熱遷移分析(Cellular Thermal Shift Assay, CETSA)是一種研究靶點(diǎn)與藥物在細(xì)胞水平結(jié)合情況的技術(shù)。其原理是藥物結(jié)合會(huì)改變靶蛋白的熱穩(wěn)定性。傳統(tǒng)的CETSA依賴蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè),通量低?,F(xiàn)在,通過(guò)與均相發(fā)光免疫檢測(cè)(如Alpha)結(jié)合,開(kāi)發(fā)出了均相CETSA(簡(jiǎn)稱CETSA® HT)。該方法將細(xì)胞在不同溫度下加熱后裂解,使用針對(duì)目標(biāo)蛋白的抗體對(duì)(偶聯(lián)Alpha供體/受體珠)檢測(cè)溶液中剩余的未聚集的天然蛋白量。通過(guò)比較藥物處理組與對(duì)照組的蛋白熱穩(wěn)定性曲線偏移,即可高通量地確認(rèn)化合物是否與細(xì)胞內(nèi)靶點(diǎn)結(jié)合,并評(píng)估結(jié)合強(qiáng)度。均相化學(xué)發(fā)光在全球體外診斷市場(chǎng)的競(jìng)爭(zhēng)態(tài)勢(shì)如何?江蘇CRET技術(shù)均相發(fā)光應(yīng)用領(lǐng)域

均相發(fā)光技術(shù)比較明顯的優(yōu)勢(shì)是其操作的極度簡(jiǎn)便性所帶來(lái)的高通量檢測(cè)能力。由于摒棄了所有分離步驟,典型的均相發(fā)光檢測(cè)只需將樣本、識(shí)別元件(如抗體)和發(fā)光試劑依次加入微孔板中,混合孵育后即可直接讀數(shù)。這種“加樣-孵育-檢測(cè)”的模式,將復(fù)雜的多步流程簡(jiǎn)化為一步或兩步,不僅大幅縮短了檢測(cè)時(shí)間(通??稍趲追昼姷揭恍r(shí)內(nèi)完成),還大限度地減少了人為操作誤差和交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)。這一特性使其完美適配現(xiàn)代自動(dòng)化液體處理系統(tǒng)和多通道檢測(cè)儀,能夠輕松實(shí)現(xiàn)每天處理數(shù)萬(wàn)甚至數(shù)十萬(wàn)個(gè)樣本的超高通量篩選,在藥物發(fā)現(xiàn)、功能基因組學(xué)等需要海量數(shù)據(jù)積累的領(lǐng)域具有不可替代的價(jià)值。江蘇均相發(fā)光與普通發(fā)光的區(qū)別浦光生物均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)在免疫檢測(cè)中的應(yīng)用有哪些創(chuàng)新點(diǎn)?

激酶是重要的藥物靶點(diǎn),其活性檢測(cè)是藥物篩選的關(guān)鍵。均相發(fā)光技術(shù),尤其是TR-FRET和Alpha技術(shù),為此提供了理想平臺(tái)。以TR-FRET為例:將待測(cè)激酶、底物肽、ATP與待篩選化合物共同孵育。體系中包含兩種抗體,一種針對(duì)磷酸化底物(帶供體標(biāo)記),另一種針對(duì)底物肽的標(biāo)簽(帶受體標(biāo)記)。只有當(dāng)激酶活性正常,底物被磷酸化后,兩個(gè)抗體才能同時(shí)結(jié)合到底物肽上,使供受體靠近產(chǎn)生FRET信號(hào)。若化合物能抑制激酶,則磷酸化水平下降,F(xiàn)RET信號(hào)減弱。這種方法無(wú)需分離,可直接在含有ATP、激酶和化合物的混合液中實(shí)時(shí)或終點(diǎn)法檢測(cè),通量極高,是發(fā)現(xiàn)激酶抑制劑的主流手段。
離子通道和轉(zhuǎn)運(yùn)體是重要的藥物靶點(diǎn),但傳統(tǒng)電生理方法通量極低?;诨瘜W(xué)發(fā)光的離子敏炎癥料或蛋白,為高通量篩選提供了可能。例如,使用對(duì)鈣離子敏感的水母發(fā)光蛋白(Aequorin)或基于熒光素酶的鈣指示劑(如Photina)。當(dāng)離子通道開(kāi)放引起離子內(nèi)流時(shí),會(huì)觸發(fā)這些蛋白的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。將穩(wěn)定表達(dá)該報(bào)告系統(tǒng)和目標(biāo)離子通道的細(xì)胞系用于篩選,加入化合物后直接測(cè)量發(fā)光信號(hào)變化,即可高通量地發(fā)現(xiàn)通道的激動(dòng)劑或阻斷劑。類似原理也可用于鈉、鉀等離子通道或某些轉(zhuǎn)運(yùn)體的功能研究。均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)的未來(lái)發(fā)展趨勢(shì)是什么?

高通量均相發(fā)光篩選可產(chǎn)生海量數(shù)據(jù)。人工智能(AI)和機(jī)器學(xué)習(xí)(ML)算法可以深入挖掘這些數(shù)據(jù)中的隱藏模式。例如,在藥物篩選中,AI可以分析不同化合物結(jié)構(gòu)與其在多種均相檢測(cè)(針對(duì)不同靶點(diǎn)或毒性指標(biāo))中活性譜的關(guān)聯(lián),預(yù)測(cè)化合物的作用機(jī)制或潛在毒性。AI還可以用于優(yōu)化檢測(cè)條件,識(shí)別和排除實(shí)驗(yàn)中的異常值或干擾因素,提高數(shù)據(jù)質(zhì)量和篩選結(jié)果的可靠性。隨著AI技術(shù)的發(fā)展,其在均相發(fā)光數(shù)據(jù)解析和決策支持中的作用將愈發(fā)關(guān)鍵。精確檢測(cè),一步到位!均相化學(xué)發(fā)光,助您輕松獲得可靠結(jié)果!山東干式化學(xué)發(fā)光均相發(fā)光的原理
浦光生物凍干試劑,靈敏度高,特異性強(qiáng),實(shí)驗(yàn)結(jié)果更可靠!江蘇CRET技術(shù)均相發(fā)光應(yīng)用領(lǐng)域
均相發(fā)光是一種先進(jìn)的生物化學(xué)檢測(cè)技術(shù),其關(guān)鍵特征在于整個(gè)檢測(cè)反應(yīng)過(guò)程均在均一的液相中進(jìn)行,無(wú)需任何固相分離步驟(如洗滌、離心)。 它通過(guò)巧妙的設(shè)計(jì),將待測(cè)物的特異性識(shí)別事件(如抗原-抗體結(jié)合、酶-底物反應(yīng))直接轉(zhuǎn)化為可檢測(cè)的光信號(hào)。 實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)的關(guān)鍵在于依賴能量轉(zhuǎn)移、空間位阻改變或化學(xué)環(huán)境變化等機(jī)制,使信號(hào)分子(供體)與淬滅分子(受體)或發(fā)光底物在結(jié)合事件發(fā)生前后,其相互作用效率發(fā)生明顯改變,從而導(dǎo)致發(fā)光信號(hào)的增強(qiáng)或猝滅。與傳統(tǒng)的異相免疫分析(如ELISA)相比,均相發(fā)光技術(shù)具有操作簡(jiǎn)便、通量高、易于自動(dòng)化、試劑消耗少、檢測(cè)速度快等突出優(yōu)點(diǎn),極大地推動(dòng)了高通量藥物篩選、臨床診斷和基礎(chǔ)生命科學(xué)研究的發(fā)展。江蘇CRET技術(shù)均相發(fā)光應(yīng)用領(lǐng)域