微流控技術通過縱微尺度流體,能夠實現多種試劑的精確混合、反應和檢測的集成。將均相發(fā)光檢測整合到微流控芯片中,有望進一步實現“芯片實驗室”(Lab-on-a-Chip)的愿景。例如,在芯片微通道內完成細胞的裂解、目標蛋白的免疫識別和均相發(fā)光反應,并通過集成的微型光學元件檢測信號。這種結合可以極大減少試劑用量(降至納升級)、縮短反應時間、提高分析速度,并實現便攜化,為床邊診斷(POCT)和現場檢測提供新的解決方案。Duo'z均相化學發(fā)光在心血管疾病診斷中的應用價值是什么?山東CRET技術均相發(fā)光解決方案

熒光共振能量轉移(FRET)是均相發(fā)光技術中應用比較多方面的信號產生機制之一。其原理是:當一個熒光基團(供體,Donor)的發(fā)射光譜與另一個熒光基團或淬滅基團(受體,Acceptor)的吸收光譜有足夠重疊,且兩者距離非常接近(通常1-10納米)時,供體的激發(fā)態(tài)能量會以非輻射方式轉移給受體。在均相檢測中,常將供體和受體分別標記在相互作用的生物分子對(如一對抗體、或酶與底物肽)上。當目標分子存在并促使這對生物分子結合時,供體與受體被拉近,發(fā)生有效的FRET,導致供體熒光淬滅,受體熒光增強(如果受體是熒光團)。通過監(jiān)測供體與受體熒光強度的比率變化,即可高靈敏度、高特異性地定量目標分析物。北京化學發(fā)光均相發(fā)光解決方案POCT市場新機遇,浦光干式均相化學發(fā)光助您把握未來!

GPCR是比較大的藥物靶點家族,其功能研究涉及配體結合、第二信使產生、下游信號通路活化等多個層面。均相發(fā)光技術多方面滲透于此領域。對于配體結合競爭實驗,可采用TR-FRET,將受體標記供體,配體標記受體。對于GPCR活化后比較關鍵的cAMP積累或IP3/DAG產生,均有成熟的均相檢測試劑盒。例如,cAMP檢測常采用基于抗體競爭原理的均相發(fā)光免疫分析。細胞裂解后,內源性cAMP與加入的標記cAMP競爭結合有限量的抗cAMP抗體。抗體結合事件通過FRET或Alpha技術被檢測,信號強度與內源性cAMP濃度成反比。這類方法直接在細胞裂解液中進行,快速、靈敏,完美契合GPCR激動劑/拮抗劑的高通量篩選。
熱遷移分析(CETSA)用于研究藥物在細胞或組織水平與靶蛋白的結合,傳統(tǒng)方法依賴Western Blot,通量低。與均相化學發(fā)光免疫檢測(特別是Alpha技術)結合形成的CETSA HT,實現了高通量化。細胞經藥物處理和不同溫度加熱后裂解,針對目標蛋白的特異性抗體對(分別偶聯(lián)Alpha供體珠和受體珠)被加入裂解液。只有未因熱變性而沉淀的、保持天然構象的蛋白才能被兩個抗體同時識別并拉近微珠產生信號。通過繪制藥物處理組與對照組的熱穩(wěn)定性曲線,可以直觀看到藥物結合引起的蛋白熱穩(wěn)定性偏移(Tm變化),從而確認靶點結合并評估結合強度,廣泛應用于早期藥物發(fā)現中的靶點確證。均相化學發(fā)光與熒光免疫技術相比,優(yōu)勢在哪?

從原理上深度對比均相與異相免疫分析,能清晰揭示均相技術的革新之處。異相分析法,以經典的酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)為表示,其檢測依賴于將捕獲抗體固定在固相載體(如微孔板)上,通過反復洗滌來分離“特異性結合”與“游離”的標記物,比較終通過底物顯色或發(fā)光來定量。這個過程繁瑣、耗時,且洗滌步驟容易導致結合物損失。而均相免疫分析則讓所有反應組分在溶液存。通過物理化學手段,使得只有當目標分子正確結合,形成特定復合物時,才能產生或改變發(fā)光信號。例如,在臨近誘導技術中,只有兩個標記有供體和受體的抗體同時結合一個抗原分子并彼此靠近時,能量轉移才能發(fā)生,從而報告陽性信號。所有未結合的標記物因其距離遠,不產生有效信號,故無需分離。
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均相化學發(fā)光,國家重點實驗室檢測平臺,領航醫(yī)療新時代!山東CRET技術均相發(fā)光解決方案
均相發(fā)光技術正逐步應用于食品安全和環(huán)境監(jiān)測等多應用領域。例如,檢測食品中的毒(如黃曲霉素)、抵抗細菌藥物殘留或病原菌等。通過設計針對這些污染物的抗體或適配體,并將其與均相化學發(fā)光信號系統(tǒng)偶聯(lián),就可以開發(fā)出快速、高通量的篩查方法。相較于傳統(tǒng)的色譜或微生物學方法,均相化學發(fā)光技術具有檢測更快捷,適合大批量樣本的初篩的特點。在環(huán)境監(jiān)測中,常常可用于檢測水中的重金屬離子、有機污染物等,具有現場快速分析的潛力。山東CRET技術均相發(fā)光解決方案