Hi-5宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測橋接驗證

來源：發布時間：2025-10-09

各國法規要求對生物藥品開展分析與純化處理，以將宿主細胞蛋白（HCP）降至可接受水平；即便終產品中痕量 HCP 進入患者體內，目前仍不明確特定殘留蛋白質雜質是否會對藥物的穩定性或免疫原性產生影響。在 HCP 限量標準方面，美國藥典推薦終產品 HCP 水平為 1-100 ng/mg；中國藥典各論則明確，大腸桿菌（E.coli）菌體 HCP 需不高于蛋白質總量的 0.10%（即 1000 ng/mg），CHO 細胞 HCP 需不高于蛋白質總量的 0.05%（即 500 ng/mg），假單胞菌 HCP 需不高于蛋白質總量的 0.02%（即 200 ng/mg）。

在生物制品質控領域需要基于產品特性與風險分析，聚焦關鍵質控點開發宿主蛋白殘留檢測方法。Hi-5宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測橋接驗證

操作規范是影響宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測結果的關鍵因素之一。一方面，實驗人員的專業能力與實操經驗會影響檢測結果的準確性，熟練人員可準確完成樣品處理、試劑配制及儀器操作，降低人為誤差。另一方面，科學的HCP檢測方法在開發與應用階段，需納入操作的合理變動區間（即耐用性）并配套質控措施，從流程層面較大程度規避人為誤差對結果的干擾。此外，嚴格遵照標準操作流程（SOP）是保障檢測結果可靠性的關鍵，操作步驟不規范易造成結果重復性不佳或誤差擴大。目前，湖州申科已正式推出全自動HCP ELISA檢測系統，可完成樣品制備、孵育、洗板到數據采集的全流程操作，搭配實驗室信息管理系統（LIMS），能實現“輸入即輸出”，降低流程誤差。

Sf9宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測供應廠家SHENTEK? AutoElisa-4K HCP 檢測自動化系統可減少人為誤差，滿足 21 CFR Part 11 數據管理要求。

宿主細胞蛋白殘留檢測抗體覆蓋率評估實驗操作復雜，需要在建立實驗方法階段對關鍵步驟進行充分的驗證，以證明實驗方法的穩健性。湖州申科開發的基于磁珠捕獲的IMBS方法（immunomagnetic beads separation），在開發過程中對關鍵步驟進行了充分驗證,相關結果經過專業評審，驗證的內容如下（部分）：①方法優化：針對磁珠與抗體的偶聯比例、洗滌液體積、洗滌次數、洗脫次數等關鍵參數進行優化驗證，以保證方法的穩健性；②過程質控：二維電泳存在實驗步驟多，時間跨度長，中間步驟難以控制等缺陷，因此在等電聚焦實驗部分設計了熒光標記多肽，可快速判斷等電聚焦效果。在SDS-PAGE電泳的兩側增加40 ng銀染質控，用于銀染顯色的控制；③方法重復性：針對2D分析以及LC-MS分析進行重復性確認，其中2D分析方法重復性可達到80%以上，LC-MS分析方法可到90%以上；④上樣量優化：針對2D分析以及LC-MS分析進行上樣量確認，消除上樣量差異對檢測結果帶來的影響；⑤假陽性：排除樣品與陰性抗體之間是否存在非特異性結合，確定IMBS實驗所設定的步驟、參數是否有假陽性結果存在。

湖州申科生物依據不同宿主的實際生產工藝，借助高質量免疫原與HCP多抗的標準化制備流程，制備出高效價、高覆蓋率的抗體，進而開發出SHENTEK^®HCP檢測試劑盒：適配大腸桿菌表達菌（BL21）生產工藝及克隆菌堿裂法提取質粒工藝，以及適配CHO、MDCK、HEK293、Sf9、VERO、畢赤酵母等不同宿主，可用于中間品、原液及終產品的HCP定量監測。為保障ELISA法對HCP定量檢測的準確性，需對HCP抗體覆蓋率開展驗證。湖州申科的抗體覆蓋率平臺，采用2D Clean-up試劑盒去除蛋白樣品中的干擾物（如洗滌劑、鹽、脂質、酚類、核酸等離子污染物），同時設置2D質控標準品實施嚴格質控，并以陰性抗體作為對照開展平行試驗，以此提升結果準確度。

總蛋白檢測差異是 HCP 免疫檢測結果不同的原因之一。

湖州申科生物參考USP通則<1132.1>闡述的內容，依托公司深耕生物制品質量控制領域十余年經驗，針對LC-MS檢測HCPs方法進行了評價與優化。同時通過對LC-MS檢測HCPs整體流程建立完整的質控，建立起一套抗干擾能力強、穩定性好、準確度高、結果真實可靠的LC-MS檢測HCPs標準方法。檢測技術平臺分成樣品制備、質譜檢測、數據生信分析及質譜結果方法驗證四部分，已使用LC-MS平臺進行了293T、不同工藝E.coli、CHO、Vero、MDCK、Sf9等不同工程細胞HCPs抗體覆蓋率的檢測分析。

湖州申科開發多種宿主 HCP 檢測試劑盒，提供抗體覆蓋率驗證服務。上海HEK293宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測

湖州申科可根據客戶要求，快速定制符合用戶生產工藝的HCP商業化檢測試劑盒，滿足用戶快速替換的檢測需求。Hi-5宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測橋接驗證

由于 HCPs 屬于復雜的多分析物，為制備覆蓋率盡可能高的抗體（以覆蓋工藝特有的高風險 HCPs），需采用可靠的免疫策略。獲得符合性能要求的抗體后，需借助經過驗證的 2D 或 LC-MS 方法對抗體覆蓋率進行表征，確保抗體可充分覆蓋各實際工藝下產生的 HCPs。在擁有代表性抗原與優良性能抗體的基礎上，開展 ELISA 檢測體系開發，涵蓋原輔料篩選與制備研究、各組分工藝及反應體系研究、穩定性研究等重要內容。檢測體系開發完成后，需依據 ICH 及藥典要求開展分析方法驗證評估，確保體系的線性、范圍、檢測限、定量限、準確度、精密度、專屬性及耐用性均滿足法規要求。

Hi-5宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測橋接驗證

標簽：宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測宿主細胞殘留DNA檢測內毒素檢測熱原檢測支原體檢測

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