疫苗熱原檢測單核細胞活化反應測定法

來源：發布時間：2025-10-06

PyroSHENTEK^®熱原檢測試劑盒（MAT法）已完成 25 個品種樣品的檢測驗證，覆蓋單抗類、疫苗類、基因工程類、血液制品類、生化藥品類與注射液，結果顯示其適配性范圍廣但需關注部分樣品的干擾。疫苗類（如麻腮風聯合減毒活疫苗、人用狂犬病疫苗）、基因工程類（重組人促紅素、干擾素 α-2b）、血液制品類（人血白蛋白、凝血因子 Ⅷ）與注射液（生理鹽水、琥珀酰明膠）的加標回收率均在 50%-200% 范圍內，無明顯干擾，檢測結果可靠。單抗類（如貝伐珠單抗、阿達木單抗）、中藥注射液等樣品雖存在不同程度的抑制作用，需通過提高稀釋倍數（如稀釋至 MVD 上限）、超聲處理或添加中和劑消除抑制，優化后回收率均可達標。此外，MAT 法可有效檢測非內毒素熱原，如對貝伐珠單抗注射液中添加的酵母多糖（Zymosan，200μg/mL）、脂磷壁酸（LTA，10μg/mL），回收率分別達 113%、66.8%，證明其可解決傳統鱟試劑漏檢非內毒素熱原的問題，尤其適用于高風險生物制品的熱原防控。

MAT 熱原檢測能幫助分析和解決生物制品生產中出現的低內毒素回收（LER）現象。疫苗熱原檢測單核細胞活化反應測定法

在 MAT 熱原檢測中，單核細胞系與 PBMC（外周血單個核細胞）的檢測結果穩定性差異明顯。實驗結果數據顯示，單核細胞系的標曲 R2 達 1.000，各濃度點 CV 值極低（如 ST1 為 0.92%、ST2 為 1.5%），相對偏差均在 5% 以內；而 PBMC 的標曲 R2 為 0.997，部分濃度點 CV 值超 20%（如 ST2 為 39.6%、ST6 為 45.5%），相對偏差高達 171.43%。這種差異源于兩者對熱原反應的一致性—單核細胞系能穩定釋放 IL-6，PBMC 則因供體差異導致 IL-6 釋放水平波動，直接影響熱原檢測結果的重復性，單核細胞系更適配準確的熱原定量需求。

山西抗體藥物熱原檢測單核細胞活化試驗（MAT）將熱原檢測從經驗性觀察，推進至受體-配體相互作用的分子本質。

湖州申科生物熱原檢測試劑盒（MAT 法，貨號 1502100）包含完整的檢測體系，組分按功能可分為細胞培養類、ELISA 檢測類與輔助類，且儲存條件明確。細胞培養類組分包括：2-8℃儲存的培養液（25mL×2 瓶）、96 孔細胞孵育板，-18℃儲存的培養液添加劑（1.5mL×1 管）、細菌內毒素工作標準品，以及需液氮保存的 MAT 細胞（2 支），確保細胞活性與穩定性。ELISA 檢測類組分涵蓋：2-8℃儲存的生物素偶聯抗 IL-6 抗體（200×，60μL）、鏈霉親和素 HRP 復合物（100×，140μL）、TMB 顯色液（12mL）、終止液（6mL），以及抗 IL-6 預包被酶標板（8 孔 ×12 條），無需額外制備抗體，即開即用。輔助類組分包括細菌內毒素檢查用水（8mL×1 管）、稀釋液（25mL）、濃縮緩沖液（10×，25mL×2 瓶）與封板膜，滿足從樣品稀釋到檢測終止的全流程需求。各組分儲存條件嚴格區分，避免因儲存不當導致性能下降，保障檢測結果可靠。

MAT法熱原檢測中，樣品與細胞共培養時長需嚴格控制，以保障炎癥因子分泌量穩定。說明書要求共培養 24 小時，雖未明確允差，但實驗驗證顯示，±30 分鐘的允差對結果無明顯影響 —— 細胞因子（如 IL-6）分泌具有時間依賴性，24 小時左右達到分泌平臺期，半小時差異不會導致分泌量大幅波動。若實驗室對結果穩定性要求極高（如 QC 放行檢測），建議嚴格按 24 小時操作，避免因時長差異引入誤差；若為預實驗（如樣品稀釋倍數摸索），±30 分鐘允差可接受，但需在記錄中注明實際培養時長。需注意的是，共培養時長不可超過 26 小時或短于 22 小時：過長會導致細胞活性下降（炎癥因子分泌減少），過短則未達分泌平臺期（檢測信號偏低），均可能導致熱原濃度低估。此外，培養環境需保持穩定（37℃、5% CO?），溫度波動會影響細胞代謝，間接導致共培養時長的實際效果偏離，因此需定期校準培養箱溫度，確保環境條件一致。

MAT 熱原檢測中細胞活性影響巨大，活率需達一定標準保證檢測效果。

熱原是指微量即可引發恒溫動物體溫異常升高的物質，分為內源性（如細胞因子）與外源性兩類，外源性熱原又涵蓋微生物來源（革蘭氏陰性菌脂多糖 LPS、革蘭氏陽性菌脂磷壁酸 LTA、病毒、真菌等）與非微生物來源（灰塵、橡膠降解產物等）。傳統細菌內毒素檢查法（BET）只能檢測革蘭氏陰性菌的 LPS，無法覆蓋非內毒素熱原，而單核細胞活化試驗（MAT）可彌補這一缺陷。其原理是：熱原通過活化單核細胞表面的 Toll 樣受體（TLR，如 TLR4 識別 LPS、TLR2/TLR6 識別 LTA），啟動先天免疫反應，促使細胞釋放 IL-6、TNF-α 等促炎細胞因子；隨后采用 ELISA 法檢測 IL-6 濃度，結合 LPS 標準曲線推算樣品中總熱原含量，實現對內毒素與非內毒素熱原的同步檢測，契合《中國藥典》9301 指導原則中全場景防控熱原風險”的要求。

生物制品的高蛋白、螯合劑基質易對鱟試驗產生抑制，rCR與MAT聯合策略可消除干擾并控制熱原。化學制藥熱原檢測風險評估

進行熱原實驗時，樣品有效稀釋倍數上限應通過干擾實驗確定，既保護細胞活性又保證熱原檢測靈敏度。疫苗熱原檢測單核細胞活化反應測定法

熱原是能引發恒溫動物體溫異常升高的物質總稱，主要成分為細菌內毒素（革蘭氏陰性菌脂多糖 LPS），同時涵蓋病毒、真菌毒素、支原體等非內毒素熱原，其檢測是保障藥品與醫療器械安全性的關鍵環節。當前熱原檢測已形成 “特異性檢測 + 廣譜篩查” 互補的完整體系：以鱟試驗法（含天然 LAL 與重組 rCR/rFC 試劑）作為細菌內毒素的特異性檢測手段，憑借 fg 級靈敏度成為制藥行業常規質控方法，可通過凝膠法實現定性、動態濁度 / 顯色法完成定量；以家兔熱原試驗作為傳統廣譜篩查方法，雖操作繁瑣（需預試篩選基礎體溫穩定家兔，正式試驗觀察 3 小時體溫變化），但仍是放射性質的藥物、血液制品等高風險產品排除非內毒素熱原的補充手段；以單核細胞活化反應測定（MAT）作為新興全熱原檢測技術，利用人源單核細胞（如 THP-1 細胞）釋放 IL-6、TNF-α 等細胞因子的特性，可同時識別內毒素與非內毒素熱原，契合疫苗、基因治療產品等對風險控制的需求。三種方法協同應用，從原料入廠到成品放行構建全流程熱原防控網絡，既保證對內毒素的準確監控，又避免非內毒素熱原的遺漏風險。

疫苗熱原檢測單核細胞活化反應測定法

標簽：宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測宿主細胞殘留DNA檢測熱原檢測內毒素檢測支原體檢測

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