PG13宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測常見問題分析
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發(fā)布時間：2025-12-19
大腸桿菌具有遺傳背景明確、便于培養(yǎng)與調(diào)控、蛋白表達量高、成本低廉且培養(yǎng)周期短等特點，是性價比高的蛋白表達系統(tǒng)。其中，K-12系列與B系列菌株是工業(yè)級生物工程中常用的大腸桿菌菌株。K-12菌株及其衍生的DH5α、Top10、JM109等菌株，可用于大規(guī)模生產(chǎn)質(zhì)粒DNA，進而制備細胞基因治療產(chǎn)品與病毒載體類疫苗；而源自B系列的菌株（如BL21），更適合高效轉(zhuǎn)染表達載體及常規(guī)蛋白的表達，例如病毒蛋白、重組蛋白疫苗、細胞因子、酶類等產(chǎn)品。湖州申科生物依據(jù)這兩種菌株的特性，分別研發(fā)了大腸桿菌表達菌HCP殘留檢測試劑盒與大腸桿菌克隆菌堿裂HCP殘留檢測試劑盒。
HCP 檢測結(jié)果可信度受抗體覆蓋率影響，該關(guān)鍵指標需經(jīng)嚴謹方法驗證。PG13宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測常見問題分析
昆蟲細胞桿狀病毒表達系統(tǒng)（IC-BEVS）是一種真核表達系統(tǒng)，以桿狀病毒為外源基因載體，以昆蟲細胞為宿主實現(xiàn)外源蛋白的生產(chǎn)。該系統(tǒng)具備便于規(guī)模化生產(chǎn)、培養(yǎng)成本低、生物安全性高等優(yōu)勢，近年已逐步應(yīng)用于重組蛋白、rAAV 載體、亞單位疫苗（如病毒樣顆粒（VLP）疫苗）等產(chǎn)品的生產(chǎn)，在生物制品重組蛋白表達領(lǐng)域已得到廣泛應(yīng)用。Sf9 細胞系源自草地夜蛾細胞系（Spodoptera frugiperda cell line，簡稱 Sf），是當前較為常用的昆蟲細胞系之一。SHENTEK® Sf9 HCP 殘留蛋白檢測試劑盒（一步酶聯(lián)免疫吸附法），可對采用 Sf9 細胞系生產(chǎn)的生物制品中宿主細胞蛋白（HCP）殘留進行定量檢測。該試劑盒的抗體覆蓋率分別為 70.4%-96.0%（采用 IMBS-2D 法）和 91.2%（采用 IMBS-MS 法，Unique Peptide ≥2）。
北京宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法對比經(jīng)完善驗證的湖州申科 IMBS 抗體覆蓋率平臺，結(jié)果可信且契合法規(guī)，可用于相關(guān)申報。
操作規(guī)范是影響宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測結(jié)果的關(guān)鍵因素之一。一方面，實驗人員的專業(yè)能力與實操經(jīng)驗會影響檢測結(jié)果的準確性，熟練人員可準確完成樣品處理、試劑配制及儀器操作，降低人為誤差。另一方面，科學(xué)的HCP檢測方法在開發(fā)與應(yīng)用階段，需納入操作的合理變動區(qū)間（即耐用性）并配套質(zhì)控措施，從流程層面較大程度規(guī)避人為誤差對結(jié)果的干擾。此外，嚴格遵照標準操作流程（SOP）是保障檢測結(jié)果可靠性的關(guān)鍵，操作步驟不規(guī)范易造成結(jié)果重復(fù)性不佳或誤差擴大。目前，湖州申科已正式推出全自動HCP ELISA檢測系統(tǒng)，可完成樣品制備、孵育、洗板到數(shù)據(jù)采集的全流程操作，搭配實驗室信息管理系統(tǒng)（LIMS），能實現(xiàn)“輸入即輸出”，降低流程誤差。
LC-MS/MS 作為成熟穩(wěn)定的蛋白質(zhì)組學(xué)分析技術(shù)，依托超高分辨率與準確度，在生物分析領(lǐng)域中占據(jù)關(guān)鍵地位。該技術(shù)不僅可對低含量宿主細胞殘留蛋白（HCP）開展定性檢測，還能通過構(gòu)建專屬蛋白質(zhì)譜庫準確鑒定 HCP 的具體種類，為深度解析殘留蛋白組成提供重要支撐。不過該技術(shù)應(yīng)用中面臨的主要挑戰(zhàn)，是如何優(yōu)化 LC-MS 方法以契合 GMP 規(guī)范對產(chǎn)品放行檢測的嚴苛要求。在質(zhì)譜檢測環(huán)節(jié)，引入表征明確的內(nèi)標與外標蛋白，可準確分析 HCPs 的整體組成，并有效識別其中具有潛在風險的高風險蛋白。這一技術(shù)手段不僅為開發(fā)產(chǎn)品專屬 HCP ELISA 檢測方法提供有力數(shù)據(jù)支撐，還可助力工藝優(yōu)化升級，加快推進生物制品從研發(fā)到獲批上市的全流程進度。
針對工藝相近的產(chǎn)品線，平臺型試劑盒能夠?qū)崿F(xiàn)不同產(chǎn)品宿主細胞蛋白（HCP）殘留水平的監(jiān)測。
宿主細胞蛋白（HCP）是生物制品中源自細胞基質(zhì)的殘留雜質(zhì)，異質(zhì)性特征明顯。其復(fù)雜性主要體現(xiàn)在三方面：①理化特性差異：包含胞內(nèi)與分泌蛋白（涉及關(guān)鍵生理功能），等電點（pI 3-11）、分子量（5-250kDa）及疏水性的區(qū)間跨度大；②上游工藝影響：不同發(fā)酵工藝（如細胞株選擇、培養(yǎng)條件控制）會誘導(dǎo)獨特的翻譯后修飾（PTM），進而增加 HCP 的總量與生化復(fù)雜性；③下游工藝與產(chǎn)物特性干擾：抗體、細胞因子等重組蛋白或病毒類藥物的純化工藝，會選擇性殘留特定 HCP；同時，產(chǎn)物形式（如大腸桿菌的包涵體 / 可溶性表達）也會直接影響 HCP 的殘留譜。針對特定生產(chǎn)工藝開發(fā)定制化檢測方案，是準確監(jiān)控 HCP 殘留的關(guān)鍵所在。
圍繞 HCP 檢測試劑盒開發(fā)，需統(tǒng)籌法規(guī)適配、物料穩(wěn)定、團隊專業(yè)響應(yīng)及案例積累，構(gòu)建體系化保障體系。浙江重組蛋白用宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測試劑盒定制化 HCP 殘留檢測試劑盒的抗原校準品代表性更強，可有效降低 HCP 漏檢風險與定量誤差。PG13宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測常見問題分析
大腸埃希氏菌（Escherichiacoli，簡稱E.coli，又稱大腸桿菌）作為模式微生物，在生命科學(xué)研究領(lǐng)域應(yīng)用較多。伴隨基因治療產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，它還成為質(zhì)粒DNA（pDNA）生產(chǎn)的主要宿主菌。質(zhì)粒樣品常規(guī)提取工藝中，常使用強堿性溶液進行細胞裂解與蛋白質(zhì)變性，這種處理使其中的宿主細胞蛋白（HCPs）與傳統(tǒng)物理破碎法得到的HCPs差異明顯，進而導(dǎo)致采用免疫學(xué)原理的檢測方法時，殘留檢測結(jié)果偏差較大。湖州申科生物的E.coli克隆菌堿裂HCP殘留檢測試劑盒，適用于大腸埃希氏菌（即大腸桿菌）克隆菌株的HCPs檢測，涵蓋DH5α、Top10、JM109等常見菌株。該試劑盒的抗體制備過程中，采用堿裂工藝制備的HCPs免疫動物，得到專屬抗體，可用于經(jīng)堿液裂解工藝處理后的宿主細胞蛋白（HCPs）定量檢測。
PG13宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測常見問題分析
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