北京抗體藥物熱原檢測常見問題分析

來源：發布時間：2025-09-30

MAT 試劑盒配套的即用型細胞存在明確的傳代限制，且商業化傳代需獲得授權，關鍵是保障細胞質量與檢測可靠性。首先，即用型細胞經特殊工藝優化，已處于較好的活性與熱原響應狀態，不適合傳代，傳代后細胞會出現 TLR 受體表達下降、炎癥因子分泌減少等問題，導致熱原檢測靈敏度降低，如 HL-60 細胞傳代超過 5 代后，IL-6 分泌量下降 30%，無法滿足檢測要求。其次，若用戶需將即用型細胞用于商業化生產（如大規模檢測），需獲得湖州申科授權，包括用戶資質審核、技術培訓、傳代方案驗證，確保用戶具備細胞培養與質量控制能力，避免未經授權傳代導致細胞特性改變，影響檢測結果一致性。此外，參考文獻數據，即使是可傳代的單核細胞系，使用代次也不超過 20 代，超過后代次細胞穩定性差，因此即用型細胞設計為 “一次性使用”，從源頭避免傳代帶來的風險。用戶需嚴格遵守傳代限制，若需長期使用，建議定期采購新批次試劑盒，確保細胞質量。

MAT 熱原檢測中細胞活性影響巨大，活率需達一定標準保證檢測效果。北京抗體藥物熱原檢測常見問題分析

PBMC（外周血單個核細胞）用于 MAT 熱原檢測時，存在異質性與血源供應兩大關鍵問題。從異質性來看，PBMC 含 12% 單核細胞與 88% 淋巴細胞，且來自不同供體，細胞組成、功能狀態及熱原反應存在明顯差異，導致熱原刺激后 IL-6 釋放量波動大，標準化難度高。血源供應方面，除受獻血者數量、時間及采集血液政策限制外，EP2.6.30 還要求嚴格檢測乙肝、丙肝等標志物，且采集血液、處理、試劑制備全程需無菌操作，流程環節多、復雜度高，遠不及單核細胞系制備簡便，易影響熱原檢測的時效性與穩定性。重慶熱原檢測單核細胞活化反應測定法熱原有廣譜來源特征，革蘭陰性菌（內毒素/LPS）致熱能力強，革蘭陽性菌、真菌、病毒均可產生。

MAT 法熱原檢測標曲采用非倍比稀釋，而非 1-0.5-0.25 的倍比稀釋，主要優勢在于提升標曲準確性與適用性，避免稀釋誤差影響。一是可密集覆蓋關鍵濃度區間：熱原檢測的重點關注區為低濃度拐點（如 0.0125-0.1EU/mL）與高濃度平臺區（如 0.5-1EU/mL），非倍比稀釋可在這些區間設置更多濃度點（如 0.0125、0.025、0.05、0.1、0.25、0.5、1EU/mL），提升曲線擬合精度，而倍比稀釋低濃度點少，易導致低濃度熱原定量不準。二是降低稀釋誤差累積：倍比稀釋需連續稀釋（如 1EU/mL→0.5EU/mL→0.25EU/mL），每一步誤差會累積，導致低濃度點實際濃度偏離理論值；非倍比稀釋通過單獨配制每個濃度點（如直接用標準品配制 0.025EU/mL），避免誤差累積，提升標曲可靠性。三是適配不同樣品濃度：非倍比稀釋可根據樣品預期濃度調整標曲范圍，如樣品預期濃度 0.05EU/mL，可增加 0.025、0.05、0.1EU/mL 點，確保樣品濃度落在標曲線性區，而倍比稀釋范圍固定，靈活性差。這些優勢使非倍比稀釋成為 MAT 法標曲配制的優先選擇方式。

生物制品（如單克隆抗體、重組蛋白、細胞因子）因基質成分復雜（含高濃度蛋白質、螯合劑、表面活性劑、緩沖鹽等），在熱原檢測過程中易出現“反應抑制”或“非特異性增強”現象，嚴重影響檢測結果準確性。選擇抗干擾能力更強的檢測方法至關重要，重組級聯試劑（rCR）因采用完整級聯反應路徑，抗干擾性優于天然 LAL；單核細胞活化反應測定（MAT）對復雜基質耐受性更高，通過適當稀釋即可消除多數干擾，因此生物制品熱原檢測常采用 “rCR 法（內毒素定量）+ MAT 法（全熱原篩查）” 的聯合方案，既保證內毒素檢測的準確性，又防控非內毒素熱原風險。

通過加標回收實驗，熱原檢測MAT法驗證了對LTA、酵母多糖等非內毒素熱原的檢出能力。

PyroSHENTEK^®熱原檢測試劑盒（貨號 1502100，規格 96 測試 / 盒）優勢在于搭載 MAT 特定單核細胞系，細胞表面表達多種 Toll 樣受體（TLR），可響應不同類型熱原。該細胞系來源清晰、可溯源，均一性強且無供體依賴，有效規避了傳統 PBMC 因供體差異導致的結果波動，同時安全風險低，無需擔憂外源因子污染。試劑盒采用 “標準化單核細胞 + ELISA 檢測” 一體化體系，通過嚴格的細胞質量控制（如凍存復融后活率達標），確保每次檢測的細胞狀態一致；搭配預包被 IL-6 抗體的酶標板與配套試劑，進一步減少體系誤差。從標曲數據來看，其擬合采用 4-Parameter Logistic 模型，R2 達 1.000，EC50 為 0.119EU/mL，參數置信區間穩定，復孔結果重復性優異，能為熱原定量提供準確如一的數據支撐，避免因體系不穩定導致的檢測偏差。

MAT 法檢測革蘭氏陽性菌注射劑，需排查非內毒素熱原（如 LTA），避免只測內毒素漏檢。江蘇生物制品熱原檢測規范

湖州申科熱原檢測試劑盒（MAT）的單核細胞系無供體依賴性，解決PBMC因免疫狀態差異的結果波動。北京抗體藥物熱原檢測常見問題分析

在 MAT 法熱原檢測中，PBMC（外周血單核細胞）與單核細胞系各有優劣，單核細胞系更適合標準化檢測。PBMC 的優勢在于免疫細胞成分豐富（含單核細胞、淋巴細胞等），對熱原反應敏感，靈敏度相對較高；但局限同樣明顯 ——PBMC 需從不同供體獲取，供體免疫狀態差異會導致檢測結果不穩定，且無法長期保存，難以建立標準化方法學。單核細胞系（如 HL-60、MM6、THP1）則克服了 PBMC 的局限：細胞來源穩定（可批量培養），TLR 受體表達覆蓋主要亞型（如 HL-60 表達 TLR1-TLR9），對熱原反應重復性好，更適合商業化試劑盒與法規檢測。不同單核細胞系性能也有差異：MM6/IL-6 法檢測限約 0.05EU/mL，THP1/TNF-α 法因 TNF-α 為一級免疫效應物檢測限更低，但 TNF-α 穩定性差；HL-60/IL-6 法檢測限與穩定性均優于前兩者，成為主流選擇。湖州申科生物MAT試劑盒選用 HL-60 細胞系，正是基于其優異的穩定性與熱原響應適配多場景，確保不同批次檢測結果一致。

北京抗體藥物熱原檢測常見問題分析

標簽：宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測宿主細胞殘留DNA檢測內毒素檢測熱原檢測支原體檢測

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