表面等離子體共振（SPR）是一種實(shí)時(shí)、無(wú)標(biāo)記的生物分子相互作用分析技術(shù)，能提供結(jié)合動(dòng)力學(xué)（kon， koff）和親和力（KD）的精確數(shù)據(jù)。均相發(fā)光技術(shù)（如TR-FRET， Alpha）則是一種基于標(biāo)記的高通量終點(diǎn)法或?qū)崟r(shí)動(dòng)力學(xué)檢測(cè)。兩者具有很好的互補(bǔ)性：SPR常用于前期的靶點(diǎn)-配體相互作用的詳細(xì)表征和驗(yàn)證；而基于此驗(yàn)證過(guò)的相互作用對(duì)，開發(fā)出的均相發(fā)光檢測(cè)方法，則可以用于后續(xù)的大規(guī)模化合物庫(kù)篩選和功能學(xué)研究。將兩者結(jié)合，構(gòu)成了從機(jī)理研究到大規(guī)模篩選的完整工作流程。均相化學(xué)發(fā)光在體外診斷領(lǐng)域的應(yīng)用范圍有多廣？江西診斷試劑均相發(fā)光的原理
蛋白質(zhì)錯(cuò)誤折疊和聚集與阿爾茨海默病、帕金森病等密切相關(guān)。均相化學(xué)發(fā)光方法可用于監(jiān)測(cè)聚集過(guò)程。例如，將待研究的蛋白（如β-淀粉樣蛋白、α-突觸蛋白）分別與化學(xué)發(fā)光供體（如魯米諾衍生物）和受體（如熒光染料或淬滅劑）標(biāo)記。當(dāng)?shù)鞍滋幱趩误w狀態(tài)時(shí)，兩者距離較遠(yuǎn)，信號(hào)弱；當(dāng)發(fā)生聚集時(shí)，不同標(biāo)記的分子被納入同一聚集體，供體與受體靠近，通過(guò)CRET或淬滅效應(yīng)導(dǎo)致信號(hào)特征改變。該方法可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)聚集動(dòng)力學(xué)，并用于篩選能抑制聚集的小分子化合物。天津技術(shù)升級(jí)均相發(fā)光均相化學(xué)發(fā)光新突破！凍干試劑來(lái)了，靈敏度更高，結(jié)果更準(zhǔn)確！
研究蛋白-蛋白相互作用（PPI）對(duì)于理解細(xì)胞信號(hào)網(wǎng)絡(luò)至關(guān)重要。傳統(tǒng)的酵母雙雜交、免疫共沉淀等方法操作復(fù)雜、通量低。以Alpha技術(shù)為表示的均相發(fā)光方法徹底改變了這一局面。將靶蛋白A與供體珠偶聯(lián)，互作蛋白B與受體珠偶聯(lián)。當(dāng)A和B在溶液中相互作用時(shí)，拉近兩珠產(chǎn)生信號(hào)。該方法可在純化蛋白、細(xì)胞裂解液甚至活細(xì)胞培養(yǎng)基中進(jìn)行，不只能驗(yàn)證已知互作，更能用于高通量篩選破壞或促進(jìn)特定PPI的小分子化合物。其均相特性使得可以實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)互作動(dòng)力學(xué)，研究互作強(qiáng)度，為藥物發(fā)現(xiàn)和基礎(chǔ)生物學(xué)提供了強(qiáng)大工具。
激酶是重要的藥物靶點(diǎn)，其活性檢測(cè)是藥物篩選的關(guān)鍵。均相發(fā)光技術(shù)，尤其是TR-FRET和Alpha技術(shù)，為此提供了理想平臺(tái)。以TR-FRET為例：將待測(cè)激酶、底物肽、ATP與待篩選化合物共同孵育。體系中包含兩種抗體，一種針對(duì)磷酸化底物（帶供體標(biāo)記），另一種針對(duì)底物肽的標(biāo)簽（帶受體標(biāo)記）。只有當(dāng)激酶活性正常，底物被磷酸化后，兩個(gè)抗體才能同時(shí)結(jié)合到底物肽上，使供受體靠近產(chǎn)生FRET信號(hào)。若化合物能抑制激酶，則磷酸化水平下降，F(xiàn)RET信號(hào)減弱。這種方法無(wú)需分離，可直接在含有ATP、激酶和化合物的混合液中實(shí)時(shí)或終點(diǎn)法檢測(cè)，通量極高，是發(fā)現(xiàn)激酶抑制劑的主流手段。醫(yī)療新時(shí)代！均相發(fā)光，助力疾病早篩早診！
均相發(fā)光技術(shù)正逐步應(yīng)用于食品安全和環(huán)境監(jiān)測(cè)等多應(yīng)用領(lǐng)域。例如，檢測(cè)食品中的毒（如黃曲霉素）、抵抗細(xì)菌藥物殘留或病原菌等。通過(guò)設(shè)計(jì)針對(duì)這些污染物的抗體或適配體，并將其與均相化學(xué)發(fā)光信號(hào)系統(tǒng)偶聯(lián)，就可以開發(fā)出快速、高通量的篩查方法。相較于傳統(tǒng)的色譜或微生物學(xué)方法，均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)具有檢測(cè)更快捷，適合大批量樣本的初篩的特點(diǎn)。在環(huán)境監(jiān)測(cè)中，常常可用于檢測(cè)水中的重金屬離子、有機(jī)污染物等，具有現(xiàn)場(chǎng)快速分析的潛力。均相化學(xué)發(fā)光在 POCT（即時(shí)檢驗(yàn)）領(lǐng)域的應(yīng)用現(xiàn)狀？湖南技術(shù)升級(jí)均相發(fā)光與普通發(fā)光的區(qū)別
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GPCR是比較大的藥物靶點(diǎn)家族，其功能研究涉及配體結(jié)合、第二信使產(chǎn)生、下游信號(hào)通路活化等多個(gè)層面。均相發(fā)光技術(shù)多方面滲透于此領(lǐng)域。對(duì)于配體結(jié)合競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)，可采用TR-FRET，將受體標(biāo)記供體，配體標(biāo)記受體。對(duì)于GPCR活化后比較關(guān)鍵的cAMP積累或IP3/DAG產(chǎn)生，均有成熟的均相檢測(cè)試劑盒。例如，cAMP檢測(cè)常采用基于抗體競(jìng)爭(zhēng)原理的均相發(fā)光免疫分析。細(xì)胞裂解后，內(nèi)源性cAMP與加入的標(biāo)記cAMP競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合有限量的抗cAMP抗體。抗體結(jié)合事件通過(guò)FRET或Alpha技術(shù)被檢測(cè)，信號(hào)強(qiáng)度與內(nèi)源性cAMP濃度成反比。這類方法直接在細(xì)胞裂解液中進(jìn)行，快速、靈敏，完美契合GPCR激動(dòng)劑/拮抗劑的高通量篩選。江西診斷試劑均相發(fā)光的原理