時間分辨熒光共振能量轉(zhuǎn)移(TR-FRET)是FRET技術的升級版,它結(jié)合了FRET的高空間分辨率和時間分辨熒光(TRF)的長壽命信號優(yōu)勢。TR-FRET使用鑭系元素螯合物(如銪Eu3+、鋱Tb3+)作為供體。這類供體具有熒光壽命極長(微秒至毫秒級)的特點。檢測時,使用脈沖光源激發(fā)后,在短暫延遲后(例如50-100微秒)再測量熒光,此時普通背景熒光(壽命只納秒級)已完全衰減,而長壽命的供體熒光及其通過FRET轉(zhuǎn)移產(chǎn)生的受體熒光(通常使用別藻藍蛋白APC或d2等作為受體)則被特異性檢測到。這一設計幾乎完全消除了樣本基質(zhì)、微孔板及試劑本身的短壽命背景熒光干擾,將檢測的信噪比和靈敏度提升至新的高度,特...
蛋白質(zhì)錯誤折疊和聚集與阿爾茨海默病、帕金森病等密切相關。均相化學發(fā)光方法可用于監(jiān)測聚集過程。例如,將待研究的蛋白(如β-淀粉樣蛋白、α-突觸蛋白)分別與化學發(fā)光供體(如魯米諾衍生物)和受體(如熒光染料或淬滅劑)標記。當?shù)鞍滋幱趩误w狀態(tài)時,兩者距離較遠,信號弱;當發(fā)生聚集時,不同標記的分子被納入同一聚集體,供體與受體靠近,通過CRET或淬滅效應導致信號特征改變。該方法可實時監(jiān)測聚集動力學,并用于篩選能抑制聚集的小分子化合物。均相化學發(fā)光在心血管疾病診斷中的應用價值是什么?江西干式化學發(fā)光均相發(fā)光應用領域均相化學發(fā)光(Homogeneous Chemiluminescence)是將化學發(fā)光檢測技術...
均相發(fā)光技術也普遍用于細胞水平的分析,如細胞活力、凋亡和化合物毒性篩選。例如,基于ATP含量的細胞活力檢測:活細胞含有豐富的ATP,細胞裂解后釋放的ATP可與熒光素酶反應產(chǎn)生化學發(fā)光,發(fā)光強度與活細胞數(shù)量成正比。整個過程在同一個孔中加入裂解/檢測試劑即可完成,是均相操作的典范。對于細胞凋亡,可通過檢測caspase酶活性(使用熒光底物或發(fā)光底物)來實現(xiàn)均相分析。細胞毒性檢測則可測量因細胞膜損傷而釋放的胞內(nèi)酶(如乳酸脫氫酶LDH)活性,通過偶聯(lián)的發(fā)光反應來定量。這些方法實現(xiàn)了對細胞狀態(tài)的快速、高通量、自動化評估。均相化學發(fā)光新突破!凍干試劑來了,靈敏度更高,結(jié)果更準確!黑龍江技術升級均相發(fā)光離子...
均相發(fā)光是一種先進的生物化學檢測技術,其關鍵特征在于整個檢測反應過程均在均一的液相中進行,無需任何固相分離步驟(如洗滌、離心)。 它通過巧妙的設計,將待測物的特異性識別事件(如抗原-抗體結(jié)合、酶-底物反應)直接轉(zhuǎn)化為可檢測的光信號。 實現(xiàn)這一目標的關鍵在于依賴能量轉(zhuǎn)移、空間位阻改變或化學環(huán)境變化等機制,使信號分子(供體)與淬滅分子(受體)或發(fā)光底物在結(jié)合事件發(fā)生前后,其相互作用效率發(fā)生明顯改變,從而導致發(fā)光信號的增強或猝滅。與傳統(tǒng)的異相免疫分析(如ELISA)相比,均相發(fā)光技術具有操作簡便、通量高、易于自動化、試劑消耗少、檢測速度快等突出優(yōu)點,極大地推動了高通量藥物篩選、臨床診斷和基礎生命科學...
在重癥炎癥(如膿毒癥)、CAR-T診療或某些自身免疫病中,細胞因子風暴是危及生命的狀態(tài),需要快速監(jiān)測多種炎癥因子。基于微球陣列的均相化學發(fā)光多重檢測技術,能夠從單份微量血清或血漿樣本中,同時定量檢測IL-6、IL-1β、TNF-α、IFN-γ等十幾種關鍵細胞因子的濃度。這種高通量、多參數(shù)的分析能力,使得臨床醫(yī)生或研究人員能夠多方面、快速地掌握患者的炎癥風暴譜系,評估嚴重程度,并監(jiān)測診療干預(如抗細胞因子抗體)的效果,為精細免疫調(diào)控提供依據(jù)。均相化學發(fā)光技術的原理是什么,如何實現(xiàn)檢測?北京干式化學發(fā)光均相發(fā)光解決方案研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)-核酸等生物分子間的相互作用,對于理解生命過程至關重要...
均相發(fā)光技術也普遍用于細胞水平的分析,如細胞活力、凋亡和化合物毒性篩選。例如,基于ATP含量的細胞活力檢測:活細胞含有豐富的ATP,細胞裂解后釋放的ATP可與熒光素酶反應產(chǎn)生化學發(fā)光,發(fā)光強度與活細胞數(shù)量成正比。整個過程在同一個孔中加入裂解/檢測試劑即可完成,是均相操作的典范。對于細胞凋亡,可通過檢測caspase酶活性(使用熒光底物或發(fā)光底物)來實現(xiàn)均相分析。細胞毒性檢測則可測量因細胞膜損傷而釋放的胞內(nèi)酶(如乳酸脫氫酶LDH)活性,通過偶聯(lián)的發(fā)光反應來定量。這些方法實現(xiàn)了對細胞狀態(tài)的快速、高通量、自動化評估。浦光生物均相化學發(fā)光新技術!遼寧浦光生物均相發(fā)光臨床檢驗醫(yī)學中的應用研究蛋白質(zhì)錯誤折...
均相發(fā)光技術正逐步應用于食品安全和環(huán)境監(jiān)測等多應用領域。例如,檢測食品中的毒(如黃曲霉素)、抵抗細菌藥物殘留或病原菌等。通過設計針對這些污染物的抗體或適配體,并將其與均相化學發(fā)光信號系統(tǒng)偶聯(lián),就可以開發(fā)出快速、高通量的篩查方法。相較于傳統(tǒng)的色譜或微生物學方法,均相化學發(fā)光技術具有檢測更快捷,適合大批量樣本的初篩的特點。在環(huán)境監(jiān)測中,常常可用于檢測水中的重金屬離子、有機污染物等,具有現(xiàn)場快速分析的潛力。均相發(fā)光技術服務平臺,為您提供專業(yè)的技術支持和解決方案!江蘇均相化學發(fā)光均相發(fā)光臨床檢驗醫(yī)學中的應用研究時間分辨熒光共振能量轉(zhuǎn)移(TR-FRET)是FRET技術的升級版,它結(jié)合了FRET的高空間分...
GPCR是比較大的藥物靶點家族,其功能研究涉及配體結(jié)合、第二信使產(chǎn)生、下游信號通路活化等多個層面。均相發(fā)光技術多方面滲透于此領域。對于配體結(jié)合競爭實驗,可采用TR-FRET,將受體標記供體,配體標記受體。對于GPCR活化后比較關鍵的cAMP積累或IP3/DAG產(chǎn)生,均有成熟的均相檢測試劑盒。例如,cAMP檢測常采用基于抗體競爭原理的均相發(fā)光免疫分析。細胞裂解后,內(nèi)源性cAMP與加入的標記cAMP競爭結(jié)合有限量的抗cAMP抗體。抗體結(jié)合事件通過FRET或Alpha技術被檢測,信號強度與內(nèi)源性cAMP濃度成反比。這類方法直接在細胞裂解液中進行,快速、靈敏,完美契合GPCR激動劑/拮抗劑的高通量篩選...
Alpha(Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay)技術是均相化學發(fā)光的典范。其供體珠中裝載光敏劑,在680nm激光激發(fā)下,將周圍環(huán)境中的氧分子轉(zhuǎn)化為高能量、短壽命(約4微秒)的單線態(tài)氧。單線態(tài)氧在溶液中的擴散半徑只約200納米。受體珠中則裝載了化學發(fā)光劑(通常是噻吩衍生物)和熒光接收體。當單線態(tài)氧擴散進入鄰近的受體珠,會觸發(fā)一系列級聯(lián)反應:化學發(fā)光劑被氧化并發(fā)光,該能量隨即傳遞給熒光接收體,比較終發(fā)射出波長更長(520-620nm)、特征更明顯的熒光。這個能量轉(zhuǎn)移和放大的過程,使得一個單線態(tài)氧分子能引發(fā)大量發(fā)光分子的發(fā)射,實現(xiàn)了信號...
均相化學發(fā)光技術的實現(xiàn),主要依賴于兩種設計哲學。第一種是直接能量轉(zhuǎn)移路徑,表示技術為AlphaLISA/AlphaScreen。其關鍵是使用能產(chǎn)生單線態(tài)氧的供體微珠和含有化學發(fā)光劑的受體微珠。只有當生物識別事件將兩者拉近至200納米以內(nèi)時,供體產(chǎn)生的單線態(tài)氧才能有效觸發(fā)受體珠內(nèi)的化學發(fā)光反應。未結(jié)合的微珠因距離過遠,單線態(tài)氧在擴散途中淬滅,不產(chǎn)生信號。第二種是活性調(diào)控路徑,即生物識別事件直接調(diào)控化學發(fā)光反應的效率或速率。例如,將化學發(fā)光反應的催化劑(如酶)或其抑制劑/共反應物與生物分子偶聯(lián),當目標分子存在導致它們接近或分離時,化學發(fā)光信號被開啟或關閉。這兩種路徑均巧妙地利用“臨近”或“調(diào)控”將...
研究蛋白-蛋白相互作用(PPI)對于理解細胞信號網(wǎng)絡至關重要。傳統(tǒng)的酵母雙雜交、免疫共沉淀等方法操作復雜、通量低。以Alpha技術為表示的均相發(fā)光方法徹底改變了這一局面。將靶蛋白A與供體珠偶聯(lián),互作蛋白B與受體珠偶聯(lián)。當A和B在溶液中相互作用時,拉近兩珠產(chǎn)生信號。該方法可在純化蛋白、細胞裂解液甚至活細胞培養(yǎng)基中進行,不只能驗證已知互作,更能用于高通量篩選破壞或促進特定PPI的小分子化合物。其均相特性使得可以實時監(jiān)測互作動力學,研究互作強度,為藥物發(fā)現(xiàn)和基礎生物學提供了強大工具。均相化學發(fā)光對檢測環(huán)境有什么特殊要求?浙江CRET技術均相發(fā)光解決方案在傳染病診斷領域,均相發(fā)光技術主要用于抗原或抗體...
激酶是重要的藥物靶點,其活性檢測是藥物篩選的關鍵。均相發(fā)光技術,尤其是TR-FRET和Alpha技術,為此提供了理想平臺。以TR-FRET為例:將待測激酶、底物肽、ATP與待篩選化合物共同孵育。體系中包含兩種抗體,一種針對磷酸化底物(帶供體標記),另一種針對底物肽的標簽(帶受體標記)。只有當激酶活性正常,底物被磷酸化后,兩個抗體才能同時結(jié)合到底物肽上,使供受體靠近產(chǎn)生FRET信號。若化合物能抑制激酶,則磷酸化水平下降,F(xiàn)RET信號減弱。這種方法無需分離,可直接在含有ATP、激酶和化合物的混合液中實時或終點法檢測,通量極高,是發(fā)現(xiàn)激酶抑制劑的主流手段。降本增效新方案,為您節(jié)省實驗成本!湖南POC...
報告基因(如熒光素酶、β-半乳糖苷酶)是研究基因表達調(diào)控的常用工具。傳統(tǒng)的報告基因檢測通常需要細胞裂解和底物孵育多步操作。均相發(fā)光報告基因檢測系統(tǒng)通過使用具有細胞膜滲透性的“前底物”(pro-substrate)或優(yōu)化反應條件,實現(xiàn)了“一步加樣”檢測。例如,某些熒光素酶底物配方穩(wěn)定,可直接加入含有細胞的培養(yǎng)液中,細胞裂解和酶反應同時發(fā)生,化學發(fā)光信號在數(shù)分鐘內(nèi)達到平臺期并穩(wěn)定數(shù)小時,便于在微孔板中連續(xù)或批量讀取。這極大簡化了基于報告基因的高通量藥物篩選和信號通路研究流程。與傳統(tǒng)化學發(fā)光技術相比,均相化學發(fā)光的優(yōu)勢體現(xiàn)在?河南均相化學發(fā)光均相發(fā)光廠家有哪些適配體是通過SELEX技術篩選得到的單鏈...
Alpha技術,又稱均相臨近化學發(fā)光檢測,是均相發(fā)光領域的一項變革性突破。該技術基于兩種特殊的微珠:供體珠(Donor Bead)和受體珠(Acceptor Bead)。供體珠內(nèi)包裹了光敏劑,當被680nm激光激發(fā)時,可將周圍環(huán)境中的氧氣轉(zhuǎn)化為高能態(tài)的單線態(tài)氧。單線態(tài)氧在溶液中擴散距離極短(約200納米)。只有當供體珠和受體珠因同時結(jié)合到一個目標分子(如抗原、蛋白互作對)上而彼此靠近時,單線態(tài)氧才能有效擴散至受體珠,觸發(fā)其內(nèi)部的化學發(fā)光劑產(chǎn)生520-620nm的強光。若兩珠未靠近,單線態(tài)氧則淬滅在溶劑中。Alpha技術結(jié)合了臨近誘導的高特異性和化學發(fā)光的高靈敏度,且不受樣本顏色淬滅影響,在蛋白...
熱遷移分析(Cellular Thermal Shift Assay, CETSA)是一種研究靶點與藥物在細胞水平結(jié)合情況的技術。其原理是藥物結(jié)合會改變靶蛋白的熱穩(wěn)定性。傳統(tǒng)的CETSA依賴蛋白質(zhì)印跡法檢測,通量低。現(xiàn)在,通過與均相發(fā)光免疫檢測(如Alpha)結(jié)合,開發(fā)出了均相CETSA(簡稱CETSA? HT)。該方法將細胞在不同溫度下加熱后裂解,使用針對目標蛋白的抗體對(偶聯(lián)Alpha供體/受體珠)檢測溶液中剩余的未聚集的天然蛋白量。通過比較藥物處理組與對照組的蛋白熱穩(wěn)定性曲線偏移,即可高通量地確認化合物是否與細胞內(nèi)靶點結(jié)合,并評估結(jié)合強度。均相化學發(fā)光在全球體外診斷市場的競爭態(tài)勢如何?江...
環(huán)境水樣和食品中的微量污染物(如農(nóng)藥殘留、獸藥、、重金屬離子)檢測需要快速、高通量的篩查手段。均相化學發(fā)光免疫分析(CLIA)非常適合這一角色。通過制備針對特定污染物的高親和力抗體,并建立競爭性或間接的均相化學發(fā)光檢測模式,可以在樣本簡單前處理甚至直接稀釋后進行分析。例如,樣本中的小分子污染物與化學發(fā)光標記的類似物競爭結(jié)合有限量的抗體,信號強度與污染物濃度成反比。這種方法通量高、成本相對較低,可作為色譜-質(zhì)譜等確證方法的有力前篩工具,廣泛應用于海關、質(zhì)檢和環(huán)保部門的日常監(jiān)控。25-羥基維生素D(25 OH-VD)檢測試劑盒(均相化學發(fā)光法)。湖南CRET技術均相發(fā)光免疫分析熒光共振能量轉(zhuǎn)移(F...
高通量均相發(fā)光篩選可產(chǎn)生海量數(shù)據(jù)。人工智能(AI)和機器學習(ML)算法可以深入挖掘這些數(shù)據(jù)中的隱藏模式。例如,在藥物篩選中,AI可以分析不同化合物結(jié)構(gòu)與其在多種均相檢測(針對不同靶點或毒性指標)中活性譜的關聯(lián),預測化合物的作用機制或潛在毒性。AI還可以用于優(yōu)化檢測條件,識別和排除實驗中的異常值或干擾因素,提高數(shù)據(jù)質(zhì)量和篩選結(jié)果的可靠性。隨著AI技術的發(fā)展,其在均相發(fā)光數(shù)據(jù)解析和決策支持中的作用將愈發(fā)關鍵。醫(yī)療新時代!均相發(fā)光,助力疾病早篩早診!天津POCT產(chǎn)品均相發(fā)光臨床檢驗醫(yī)學中的應用研究熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)是均相發(fā)光技術中應用比較多方面的信號產(chǎn)生機制之一。其原理是:當一個熒光基團...
均相化學發(fā)光技術因其超高的通量、靈敏度和易于自動化的特性,已成為現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)高通量篩選(HTS)的支柱技術。在靶點導向的篩選中,它廣泛應用于:激酶/磷酸酶抑制劑篩選(通過檢測磷酸化底物的量)、GPCR功能分析(檢測cAMP、IP3或β-arrestin招募)、核受體轉(zhuǎn)錄活性篩選(報告基因檢測)、蛋白-蛋白相互作用抑制劑篩選(如使用Alpha技術)、以及酶活性分析(蛋白酶、去乙酰化酶等)。其“混合-讀數(shù)”的模式允許在1536孔甚至更高密度板中進行超大規(guī)模化合物庫(數(shù)十萬至上百萬)的篩選,每天可產(chǎn)生海量數(shù)據(jù),極大加速了先導化合物的發(fā)現(xiàn)進程。均相化學發(fā)光對檢測環(huán)境有什么特殊要求?安徽均相發(fā)光熱遷移分...
在免疫學和學研究,常需同時監(jiān)測多個細胞因子或信號蛋白的磷酸化狀態(tài)。基于微珠的多重均相發(fā)光檢測系統(tǒng)(如Luminex xMAP技術結(jié)合化學發(fā)光檢測)應運而生。該系統(tǒng)使用不同顏色編碼的微球作為固相載體,每種微球包被一種特異性捕獲抗體。樣本中的多種靶標被各自捕獲后,再用生物素化檢測抗體和鏈霉親和素-熒光/發(fā)光報告分子進行檢測。雖然微球是固相,但整個反應在懸浮液中進行,讀數(shù)前無需洗滌,本質(zhì)上也是一種高效的“液相”或“懸浮芯片”式多重均相檢測。降本增效新方案,為您節(jié)省實驗成本!山東CRET技術均相發(fā)光生產(chǎn)廠家外泌體等細胞外囊泡(EVs)是疾病診斷的潛在生物標志物來源。其分離和表征通常繁瑣。均相化學發(fā)光技...
細胞水平的功能性檢測是藥物篩選和生物學研究的基礎。均相化學發(fā)光為此提供了多種穩(wěn)健的檢測方案。比較經(jīng)典的是基于ATP含量的細胞活力/增殖/毒性檢測。活細胞內(nèi)的ATP與熒光素酶-熒光素反應直接偶聯(lián),產(chǎn)生化學發(fā)光信號,其強度與活細胞數(shù)成正比。該方法操作簡單(一步加樣裂解/檢測),靈敏度高,線性范圍寬。此外,針對細胞凋亡,可通過檢測Caspase酶活性(使用化學發(fā)光的Caspase底物)或膜磷脂酰絲氨酸外露(使用與化學發(fā)光檢測偶聯(lián)的Annexin V類似物)來進行均相分析。這些方法均實現(xiàn)了在微孔板中對細胞狀態(tài)的快速、定量評估。專注體外診斷,均相化學發(fā)光凍干試劑,品質(zhì)值得信賴!湖南技術升級均相發(fā)光生產(chǎn)廠...
在傳染病診斷領域,均相發(fā)光技術主要用于抗原或抗體的高靈敏檢測。例如,利用TR-FRET原理,可以設計檢測病毒抗原的均相免疫分析。將針對病毒抗原不同表位的兩種抗體分別標記供體和受體,樣本中若存在病毒抗原,則形成免疫復合物并產(chǎn)生FRET信號。該方法快速,可用于病原體篩查。在病毒學研究中,均相發(fā)光可用于評估病毒進入(如基于熒光素酶的報告病毒)、病毒復制或抗病毒藥物的效果。其高通量特性有助于快速篩選廣譜抗病毒化合物。32.無需冷鏈運輸!浦光生物均相發(fā)光凍干試劑可常溫運輸,降低運輸成本,輕松觸達偏遠地區(qū)!山東第五代化學發(fā)光均相發(fā)光優(yōu)點相較于熒光或比色法,化學發(fā)光作為均相檢測的信號系統(tǒng)具有多重獨特優(yōu)勢。首...
研究細胞內(nèi)信號通路的動態(tài)變化,需要能在細胞裂解液甚至活細胞背景下進行快速、多通路的分析。均相化學發(fā)光技術完美契合這一需求。例如,使用基于Alpha或類似技術的磷酸化特異性免疫檢測,可以在同一塊板中,從細胞裂解液中直接定量多種信號蛋白(如Akt、ERK、STAT)在不同刺激條件下的磷酸化水平。整個過程無需Western Blot的凝膠電泳、轉(zhuǎn)膜和繁瑣的封閉孵育洗滌步驟,通量提高數(shù)百倍,且能實現(xiàn)精確定量。此外,基于化學發(fā)光的報告基因檢測(如熒光素酶)也被普遍用于監(jiān)測特定信號通路(如Wnt、Hedgehog、NF-κB)的轉(zhuǎn)錄活性,用于功能性篩選和機理研究。浦光均相發(fā)光檢測試劑盒,操作簡便,快速獲得...
均相發(fā)光技術正逐步應用于食品安全和環(huán)境監(jiān)測等多應用領域。例如,檢測食品中的毒(如黃曲霉素)、抵抗細菌藥物殘留或病原菌等。通過設計針對這些污染物的抗體或適配體,并將其與均相化學發(fā)光信號系統(tǒng)偶聯(lián),就可以開發(fā)出快速、高通量的篩查方法。相較于傳統(tǒng)的色譜或微生物學方法,均相化學發(fā)光技術具有檢測更快捷,適合大批量樣本的初篩的特點。在環(huán)境監(jiān)測中,常常可用于檢測水中的重金屬離子、有機污染物等,具有現(xiàn)場快速分析的潛力。專注體外診斷,均相化學發(fā)光凍干試劑,品質(zhì)值得信賴!上海CRET技術均相發(fā)光解決方案適配體是通過體外篩選得到的單鏈DNA/RNA分子,能特異性結(jié)合小分子、蛋白質(zhì)甚至細胞。將適配體的高特異性與均相化學...
均相發(fā)光技術通過其“免分離”的關鍵設計理念,徹底變革了生物檢測的模式。從基礎的蛋白互作、酶活性分析,到復雜的細胞信號通路研究、高通量藥物篩選,再到臨床診斷和生物工藝監(jiān)控,其足跡已遍布生命科學和醫(yī)學的各個角落。以FRET、TR-FRET、Alpha、BRET等為表示的各種均相發(fā)光方法,提供了靈活、強大且多樣化的解決方案。它不只明顯提升了檢測效率和通量,降低了人力物力成本,更推動了科學發(fā)現(xiàn)和藥物研發(fā)的進程。隨著技術的不斷迭代和創(chuàng)新應用的拓展,均相發(fā)光必將在未來精確醫(yī)學和生物技術發(fā)展中持續(xù)扮演不可或缺的關鍵角色。醫(yī)療新時代!均相發(fā)光,助力疾病早篩早診!浙江均相化學發(fā)光均相發(fā)光的原理細胞水平的功能性檢...
熱遷移分析(Cellular Thermal Shift Assay, CETSA)是一種研究靶點與藥物在細胞水平結(jié)合情況的技術。其原理是藥物結(jié)合會改變靶蛋白的熱穩(wěn)定性。傳統(tǒng)的CETSA依賴蛋白質(zhì)印跡法檢測,通量低。現(xiàn)在,通過與均相發(fā)光免疫檢測(如Alpha)結(jié)合,開發(fā)出了均相CETSA(簡稱CETSA? HT)。該方法將細胞在不同溫度下加熱后裂解,使用針對目標蛋白的抗體對(偶聯(lián)Alpha供體/受體珠)檢測溶液中剩余的未聚集的天然蛋白量。通過比較藥物處理組與對照組的蛋白熱穩(wěn)定性曲線偏移,即可高通量地確認化合物是否與細胞內(nèi)靶點結(jié)合,并評估結(jié)合強度。體外診斷新機遇!均相發(fā)光新產(chǎn)品,助您搶占先機!安...
報告基因(如熒光素酶、β-半乳糖苷酶)是研究基因表達調(diào)控的常用工具。傳統(tǒng)的報告基因檢測通常需要細胞裂解和底物孵育多步操作。均相發(fā)光報告基因檢測系統(tǒng)通過使用具有細胞膜滲透性的“前底物”(pro-substrate)或優(yōu)化反應條件,實現(xiàn)了“一步加樣”檢測。例如,某些熒光素酶底物配方穩(wěn)定,可直接加入含有細胞的培養(yǎng)液中,細胞裂解和酶反應同時發(fā)生,化學發(fā)光信號在數(shù)分鐘內(nèi)達到平臺期并穩(wěn)定數(shù)小時,便于在微孔板中連續(xù)或批量讀取。這極大簡化了基于報告基因的高通量藥物篩選和信號通路研究流程。均相化學發(fā)光在個性化醫(yī)療中的應用潛力有多大?黑龍江CRET技術均相發(fā)光的原理研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)-核酸等生物分子間的相...
GPCR是比較大的藥物靶點家族,其功能研究涉及配體結(jié)合、第二信使產(chǎn)生、下游信號通路活化等多個層面。均相發(fā)光技術多方面滲透于此領域。對于配體結(jié)合競爭實驗,可采用TR-FRET,將受體標記供體,配體標記受體。對于GPCR活化后比較關鍵的cAMP積累或IP3/DAG產(chǎn)生,均有成熟的均相檢測試劑盒。例如,cAMP檢測常采用基于抗體競爭原理的均相發(fā)光免疫分析。細胞裂解后,內(nèi)源性cAMP與加入的標記cAMP競爭結(jié)合有限量的抗cAMP抗體。抗體結(jié)合事件通過FRET或Alpha技術被檢測,信號強度與內(nèi)源性cAMP濃度成反比。這類方法直接在細胞裂解液中進行,快速、靈敏,完美契合GPCR激動劑/拮抗劑的高通量篩選...
在傳染病診斷領域,均相發(fā)光技術主要用于抗原或抗體的高靈敏檢測。例如,利用TR-FRET原理,可以設計檢測病毒抗原的均相免疫分析。將針對病毒抗原不同表位的兩種抗體分別標記供體和受體,樣本中若存在病毒抗原,則形成免疫復合物并產(chǎn)生FRET信號。該方法快速,可用于病原體篩查。在病毒學研究中,均相發(fā)光可用于評估病毒進入(如基于熒光素酶的報告病毒)、病毒復制或抗病毒藥物的效果。其高通量特性有助于快速篩選廣譜抗病毒化合物。均相化學發(fā)光技術在臨床檢驗中的普及程度。福建化學發(fā)光均相發(fā)光免疫分析在臨床診斷和生物研究中,經(jīng)常需要同時檢測一個樣本中的多個指標。均相發(fā)光技術可以通過多種策略實現(xiàn)多重分析。空間編碼:在不同...
激酶是重要的藥物靶點,其活性檢測是藥物篩選的關鍵。均相發(fā)光技術,尤其是TR-FRET和Alpha技術,為此提供了理想平臺。以TR-FRET為例:將待測激酶、底物肽、ATP與待篩選化合物共同孵育。體系中包含兩種抗體,一種針對磷酸化底物(帶供體標記),另一種針對底物肽的標簽(帶受體標記)。只有當激酶活性正常,底物被磷酸化后,兩個抗體才能同時結(jié)合到底物肽上,使供受體靠近產(chǎn)生FRET信號。若化合物能抑制激酶,則磷酸化水平下降,F(xiàn)RET信號減弱。這種方法無需分離,可直接在含有ATP、激酶和化合物的混合液中實時或終點法檢測,通量極高,是發(fā)現(xiàn)激酶抑制劑的主流手段。32.無需冷鏈運輸!浦光生物均相發(fā)光凍干試劑...
Alpha(Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay)技術是均相化學發(fā)光的典范。其供體珠中裝載光敏劑,在680nm激光激發(fā)下,將周圍環(huán)境中的氧分子轉(zhuǎn)化為高能量、短壽命(約4微秒)的單線態(tài)氧。單線態(tài)氧在溶液中的擴散半徑只約200納米。受體珠中則裝載了化學發(fā)光劑(通常是噻吩衍生物)和熒光接收體。當單線態(tài)氧擴散進入鄰近的受體珠,會觸發(fā)一系列級聯(lián)反應:化學發(fā)光劑被氧化并發(fā)光,該能量隨即傳遞給熒光接收體,比較終發(fā)射出波長更長(520-620nm)、特征更明顯的熒光。這個能量轉(zhuǎn)移和放大的過程,使得一個單線態(tài)氧分子能引發(fā)大量發(fā)光分子的發(fā)射,實現(xiàn)了信號...