浙江原料藥內毒素檢測法規要求

來源：發布時間：2025-10-06

重組級聯試劑作為內毒素檢測鱟試劑的理想替代方案，其具備的優勢有：①優化的G因子級聯反應，無G因子旁路干擾。采用基因重組技術表達鱟血細胞中的C因子（Factor C）、B因子（Factor B）和凝固酶原（Proclotting enzyme），無G因子旁路干擾，排除1，3-β-D葡聚糖假陽性風險。②依然采用動態顯色法原理，可沿用天然鱟試劑檢測設備。重組級聯試劑（rCR）,與天然鱟（動態顯色法）具有相同的操作流程、檢測設備、分析方法，用戶可以沿用天然鱟的儀器、軟件、耗材、人員培訓、驗收程序等，無需投入額外成本。③具有與天然鱟的相同反應機制，檢測結果具有等效性。完全模擬了天然鱟試劑的酶聯反應，由3種蛋白組成的級聯反應機制提供了信號放大的過程，確保了檢測的準確性和靈敏度。湖州申科按照藥典要求進行替代方法驗證，無縫銜接技術轉移，助力用戶從方法驗證到工藝落地，從數據合規到全球申報。

內毒素檢查用水經二次精制，無菌無熱原，避免檢測假陽假陰。浙江原料藥內毒素檢測法規要求

當實驗室更換內毒素檢測方法或更換試劑供應商時，需進行方法比對與橋接驗證。比對實驗需選取至少 3批代表性樣品，分別用新舊方法檢測，計算結果相關性（如相關系數 R2≥0.95）和偏差（≤20%）。橋接驗證還需評估新方法的特異性、靈敏度是否與舊方法一致，如確認對高風險樣品（如含 β- 葡聚糖的樣品）的抗干擾能力相當。若方法變更涉及法規申報產品，需將驗證數據納入申報資料，證明變更后方法仍能有效控制內毒素風險，符合 FDA、NMPA 等監管機構對方法變更的合規性要求。

上海疫苗內毒素檢測操作步驟細菌內毒素試驗（BET）是用鱟變形細胞裂解物（LAL）測內毒素的體外方法，LAL 測試獲國際藥典推薦。

湖州申科針對 LER 提供多平臺內毒素檢測解決方案，適配不同成因的 LER 問題：一是鱟試劑配套增強劑，通過添加分散劑、過量二價陽離子，改善 LPS 聚集體狀態，提升回收率；二是重組鱟試劑（rCR），無 G 因子干擾，完全模擬天然鱟級聯反應，靈敏度達 0.005EU/mL，易與天然方法橋接；三是重組 C 因子（rFC），靈敏度 0.005-5EU/mL，性狀穩定，適配特定基質；四是單核細胞活化反應測定（MAT)法，通過檢測 IL-6 覆蓋全熱原，不受 LPS 結構變化影響；五是質譜技術，驗證基質殘留對檢測的干擾。多平臺協同確保內毒素檢測準確可靠。

實驗數據充分證明，內毒素檢測重組級聯試劑（rCR）與天然鱟試劑的檢測結果具有高度等效性，可實現方法無縫切換。對細胞培養輔料、凍干甲型肝炎疫苗、單抗 A/B 等 8 類代表性樣品的平行檢測顯示，rCR 的檢測平均值為 0.001-0.026EU/mL，天然鱟試劑為 0.002-0.034EU/mL，兩者偏差≤0.003EU/mL。加標回收率方面，rCR 為 70%-175.4%，天然鱟試劑為 82.2%-156.6%，均處于 50%-200% 的合格范圍。批內精密度上，rCR 的 CV 值為 0.524%-14.716%，天然鱟試劑為 0.908%-12.348%，均滿足法規對精密度的要求。這種等效性確保了實驗室在切換至重組試劑時，歷史數據和工藝控制標準的連續性，降低方法轉換風險。

內毒素檢測方法學驗證需覆蓋線性、精密度，確保不同批次檢測結果穩定。

樣品中存在的非特異性鱟反應啟動物，會繞過內毒素直接觸發鱟試劑反應，導致內毒素檢測出現假陽性，需針對性消除干擾。常見的非特異性啟動物包括 1,3-β-D 葡聚糖和含絲氨酸蛋白酶的生物制品（如胰酶）：1,3-β-D 葡聚糖會啟動鱟試劑的 G 因子旁路，不依賴內毒素即可引發凝膠形成或光度變化；胰酶等絲氨酸蛋白酶類物質，其作用機制與內毒素觸發鱟試劑的過程相似，會模擬內毒素信號導致誤判。針對這類干擾，若樣品含 1,3-β-D 葡聚糖，可使用試劑盒配套的抗增液，通過抑制 G 因子活性阻斷旁路啟動；若樣品為胰酶等生物制品，可通過加熱處理（如 80℃加熱 10 分鐘）滅活絲氨酸蛋白酶，避免其模擬內毒素反應。這些處理措施能有效排除非特異性信號，確保內毒素檢測只針對目標內毒素產生響應，提升結果準確性。

內毒素指示劑（ECV）是凍干脂多糖，監測制藥工藝高溫除內毒素效果。浙江內毒素檢測常見問題分析

細菌內毒素工作品若效價誤差或不穩定，將影響實驗結果。浙江原料藥內毒素檢測法規要求

重組試劑（rCR、rFC）是解決 LER 的重要工具，優化內毒素檢測性能。重組鱟試劑（rCR）通過基因工程表達 C、B 因子及凝固酶原，剔除 G 因子，完全模擬天然鱟級聯反應，靈敏度達 0.005EU/mL，與天然方法橋接容易，能避免 LPS 結構變化導致的假陰性；重組 C 因子（rFC）靈敏度 0.005-5EU/mL，性狀穩定、均一性好，雖需熒光酶標儀，但對部分 LER 場景（如無蛋白質干擾）適配性強。二者擺脫了天然鱟試劑的局限，為內毒素檢測提供更抗 LER 的選擇，契合行業技術趨勢。

浙江原料藥內毒素檢測法規要求

標簽：熱原檢測宿主細胞殘留DNA檢測支原體檢測宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測內毒素檢測

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