MAT 法熱原檢測(cè)的穩(wěn)定性需從細(xì)胞、試劑、操作、樣品四維度嚴(yán)格把控。細(xì)胞層面，細(xì)胞活性與純度直接決定熱原響應(yīng)能力，活性不足會(huì)減少炎癥因子分泌，純度低則引入雜細(xì)胞干擾；細(xì)胞批次間一致性也關(guān)鍵，TLR 受體表達(dá)、倍增時(shí)間差異會(huì)導(dǎo)致結(jié)果波動(dòng)。試劑與耗材方面，標(biāo)準(zhǔn)品效價(jià)需溯源國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，避免降解影響標(biāo)曲；試劑盒中細(xì)胞因子需質(zhì)控，防止外源熱原污染；培養(yǎng)液、緩沖液及無(wú)熱原耗材（吸頭、西林瓶）若熱原控制不當(dāng)，易引發(fā)假陽(yáng)性。操作上，加樣手法要統(tǒng)一（如 8 通道移液器液面一致），孵育需 37℃、5% CO?穩(wěn)定環(huán)境，試劑配制濃度準(zhǔn)確，設(shè)備（酶標(biāo)儀、洗板機(jī)）定期校準(zhǔn)，操作偏差會(huì)直接導(dǎo)致異常。樣品層面，自身干擾物質(zhì)（消除炎癥成分、高鹽）、pH 偏離 6-8 或微生物污染，會(huì)抑制細(xì)胞活化或引入外源熱原，需針對(duì)性預(yù)處理。

在 MAT 法熱原檢測(cè)中，PBMC（外周血單核細(xì)胞）與單核細(xì)胞系各有優(yōu)劣，單核細(xì)胞系更適合標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)。PBMC 的優(yōu)勢(shì)在于免疫細(xì)胞成分豐富（含單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等），對(duì)熱原反應(yīng)敏感，靈敏度相對(duì)較高；但局限同樣明顯 ——PBMC 需從不同供體獲取，供體免疫狀態(tài)差異會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不穩(wěn)定，且無(wú)法長(zhǎng)期保存，難以建立標(biāo)準(zhǔn)化方法學(xué)。單核細(xì)胞系（如 HL-60、MM6、THP1）則克服了 PBMC 的局限：細(xì)胞來(lái)源穩(wěn)定（可批量培養(yǎng)），TLR 受體表達(dá)覆蓋主要亞型（如 HL-60 表達(dá) TLR1-TLR9），對(duì)熱原反應(yīng)重復(fù)性好，更適合商業(yè)化試劑盒與法規(guī)檢測(cè)。不同單核細(xì)胞系性能也有差異：MM6/IL-6 法檢測(cè)限約 0.05EU/mL，THP1/TNF-α 法因 TNF-α 為一級(jí)免疫效應(yīng)物檢測(cè)限更低，但 TNF-α 穩(wěn)定性差；HL-60/IL-6 法檢測(cè)限與穩(wěn)定性均優(yōu)于前兩者，成為主流選擇。湖州申科生物MAT試劑盒選用 HL-60 細(xì)胞系，正是基于其優(yōu)異的穩(wěn)定性與熱原響應(yīng)適配多場(chǎng)景，確保不同批次檢測(cè)結(jié)果一致。

熱原是能引發(fā)恒溫動(dòng)物體溫異常升高的物質(zhì)總稱，主要成分為細(xì)菌內(nèi)毒素（革蘭氏陰性菌脂多糖 LPS），同時(shí)涵蓋病毒、真菌毒素、支原體等非內(nèi)毒素?zé)嵩?，其檢測(cè)是保障藥品與醫(yī)療器械安全性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。當(dāng)前熱原檢測(cè)已形成 “特異性檢測(cè) + 廣譜篩查” 互補(bǔ)的完整體系：以鱟試驗(yàn)法（含天然 LAL 與重組 rCR/rFC 試劑）作為細(xì)菌內(nèi)毒素的特異性檢測(cè)手段，憑借 fg 級(jí)靈敏度成為制藥行業(yè)常規(guī)質(zhì)控方法，可通過(guò)凝膠法實(shí)現(xiàn)定性、動(dòng)態(tài)濁度 / 顯色法完成定量；以家兔熱原試驗(yàn)作為傳統(tǒng)廣譜篩查方法，雖操作繁瑣（需預(yù)試篩選基礎(chǔ)體溫穩(wěn)定家兔，正式試驗(yàn)觀察 3 小時(shí)體溫變化），但仍是放射性質(zhì)的藥物、血液制品等高風(fēng)險(xiǎn)產(chǎn)品排除非內(nèi)毒素?zé)嵩难a(bǔ)充手段；以單核細(xì)胞活化反應(yīng)測(cè)定（MAT）作為新興全熱原檢測(cè)技術(shù)，利用人源單核細(xì)胞（如 THP-1 細(xì)胞）釋放 IL-6、TNF-α 等細(xì)胞因子的特性，可同時(shí)識(shí)別內(nèi)毒素與非內(nèi)毒素?zé)嵩?，契合疫苗、基因治療產(chǎn)品等對(duì)風(fēng)險(xiǎn)控制的需求。三種方法協(xié)同應(yīng)用，從原料入廠到成品放行構(gòu)建全流程熱原防控網(wǎng)絡(luò)，既保證對(duì)內(nèi)毒素的準(zhǔn)確監(jiān)控，又避免非內(nèi)毒素?zé)嵩倪z漏風(fēng)險(xiǎn)。

MAT法熱原檢測(cè)特定標(biāo)準(zhǔn)品與傳統(tǒng)細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品存在本質(zhì)差異，需明確區(qū)分以保障檢測(cè)準(zhǔn)確性。MAT 特定標(biāo)準(zhǔn)品為大腸桿菌（E.coli 0113:H10:K）菌株制備，經(jīng)全國(guó) 5 家藥品檢驗(yàn)所（含中檢院）用凝膠法、動(dòng)態(tài)濁度法及動(dòng)態(tài)顯色法協(xié)作標(biāo)定，溯源至國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品，可同時(shí)檢測(cè)內(nèi)毒素與非內(nèi)毒素?zé)嵩?；而傳統(tǒng)細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（如 9000EU 規(guī)格）源自大腸桿菌（E.coli O111:B4），只適用于內(nèi)毒素檢測(cè)，無(wú)法識(shí)別非內(nèi)毒素?zé)嵩ｊP(guān)鍵驗(yàn)證數(shù)據(jù)顯示，用 MAT法檢測(cè) 9000EU 內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)，加標(biāo)回收率不在 50%-200% 的合格范圍，因此不能替代 MAT 特定標(biāo)準(zhǔn)品。值得注意的是，盡管 MAT 試劑盒用內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)曲，但經(jīng)驗(yàn)證其可識(shí)別非內(nèi)毒素?zé)嵩魳悠分写嬖诜莾?nèi)毒素?zé)嵩ㄈ绺锾m氏陽(yáng)性菌的脂磷壁酸），會(huì)觸發(fā)細(xì)胞陽(yáng)性反應(yīng)，有效避免漏檢，這也是 MAT 法在熱原防控中優(yōu)于單一內(nèi)毒素檢測(cè)的關(guān)鍵優(yōu)勢(shì)。

MAT法熱原檢測(cè)中，非內(nèi)毒素?zé)嵩∟EP）對(duì)照品設(shè)為 “選做”，且試劑盒不默認(rèn)配備，需結(jié)合檢測(cè)需求靈活使用，背后有明確的設(shè)置邏輯。首先，試劑盒開(kāi)發(fā)階段已通過(guò)驗(yàn)證（用多種 NEP 配體刺激細(xì)胞），證明其可檢出 NEP，后期實(shí)驗(yàn)是否加入 NEP 對(duì)照，只需根據(jù)內(nèi)部管理要求或專業(yè)人員建議確定，無(wú)需強(qiáng)制設(shè)置；若產(chǎn)品產(chǎn)線明確無(wú) NEP 污染風(fēng)險(xiǎn)（如只使用革蘭氏陰性菌原料），可刪除 NEP 對(duì)照，簡(jiǎn)化操作。其次，試劑盒不配備 NEP 對(duì)照品，是因不同用戶需求差異大 —— 部分用戶需檢測(cè)特定 NEP（如脂磷壁酸），部分需檢測(cè)廣譜 NEP，因此提供單獨(dú)購(gòu)買(mǎi)選項(xiàng)，用戶可按需選擇，避免資源浪費(fèi)。NEP 對(duì)照品的主要使用場(chǎng)景包括：一是方法驗(yàn)證階段，用于確認(rèn)試劑盒對(duì) NEP 的響應(yīng)性；二是產(chǎn)品工藝變更后，排查是否引入 NEP 污染；三是歐盟申報(bào)時(shí)，需證明方法可覆蓋 NEP，此時(shí)需加入 NEP 對(duì)照品并顯示陽(yáng)性結(jié)果。若樣品檢測(cè)中 NEP 對(duì)照品陽(yáng)性，而樣品檢測(cè)陰性，可排除 NEP 污染；若樣品陽(yáng)性，則需進(jìn)一步鑒定熱原類型。