏差過大(如 > 20%),需排查自動計數(shù)儀的參數(shù)設置(如細胞大小閾值、是否排除團塊)或手工計數(shù)是否有誤(如漏數(shù)、計數(shù)區(qū)域錯誤)。
驗證儀器在不同濃度范圍內(nèi)的計數(shù)準確性,確認其是否符合說明書標注的線性范圍(如 1×10?-1×10?個 /mL)。操作步驟:制備一份高濃度細胞懸液(如 2×10?個 /mL),用稀釋液按1:2、1:4、1:8、1:16等比例梯度稀釋。用自動計數(shù)儀對每個稀釋度計數(shù),記錄實測濃度。以 “理論濃度”(稀釋前濃度 × 稀釋倍數(shù))為橫坐標,“實測濃度” 為縱坐標,繪制散點圖并計算相關(guān)系數(shù)(R2)。若 R2>0.98,說明儀器在該范圍內(nèi)線性良好;若低濃度(如 <1×10?個 /mL)或高濃度(如> 1×10?個 /mL)時偏離線性,需避免在該范圍使用,或通過濃縮 / 稀釋調(diào)整濃度。拍攝細胞懸液顯微圖像,利用軟件識別細胞邊界并計數(shù)(適用于貼壁細胞、懸浮細胞)。

若儀器支持活 / 死細胞區(qū)分(如臺盼藍染色),需驗證其對死細胞的識別能力。操作步驟:制備 “已知活率” 的細胞懸液:取活細胞懸液,分為兩組:一組直接用臺盼藍染色(活率≈100%);另一組通過加熱(如 56℃處理 10 分鐘)或凍融殺死部分細胞,制備 “低活率樣本”(如活率 30%-50%)。用自動計數(shù)儀計數(shù)活 / 死細胞比例,同時用手工計數(shù)(顯微鏡下觀察染況)對比。若自動計數(shù)的活率與手工計數(shù)偏差 <10%,說明染色識別功能可靠;若死細胞被誤判為活細胞(或反之),需檢查染色時間(是否過短 / 過長)或儀器的 “細胞大小閾值”(是否誤將碎片當作死細胞)。全自動細胞計數(shù)儀在疾病診斷中,可對穿刺活檢等樣本中的細胞進行計數(shù)和分析。高校高通量細胞計數(shù)儀廠家供應
光路校準:檢查并調(diào)整計數(shù)儀的光路系統(tǒng),確保光源正常、光路暢通,使圖像清晰、穩(wěn)定。高校熒光細胞計數(shù)儀詢問報價
全自動細胞計數(shù)儀的非染色計數(shù)模式,避免了傳統(tǒng)染色法可能造成的細胞死亡問題:全自動細胞計數(shù)儀的非染色計數(shù)模式是其在細胞檢測領域的一大創(chuàng)新。傳統(tǒng)的細胞計數(shù)方法通常需要使用染色劑對細胞進行染色,以便在顯微鏡下觀察和計數(shù)。然而,染色劑可能會對細胞產(chǎn)生一定的毒性,導致部分細胞死亡,從而影響計數(shù)結(jié)果的準確性。全自動細胞計數(shù)儀的非染色計數(shù)模式則避免了這一問題。它利用細胞本身的光學特性,如散射光、熒光等,通過先進的光學系統(tǒng)和圖像識別技術(shù),實現(xiàn)對細胞的準確計數(shù)。這種非染色計數(shù)模式不僅減少了對細胞的損傷,還能更真實地反映細胞的原始狀態(tài),為細胞研究提供了更加可靠的數(shù)據(jù)。高校熒光細胞計數(shù)儀詢問報價