激酶是重要的藥物靶點,其活性檢測是藥物篩選的關(guān)鍵。均相發(fā)光技術(shù),尤其是TR-FRET和Alpha技術(shù),為此提供了理想平臺。以TR-FRET為例:將待測激酶、底物肽、ATP與待篩選化合物共同孵育。體系中包含兩種抗體,一種針對磷酸化底物(帶供體標記),另一種針對底物肽的標簽(帶受體標記)。只有當激酶活性正常,底物被磷酸化后,兩個抗體才能同時結(jié)合到底物肽上,使供受體靠近產(chǎn)生FRET信號。若化合物能抑制激酶,則磷酸化水平下降,F(xiàn)RET信號減弱。這種方法無需分離,可直接在含有ATP、激酶和化合物的混合液中實時或終點法檢測,通量極高,是發(fā)現(xiàn)激酶抑制劑的主流手段。32.無需冷鏈運輸!浦光生物均相發(fā)光凍干試劑可常溫運輸,降低運輸成本,輕松觸達偏遠地區(qū)!廣西診斷試劑均相發(fā)光的原理

組蛋白修飾酶(如甲基轉(zhuǎn)移酶、去甲基酶、乙酰轉(zhuǎn)移酶、去乙酰化酶)是**、神經(jīng)疾病等領(lǐng)域的熱門靶點。均相化學發(fā)光技術(shù)為這些酶活性的檢測和抑制劑篩選建立了成熟平臺。以組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶為例,通常使用生物素標記的S-腺苷甲硫氨酸(SAM)類似物作為甲基供體。酶反應(yīng)后,生物素標記的甲基被轉(zhuǎn)移到組蛋白底物上。然后,使用針對甲基化位點的抗體(偶聯(lián)供體珠)和鏈霉親和素(偶聯(lián)受體珠)通過Alpha技術(shù)檢測,信號強度與酶活性成正比。這種方法靈敏度高,抗干擾能力強,可直接在含有化合物和輔因子的混合體系中進行篩選。化學發(fā)光均相發(fā)光臨床檢驗醫(yī)學中的應(yīng)用研究均相化學發(fā)光,國家重點實驗室檢測平臺,領(lǐng)航醫(yī)療新時代!

Alpha(Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay)技術(shù)是均相化學發(fā)光的典范。其供體珠中裝載光敏劑,在680nm激光激發(fā)下,將周圍環(huán)境中的氧分子轉(zhuǎn)化為高能量、短壽命(約4微秒)的單線態(tài)氧。單線態(tài)氧在溶液中的擴散半徑只約200納米。受體珠中則裝載了化學發(fā)光劑(通常是噻吩衍生物)和熒光接收體。當單線態(tài)氧擴散進入鄰近的受體珠,會觸發(fā)一系列級聯(lián)反應(yīng):化學發(fā)光劑被氧化并發(fā)光,該能量隨即傳遞給熒光接收體,比較終發(fā)射出波長更長(520-620nm)、特征更明顯的熒光。這個能量轉(zhuǎn)移和放大的過程,使得一個單線態(tài)氧分子能引發(fā)大量發(fā)光分子的發(fā)射,實現(xiàn)了信號的有效放大,因此靈敏度極高。
均相發(fā)光技術(shù)正逐步應(yīng)用于食品安全和環(huán)境監(jiān)測等多應(yīng)用領(lǐng)域。例如,檢測食品中的毒(如黃曲霉素)、抵抗細菌藥物殘留或病原菌等。通過設(shè)計針對這些污染物的抗體或適配體,并將其與均相化學發(fā)光信號系統(tǒng)偶聯(lián),就可以開發(fā)出快速、高通量的篩查方法。相較于傳統(tǒng)的色譜或微生物學方法,均相化學發(fā)光技術(shù)具有檢測更快捷,適合大批量樣本的初篩的特點。在環(huán)境監(jiān)測中,常常可用于檢測水中的重金屬離子、有機污染物等,具有現(xiàn)場快速分析的潛力。均相化學發(fā)光技術(shù)的原理是什么,如何實現(xiàn)檢測?

在藥物安全性評價早期,評估化合物的遺傳毒性至關(guān)重要。傳統(tǒng)的細菌回復突變試驗(Ames試驗)周期較長。一些基于哺乳動物細胞的均相化學發(fā)光遺傳毒性篩選方法被開發(fā)出來。例如,使用工程細胞系,其中DNA損傷響應(yīng)元件(如p53響應(yīng)元件)調(diào)控著熒光素酶報告基因的表達。當化合物引起DNA損傷時,會活化報告基因,產(chǎn)生化學發(fā)光信號。這類方法能在幾天內(nèi)完成對大量化合物的初步遺傳毒性風險評估,作為Ames試驗的高通量預篩選工具,有助于早期淘汰有風險的候選分子,節(jié)約研發(fā)成本。創(chuàng)新驅(qū)動未來!均相化學發(fā)光創(chuàng)新產(chǎn)品引導體外診斷新潮流!江西第五代化學發(fā)光均相發(fā)光臨床檢驗醫(yī)學中的應(yīng)用研究
均相化學發(fā)光技術(shù)在臨床檢驗中的普及程度。廣西診斷試劑均相發(fā)光的原理
自身免疫病的診斷常依賴于檢測患者血清中的特異性自身抗體。均相化學發(fā)光技術(shù)為此提供了高通量、自動化的解決方案。例如,可以將已知的自身抗原(如dsDNA、ENA蛋白)包被在供體微珠上,患者血清中的自身抗體如果存在,則會與抗原結(jié)合。然后加入標記有受體(如熒光標記的抗人IgG抗體)的受體微珠或試劑,形成“抗原-自身抗體-抗人IgG”復合物,從而拉近供受體產(chǎn)生信號。這種方法可以實現(xiàn)多種自身抗體的同步檢測,快速輔助臨床診斷。廣西診斷試劑均相發(fā)光的原理