研究蛋白-蛋白相互作用(PPI)對于理解細胞信號網絡至關重要。傳統的酵母雙雜交、免疫共沉淀等方法操作復雜、通量低。以Alpha技術為表示的均相發光方法徹底改變了這一局面。將靶蛋白A與供體珠偶聯,互作蛋白B與受體珠偶聯。當A和B在溶液中相互作用時,拉近兩珠產生信號。該方法可在純化蛋白、細胞裂解液甚至活細胞培養基中進行,不只能驗證已知互作,更能用于高通量篩選破壞或促進特定PPI的小分子化合物。其均相特性使得可以實時監測互作動力學,研究互作強度,為藥物發現和基礎生物學提供了強大工具。均相化學發光對檢測環境有什么特殊要求?浙江CRET技術均相發光解決方案

在傳染病診斷領域,均相發光技術主要用于抗原或抗體的高靈敏檢測。例如,利用TR-FRET原理,可以設計檢測病毒抗原的均相免疫分析。將針對病毒抗原不同表位的兩種抗體分別標記供體和受體,樣本中若存在病毒抗原,則形成免疫復合物并產生FRET信號。該方法快速,可用于病原體篩查。在病毒學研究中,均相發光可用于評估病毒進入(如基于熒光素酶的報告病毒)、病毒復制或抗病毒藥物的效果。其高通量特性有助于快速篩選廣譜抗病毒化合物。江蘇CRET技術均相發光應用領域均相化學發光在全球體外診斷市場的競爭態勢如何?

除了基于熒光的能量轉移,均相檢測也可利用化學發光能量轉移(CRET)。在CRET中,供體是化學發光反應(如魯米諾-過氧化物酶反應)產生的激發態分子,其發出的光能直接激發鄰近的熒光受體發出更長波長的光。通過設計使受體標記在結合事件的另一方,即可實現均相檢測。電化學發光(ECL)也可用于均相模式。例如,將三聯吡啶釕標記在一方,另一方標記上能夠在其電極氧化還原循環中起共反應物作用的物質(如三丙胺)。當兩者因生物識別事件靠近時,電化學觸發的高效ECL反應得以發生,產生強信號。這些方法進一步拓展了均相發光的技術邊界,提供了更多樣化的信號輸出選擇。
均相化學發光技術因其超高的通量、靈敏度和易于自動化的特性,已成為現代藥物發現高通量篩選(HTS)的支柱技術。在靶點導向的篩選中,它廣泛應用于:激酶/磷酸酶抑制劑篩選(通過檢測磷酸化底物的量)、GPCR功能分析(檢測cAMP、IP3或β-arrestin招募)、核受體轉錄活性篩選(報告基因檢測)、蛋白-蛋白相互作用抑制劑篩選(如使用Alpha技術)、以及酶活性分析(蛋白酶、去乙酰化酶等)。其“混合-讀數”的模式允許在1536孔甚至更高密度板中進行超大規模化合物庫(數十萬至上百萬)的篩選,每天可產生海量數據,極大加速了先導化合物的發現進程。臨床檢測新利器!肝素結合蛋白(HBP)檢測試劑盒(均相化學發光法),為醫療保駕護航!

組蛋白修飾酶(如甲基轉移酶、去甲基酶、乙酰轉移酶、去乙酰化酶)是**、神經疾病等領域的熱門靶點。均相化學發光技術為這些酶活性的檢測和抑制劑篩選建立了成熟平臺。以組蛋白甲基轉移酶為例,通常使用生物素標記的S-腺苷甲硫氨酸(SAM)類似物作為甲基供體。酶反應后,生物素標記的甲基被轉移到組蛋白底物上。然后,使用針對甲基化位點的抗體(偶聯供體珠)和鏈霉親和素(偶聯受體珠)通過Alpha技術檢測,信號強度與酶活性成正比。這種方法靈敏度高,抗干擾能力強,可直接在含有化合物和輔因子的混合體系中進行篩選。均相化學發光技術在臨床檢驗中的普及程度。湖南干式化學發光均相發光生產廠家
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熱遷移分析(CETSA)用于研究藥物在細胞或組織水平與靶蛋白的結合,傳統方法依賴Western Blot,通量低。與均相化學發光免疫檢測(特別是Alpha技術)結合形成的CETSA HT,實現了高通量化。細胞經藥物處理和不同溫度加熱后裂解,針對目標蛋白的特異性抗體對(分別偶聯Alpha供體珠和受體珠)被加入裂解液。只有未因熱變性而沉淀的、保持天然構象的蛋白才能被兩個抗體同時識別并拉近微珠產生信號。通過繪制藥物處理組與對照組的熱穩定性曲線,可以直觀看到藥物結合引起的蛋白熱穩定性偏移(Tm變化),從而確認靶點結合并評估結合強度,廣泛應用于早期藥物發現中的靶點確證。浙江CRET技術均相發光解決方案