上海抗體藥物內(nèi)毒素檢測操作步驟
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發(fā)布時間：2025-10-06
在為新物料或新產(chǎn)品、中間產(chǎn)品建立細菌內(nèi)毒素檢測方法時，常會遇到各種困難，尤其是尚處于新藥研發(fā)早期階段的藥物。此時，由于藥物制劑、緩沖系統(tǒng)等還不穩(wěn)定，經(jīng)常會發(fā)生變化，這樣就給方法的建立帶來了不同程度的影響。在建立細菌內(nèi)毒素檢查法之前，須盡可能多地了解有關該藥品的基本信息，例如：有關樣品的可溶性信息、推薦的稀釋液、在水中的溶解度以及合適溶劑，樣品的pH范圍，分子量大小；如果是蛋白產(chǎn)品，還要了解該產(chǎn)品的等電點，產(chǎn)品規(guī)格、體積或重量，擬用于臨床的用法和用量等，以便選擇合適的樣品處理方法和內(nèi)毒素檢測方法。
70% 葡萄糖等高滲溶液會使鱟試劑蛋白變性，檢測前需用檢查用水稀釋樣本。上海抗體藥物內(nèi)毒素檢測操作步驟
生物制品（如單抗、疫苗、重組蛋白）注射劑因直接進入人體，對細菌內(nèi)毒素殘留限值要求嚴苛（通常≤0.5 EU/mg 或更低），檢測面臨基質(zhì)復雜、干擾物質(zhì)多等挑戰(zhàn)。樣品中常見的蛋白質(zhì)、螯合劑、表面活性劑等可能抑制或增強 LAL 反應，需通過預處理消除干擾：如采用稀釋法降低基質(zhì)濃度、添加中和劑（如 Mg2?）修復反應體系，或使用熱滅活去除蛋白類干擾物。此外，生物制品生產(chǎn)全流程需進行內(nèi)毒素監(jiān)控，從細胞培養(yǎng)上清、純化中間品到終產(chǎn)品均需檢測，確保工藝去除內(nèi)毒素的有效性，符合 ICH Q6B 等法規(guī)對 “關鍵質(zhì)量屬性” 的控制要求。
江蘇原料藥內(nèi)毒素檢測商業(yè)化試劑盒繪制內(nèi)毒素標準曲線時，起始濃度需統(tǒng)一為 1000EU/mL，避免稀釋誤差。
內(nèi)毒素檢測常與熱原檢測混淆，二者既有關聯(lián)又有區(qū)別：熱原是指所有能引起發(fā)熱的物質(zhì)（包括內(nèi)毒素、病毒、真菌等），通過傳統(tǒng)家兔熱原試驗檢測；內(nèi)毒素是熱原的主要成分（占 90% 以上），檢測更具特異性。目前，家兔熱原試驗因操作復雜、動物成本高，已逐漸被單核細胞活化反應測定法（MAT）替代，但部分產(chǎn)品（如放射性質(zhì)藥物、血液制品）仍需保留家兔試驗作為補充。法規(guī)要求內(nèi)毒素檢測結(jié)果需與熱原風險關聯(lián)，若內(nèi)毒素檢測合格但臨床出現(xiàn)熱原反應，需排查是否存在非內(nèi)毒素類熱原，通過聯(lián)合檢測確保產(chǎn)品安全性。
內(nèi)毒素檢測中，樣品中的蛋白質(zhì)或酶的修飾作用易破壞鱟試劑的反應體系，導致檢測結(jié)果失真。鱟試劑檢測內(nèi)毒素的本質(zhì)是一系列絲氨酸蛋白酶的酶促放大過程，若樣品中存在氧化劑、抗氧化劑、蛋白水解劑或?qū)Ｒ皇Щ顒瑫苯訙缁罘磻璧拿福欢掖肌⒈椒拥任镔|(zhì)則會導致蛋白質(zhì)變性，同樣抑制反應進程。例如，某些生物制品中含有的蛋白水解酶，可能提前降解鱟試劑中的蛋白酶，使內(nèi)毒素無法被正常檢測。為消除這類干擾，需優(yōu)先限制樣品中抑制物的含量：可采用內(nèi)毒素檢查用水稀釋樣品，降低抑制物濃度；對耐熱的抑制物（如部分蛋白水解酶），可通過加熱滅活處理（如 56℃孵育 30 分鐘）破壞其活性；若樣品基質(zhì)復雜，還可使用超濾技術分離內(nèi)毒素與干擾蛋白質(zhì)，避免修飾作用對酶促反應的影響，保障內(nèi)毒素檢測結(jié)果的可靠性。
內(nèi)毒素檢測假陰性多因樣品抑制，梯度稀釋結(jié)合加標試驗可定位偏差原因。
內(nèi)毒素檢測重組級聯(lián)試劑（rCR）在方法橋接方面具有明顯優(yōu)勢，可大幅度降低實驗室的轉(zhuǎn)換成本。在設備兼容性上，rCR 無需額外采購新設備，完全適配天然鱟動態(tài)顯色法現(xiàn)用的酶標儀（如 Molecular Devices、Tecan sunrise、Thermo MultiSkan ET 等品牌），支持 405nm 波長動態(tài)讀數(shù)和 37℃恒溫孵育。操作流程上，rCR 的樣品處理、試劑混合、加樣孵育等步驟與天然鱟試劑一致，實驗室無需重新培訓操作人員或修改 SOP。顯色系統(tǒng)方面，rCR 沿用與天然試劑相同的 PNA 顯色底物，通過黃色信號變化定量，檢測原理和數(shù)據(jù)分析方法保持不變。這種高度兼容性使實驗室能快速完成方法驗證和切換，加速重組試劑的合規(guī)應用進程。
細菌內(nèi)毒素檢測中，rCR 對高蛋白（如單抗、FBS）、細胞培養(yǎng)上清等特殊樣本適配性好。廣東疫苗內(nèi)毒素檢測低內(nèi)毒素回收重組級聯(lián)試劑（rCR）抗干擾能力強于重組 C 因子（rFC），適配高蛋白、疫苗等復雜樣本檢測。上海抗體藥物內(nèi)毒素檢測操作步驟
湖州申科生物凝膠法鱟試劑是根據(jù)凝集反應所形成凝膠的堅實程度來限量檢測樣本中細菌內(nèi)毒素含量。常用于人用和動物用注射藥物、生物制品及醫(yī)療器械等領域中定性或半定量地測定細菌內(nèi)毒素含量。本品為海洋生物鱟的血液變形細胞溶胞物的冷凍干燥制品,內(nèi)含能被微量細菌內(nèi)毒素活化的凝固酶原(Proclotting enzyme)和凝固酶蛋白(Coagulogen)。在適宜的條件下(溫度、pH值及無干擾物質(zhì)),細菌內(nèi)毒素能活化鱟試劑中的凝固酶原,使備試劑產(chǎn)生凝集反應形成凝膠。本品可以快速、準確地檢測樣品中的內(nèi)毒素水平，提高實驗效率,保障實驗結(jié)果的可靠性。
上海抗體藥物內(nèi)毒素檢測操作步驟
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