江蘇重組蛋白用宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法開發

來源：發布時間：2025-08-22

對于HCP抗體的純化方法，目前美國藥典1132章節推薦有兩種方式，包括protein A或protein G親和柱層析法和HCP抗原親和柱層析法。兩種方法各有優缺點，均符合監管的要求。在實際使用過程中，這對不同產品可能會導致檢測結果的差異。兩者方法得到的抗體主要區別是HCP抗體有效含量的占比。HCP抗原親和柱層析法顯然占比高，但是也存在某些HCP抗體丟失的情況，這也會導致針對某些樣本的檢測結果比前者偏低，需要企業在實際方法建立時進行充分的評估。HCP抗原親和柱層析法對純化工藝要求更高，為保證抗體批間一致性，需要重點考察HCP抗原柱制備工藝、柱子的使用壽命、再制備的一致性等問題。

樣品與抗體的匹配程度對宿主細胞蛋白殘留檢測的結果影響很大。江蘇重組蛋白用宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法開發

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湖州申科生物結合不同宿主實際的生產工藝，通過高質量免疫原和 HCP 多抗的標準化制備流程，獲得高效價、高覆蓋率的抗體，開發了適用于大腸桿菌表達菌 (BL21) 生產工藝、克隆菌堿裂法提取質粒工藝的 SHENTEK®E.coli HCP檢測試劑盒，適用于CHO\MDCK\HEK293\Sf9\VERO\畢赤酵母等不同宿主的 HCP 檢測試劑盒。用于中間品、原液及終產品等的HCP定量監測。為確保 ELISA 對HCP定量檢測的準確性，須對 HCP 抗體覆蓋率進行驗證。湖州申科抗體覆蓋率平臺采用2D Clean-up 試劑盒去除蛋白樣品的干擾物（洗滌劑、鹽、脂質、酚類和核酸等離子污染物），并設置2D 質控標準品進行嚴格質控，同時以陰性抗體為對照平行試驗，以提高結果準確度。

江蘇定制化宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測性能驗證湖州申科可根據客戶要求，快速定制符合用戶生產工藝的HCP商業化檢測試劑盒，滿足用戶快速替換的檢測需求。

湖州申科在宿主細胞蛋白（HCP）ELISA檢測技術領域擁有深厚的積累，已成功構建高質量、全流程的自有開發平臺，覆蓋HCP檢測試劑盒研發的關鍵環節：①抗原表征與制備：基于合規平臺的HCP Reference/Antigen制備能力，采用2D凝膠電泳等先進技術確保抗原庫的代表性。②動物免疫與抗體制備：依托自有免疫動物平臺，控制免疫原設計與動物免疫過程，產出高特異性、廣覆蓋度的抗體。③體系開發與驗證：憑借成熟的技術經驗開發高靈敏度、高穩定性的檢測體系，并嚴格遵循GMP標準完成方法學驗證。該平臺通過全流程自主可控的技術整合，從源頭保證試劑盒性能的一致性與可靠性，明顯降低不同批次試劑盒的檢測變異性。其研發的HCP ELISA試劑盒已成功服務于國內外200余家生物醫藥企業，為生物制品（如單抗、疫苗）的工藝開發、質量控制及法規申報（如IND/BLA）提供符合監管要求的定制化檢測解決方案。

宿主細胞蛋白來源中往往同時存在核酸，胞膜脂類，培養基中的氨基酸等非HCP成分會干擾總蛋白的檢測準確性，需要在檢測之前進行純化前處理，同時對總蛋白檢測方法進行方法學確認。HCP是一種多蛋白質的混合物，總蛋白定量方法之間檢測結果會存在一定程度的差異，這也是導致HCP免疫檢測方法結果差異的原因之一。若HCP蛋白定量方法間檢測結果差異較大，一般同時采用2種以上經過確認的方法檢測，再取均值?？偟鞍讬z測方法的定量限一般只能達到μg/mL水平,但是HCP檢測試劑盒的產品校準品在ng/mL水平。從HCP高濃度原液稀釋到低濃度產品校準品中存在稀釋誤差，需要對產品校準品進行重新標定賦值。

抗體覆蓋率評估分析需要考慮不同方法間存在的差異，以及如何持續改進和評估方法實驗過程的質量控制。

大腸桿菌具有遺傳性狀清晰，易于培養和控制，表達水平高，成本低，周期短等特點，是優先的經濟實惠的蛋白表達系統，K-12系列和B系列菌株是工業規模上常用于生物工程的E.coli細菌株。K-12菌種、所衍生出的DH5α、Top10、JM109等菌株，可用于大量生產質粒DNA并進一步制備細胞基因治療產品和病毒載體類疫苗。源于B系的菌株，如BL21，更適用于高效轉染表達載體和常規蛋白的表達，如：病毒蛋白、重組蛋白疫苗、細胞因子、酶類等產品。湖州申科生物針對這兩種菌株的特點，分別開發了E.coli表達菌HCP殘留檢測試劑盒和E.coli克隆菌堿裂HCP殘留檢測試劑盒。

湖州申科自主研發IMBS抗體覆蓋率檢測法及低豐度HCP富集技術，合作完成多項課題并發表成果。浙江ELISA法宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體制備

總蛋白檢測差異是 HCP 免疫檢測結果不同的原因之一。江蘇重組蛋白用宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法開發

湖州申科生物參考USP通則<1132.1>闡述的內容，依托公司深耕生物制品質量控制領域十余年經驗，針對LC-MS檢測HCPs方法進行了評價與優化。同時通過對LC-MS檢測HCPs整體流程建立完整的質控，建立起一套抗干擾能力強、穩定性好、準確度高、結果真實可靠的LC-MS檢測HCPs標準方法。檢測技術平臺分成樣品制備、質譜檢測、數據生信分析及質譜結果方法驗證四部分，已使用LC-MS平臺進行了293T、不同工藝E.coli、CHO、Vero、MDCK、Sf9等不同工程細胞HCPs抗體覆蓋率的檢測分析。

江蘇重組蛋白用宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法開發

標簽：內毒素檢測支原體檢測宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測宿主細胞殘留DNA檢測熱原檢測

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