廣東熱原檢測流程

來源：發(fā)布時間：2025-09-29

熱原檢測MAT法的法規(guī)地位持續(xù)提升，已成為多國藥典認(rèn)可的熱原檢測替代方法。歐洲藥典（EP）是推動 MAT 應(yīng)用的關(guān)鍵力量：通則 2.6.30 明確 MAT 可替代家兔熱原試驗（RPT），且能同時檢測內(nèi)毒素與非內(nèi)毒素?zé)嵩?024 年歐洲藥典委員會批準(zhǔn)刪除所有條款中的家兔法，修訂文本將于 2025 年7月1日生效，強制鼓勵使用 MAT 等體外替代方法。美國藥典（USP）<151> 規(guī)定，經(jīng)驗證的體外熱原試驗（如 MAT）可替代家兔法，且需依據(jù) USP<1225>開展驗證；FDA 行業(yè)指南進一步明確 MAT 的合規(guī)性。中國藥典 2020 年版通則 9301 將 MAT 列為熱原檢查的補充方法，雖暫未替代家兔法，但明確其適用于復(fù)雜基質(zhì)樣品的全熱原篩查。此外，ISO 10993-1、ICCVAM 等國際標(biāo)準(zhǔn)也優(yōu)先推薦體外熱原檢測模型，全球法規(guī)協(xié)同推動 MAT 成為熱原檢測的主流技術(shù)。

2023年P(guān)RIMM研究：聚山梨酯80 mRNA疫苗中，家兔法熱原檢查因LER漏檢41%，MAT回收率98%+。廣東熱原檢測流程

熱原是能引發(fā)恒溫動物體溫異常升高的物質(zhì)總稱，主要成分為細(xì)菌內(nèi)毒素（革蘭氏陰性菌脂多糖 LPS），同時涵蓋病毒、真菌毒素、支原體等非內(nèi)毒素?zé)嵩錂z測是保障藥品與醫(yī)療器械安全性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。當(dāng)前熱原檢測已形成 “特異性檢測 + 廣譜篩查” 互補的完整體系：以鱟試驗法（含天然 LAL 與重組 rCR/rFC 試劑）作為細(xì)菌內(nèi)毒素的特異性檢測手段，憑借 fg 級靈敏度成為制藥行業(yè)常規(guī)質(zhì)控方法，可通過凝膠法實現(xiàn)定性、動態(tài)濁度 / 顯色法完成定量；以家兔熱原試驗作為傳統(tǒng)廣譜篩查方法，雖操作繁瑣（需預(yù)試篩選基礎(chǔ)體溫穩(wěn)定家兔，正式試驗觀察 3 小時體溫變化），但仍是放射性質(zhì)的藥物、血液制品等高風(fēng)險產(chǎn)品排除非內(nèi)毒素?zé)嵩难a充手段；以單核細(xì)胞活化反應(yīng)測定（MAT）作為新興全熱原檢測技術(shù)，利用人源單核細(xì)胞（如 THP-1 細(xì)胞）釋放 IL-6、TNF-α 等細(xì)胞因子的特性，可同時識別內(nèi)毒素與非內(nèi)毒素?zé)嵩鹾弦呙纭⒒蛑委煯a(chǎn)品等對風(fēng)險控制的需求。三種方法協(xié)同應(yīng)用，從原料入廠到成品放行構(gòu)建全流程熱原防控網(wǎng)絡(luò)，既保證對內(nèi)毒素的準(zhǔn)確監(jiān)控，又避免非內(nèi)毒素?zé)嵩倪z漏風(fēng)險。

河南醫(yī)療器械熱原檢測熱原檢測歷經(jīng)動物整體試驗、體外生化反應(yīng)到細(xì)胞免疫應(yīng)答的三階段演進，靈敏度與效率不斷提升。

湖州申科生物熱原檢測（MAT法）試劑盒在靈敏度、穩(wěn)定性與適用性上表現(xiàn)突出，關(guān)鍵性能參數(shù)符合藥典要求：標(biāo)曲線性范圍 0.0125-1.0EU/mL，相關(guān)系數(shù) R2≥0.98，定量限 0.025EU/mL，檢測限（LOD）0.0125EU/mL，批間精密度 CV≤25%，可準(zhǔn)確捕捉微量熱原。其優(yōu)勢在于特定的單核細(xì)胞系 —— 與依賴供體血液的 PBMC 細(xì)胞不同，申科 MAT 細(xì)胞系來源清晰可溯源，無需倫理審批與血站合作，規(guī)避供體差異導(dǎo)致的檢測波動。對比同類型產(chǎn)品（如國外廠家 PBMC 細(xì)胞），申科細(xì)胞系的標(biāo)曲各濃度點 CV 更低（低至3.6%）、相對偏差更小（ 12.31%），線性 R2 達(dá) 1.000，穩(wěn)定性更優(yōu)。此外，細(xì)胞凍存液組分經(jīng)優(yōu)化，復(fù)蘇后活率高，無需額外調(diào)整細(xì)胞狀態(tài)即可直接與供試品共孵育，操作便捷；且適配任何具備 450nm 波長的酶標(biāo)儀，無需專門的設(shè)備，降低實驗室投入成本。

在 MAT 熱原檢測中，單核細(xì)胞系與 PBMC（外周血單個核細(xì)胞）的檢測結(jié)果穩(wěn)定性差異明顯。實驗結(jié)果數(shù)據(jù)顯示，單核細(xì)胞系的標(biāo)曲 R2 達(dá) 1.000，各濃度點 CV 值極低（如 ST1 為 0.92%、ST2 為 1.5%），相對偏差均在 5% 以內(nèi)；而 PBMC 的標(biāo)曲 R2 為 0.997，部分濃度點 CV 值超 20%（如 ST2 為 39.6%、ST6 為 45.5%），相對偏差高達(dá) 171.43%。這種差異源于兩者對熱原反應(yīng)的一致性—單核細(xì)胞系能穩(wěn)定釋放 IL-6，PBMC 則因供體差異導(dǎo)致 IL-6 釋放水平波動，直接影響熱原檢測結(jié)果的重復(fù)性，單核細(xì)胞系更適配準(zhǔn)確的熱原定量需求。

單核細(xì)胞活化試驗（MAT）將熱原檢測從經(jīng)驗性觀察，推進至受體-配體相互作用的分子本質(zhì)。

PBMC（外周血單個核細(xì)胞）的供體差異會直接導(dǎo)致熱原檢測結(jié)果的波動，主要體現(xiàn)在 IL-6 釋放水平的不一致。不同供體的 PBMC，其單核細(xì)胞比例、TLR 受體表達(dá)量、免疫活性狀態(tài)存在差異：有的供體 PBMC 受熱原刺激后， IL-6 釋放量高；有的則極低，甚至無明顯響應(yīng)。實驗數(shù)據(jù)顯示， PBMC 的標(biāo)曲各濃度點相對偏差有高達(dá) 171.43%的，正是這種差異的體現(xiàn)，導(dǎo)致熱原檢測結(jié)果難以標(biāo)準(zhǔn)化，無法準(zhǔn)確判斷供試品熱原是否超標(biāo)，從而增加了藥品的質(zhì)量控制風(fēng)險。

在藥品安全語境中，熱原特指細(xì)菌性熱原—微生物代謝產(chǎn)物、細(xì)菌尸體及內(nèi)毒素的統(tǒng)稱。廣東熱原檢測流程

熱原檢測MAT零動物消耗，降低檢測成本，提升檢測效率和倫理水平。廣東熱原檢測流程

MAT 試劑盒配套的即用型細(xì)胞存在明確的傳代限制，且商業(yè)化傳代需獲得授權(quán)，關(guān)鍵是保障細(xì)胞質(zhì)量與檢測可靠性。首先，即用型細(xì)胞經(jīng)特殊工藝優(yōu)化，已處于較好的活性與熱原響應(yīng)狀態(tài)，不適合傳代，傳代后細(xì)胞會出現(xiàn) TLR 受體表達(dá)下降、炎癥因子分泌減少等問題，導(dǎo)致熱原檢測靈敏度降低，如 HL-60 細(xì)胞傳代超過 5 代后，IL-6 分泌量下降 30%，無法滿足檢測要求。其次，若用戶需將即用型細(xì)胞用于商業(yè)化生產(chǎn)（如大規(guī)模檢測），需獲得湖州申科授權(quán)，包括用戶資質(zhì)審核、技術(shù)培訓(xùn)、傳代方案驗證，確保用戶具備細(xì)胞培養(yǎng)與質(zhì)量控制能力，避免未經(jīng)授權(quán)傳代導(dǎo)致細(xì)胞特性改變，影響檢測結(jié)果一致性。此外，參考文獻(xiàn)數(shù)據(jù)，即使是可傳代的單核細(xì)胞系，使用代次也不超過 20 代，超過后代次細(xì)胞穩(wěn)定性差，因此即用型細(xì)胞設(shè)計為 “一次性使用”，從源頭避免傳代帶來的風(fēng)險。用戶需嚴(yán)格遵守傳代限制，若需長期使用，建議定期采購新批次試劑盒，確保細(xì)胞質(zhì)量。

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標(biāo)簽：宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測內(nèi)毒素檢測熱原檢測支原體檢測宿主細(xì)胞殘留DNA檢測

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