CHO宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法學驗證

來源：發布時間：2025-12-19

宿主細胞蛋白（HCP）的來源中，常伴隨核酸、胞膜脂類及培養基中的氨基酸等非HCP成分，這些成分會干擾總蛋白檢測的準確性，因此在檢測前需開展純化前處理，同時對總蛋白檢測方法實施方法學確認。HCP本身屬于多蛋白混合物，不同總蛋白定量方法的檢測結果會存在一定差異，這也是造成HCP免疫檢測方法結果不一致的原因之一。若不同HCP蛋白定量方法的檢測結果差異較大，通常需同時采用2種及以上經確認的方法進行檢測，隨后取平均值。總蛋白檢測方法的定量限通常只能達到μg/mL級別，而HCP檢測試劑盒的產品校準品濃度則處于ng/mL級別。將HCP高濃度原液稀釋至低濃度產品校準品的過程中會產生稀釋誤差，因此需對產品校準品重新進行標定賦值。編輯分享用多種方法確認檢測結果時，如何選擇合適的方法組合？總蛋白檢測定量限與HCP校準品濃度差異大的原因是什么？有哪些方法可以降低非HCP成分對檢測的干擾？

整合成熟平臺、技術實力、合規體系、穩定供應、專業團隊與成功案例，筑牢 HCP 定制化開發的全維度支撐。CHO宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法學驗證

定制化試劑盒之所以成為宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測的優先選擇，關鍵原因之一是其構建的檢測體系更契合商業化生產中HCP工藝雜質的控制需求。在HCP校準品與HCP抗體這兩大關鍵試劑組分達標后，定制化方法的建立與優化會依托真實的純化中間品及原液樣品開展——通過優化檢測條件提升對低濃度HCP的檢測靈敏度，從而滿足工藝驗證與過程控制的需求。臨床三期階段需對生產工藝開展系統驗證，以保障其穩定性與可重復性，而定制化HCPELISA檢測方法能更準確地監測工藝中HCP的去除效果，為工藝驗證提供堅實支撐。過程控制環節，借助工藝特異型HCP ELISA檢測方法，可實時監測生產過程中的HCP水平，擁有更強的生產異常預警能力，能及時排查生產風險，保障產品質量穩定。

江蘇工藝特異型宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體覆蓋率驗證經質譜和二維電泳雙重技術表征，湖州申科宿主細胞蛋白（HCP）試劑盒校準品具有較廣的蛋白覆蓋能力。

目前利用 Vero 細胞培養的病毒包括狂犬病病毒、脊髓灰質炎病毒等，種類多樣，生產工藝也各有不同。湖州申科生物的 Vero 細胞裂解型 HCP 殘留檢測試劑盒（一步酶聯免疫吸附法），針對工藝中 Vero 細胞裂解后產生的大量不同類型 HCPs，可定量檢測采用 Vero 細胞系生產且經細胞裂解工藝收獲的生物制品中宿主細胞蛋白殘留，其抗體和校準品可覆蓋近 3000 種蛋白。該試劑盒操作簡便，能提升實驗人員的時間利用效率。抗體覆蓋率分別為 65.1%-85.1%（IMBS-2D）和 76.9%（IMBS-MS，Unique Peptide≥2）。試劑盒嚴格依據 ISO13485 質量體系生產，且按法規要求完成性能驗證，各項性能均滿足 Vero 宿主細胞蛋白檢測需求。

SHENTEK^®AbunProteoX 是以磁珠為基礎構建的親和配體，適用于多種生物制品樣本。其操作流程經精心設計，簡化高效，方便用戶操作。與傳統非變性酶解方法相比，AbunProteoX 能有效提升 HCP 的檢出效果，有效降低質譜分析的檢測下限，使低豐度蛋白得以有效檢出，保障了檢測的高靈敏度。即便存在高豐度目標蛋白時，經 AbunProteoX 處理后，仍能有效分析宿主細胞蛋白（HCPs），為生物制品中宿主細胞蛋白殘留控制提供了簡便、易用且高效的樣品處理工具。

基于 ISO13485 體系研發，湖州申科宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測試劑盒符合法規申報要求。

MDCK（Madin-DarbyCanineKidney，馬丁達比犬腎上皮細胞）細胞系是源于犬腎的持續性細胞系，廣泛應用于流感病毒增殖純化、流感疫苗生產等過程，作為細胞基質使用。憑借高病毒產量與滴度、無適應性突變、易馴化等優勢，MDCK細胞已成為業界公認的流感病毒毒株分離及流感疫苗生產適配細胞系。和其他產品雜質類似，MDCK宿主殘留蛋白（HCP）可能對生物制品的安全性與有效性產生不良影響，因此在生產監測、產品放行等環節，需對其開展定量研究并實施嚴格控制。SHENTEK^®MDCK HCP殘留檢測試劑盒（一步酶聯免疫吸附法），是湖州申科生物自主研發、擁有完全自主知識產權且關鍵試劑實現全國產化的MDCK HCP通用檢測試劑盒。該試劑盒適用于基于MDCK細胞基質的病毒增殖純化、疫苗生產等過程，可對其中的MDCK宿主殘留蛋白進行定量檢測，且操作步驟簡便快捷、檢測專一性高、性能穩定可靠。

湖州申科系列宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測產品，均完成校準品表征與抗體覆蓋率兩項關鍵分析工作。畢赤酵母宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法開發

抗體覆蓋率評估為定性分析，原理與 ELISA 檢測相近，需兼具良好穩定性與高靈敏度，保障結果準確可信。CHO宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法學驗證

宿主細胞蛋白殘留檢測中，抗體覆蓋率評估實驗的操作難度較高，需在實驗方法建立階段對關鍵步驟開展充分驗證，以確保實驗方法具備穩健性。湖州申科研發的磁珠捕獲式 IMBS 技術（immunomagnetic beads separation，免疫磁珠分離），在開發過程中已對關鍵步驟進行充分驗證，相關驗證結果已通過專業評審，具體驗證內容（部分）如下：① 方法優化：圍繞磁珠與抗體的偶聯比例、洗滌液體積、洗滌次數、洗脫次數等關鍵參數開展優化驗證，確保方法穩健性；② 過程質控：二維電泳存在實驗步驟繁瑣、時間跨度大、中間環節難把控等問題，因此在等電聚焦實驗環節引入熒光標記多肽，可快速判定等電聚焦效果；同時在 SDS-PAGE 電泳兩側增設 40 ng 銀染質控樣品，用于控制銀染顯色過程；③ 方法重復性：針對 2D 分析與 LC-MS 分析開展重復性驗證，其中 2D 分析方法的重復性可達 80% 以上，LC-MS 分析方法的重復性可達 90% 以上；④ 上樣量優化：針對 2D 分析與 LC-MS 分析實施上樣量驗證，規避上樣量差異對檢測結果的影響；⑤ 假陽性排查：排查樣品與陰性抗體間是否存在非特異性結合，確認 IMBS 實驗設定的步驟與參數是否會導致假陽性結果。

CHO宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法學驗證

標簽：熱原檢測宿主細胞殘留DNA檢測支原體檢測內毒素檢測宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測

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