上海血液制品熱原檢測結(jié)果判定

來源：發(fā)布時間：2025-10-17

單核細胞系憑借標準化、可控性等優(yōu)勢，有效解決PBMC（外周血單個核細胞）在熱原檢測中的局限。其一，單核細胞系源自永生化細胞株（如 Mono-Mac-6），經(jīng)篩選后細胞特性高度均一，消除供體差異，讓熱原檢測結(jié)果穩(wěn)定性大幅提升。其二，其培養(yǎng)過程可控，培養(yǎng)基配方與環(huán)境（溫度、CO?濃度）可準確調(diào)控，能維持細胞好的活性，避免 PBMC 因分選、凍存導致的活性衰減。其三，對培養(yǎng)環(huán)境波動耐受性更強，可保障細胞遺傳穩(wěn)定且無污染物風險，降低熱原檢測的操作復雜度與誤差率。

熱原檢測MAT零動物消耗，降低檢測成本，提升檢測效率和倫理水平。上海血液制品熱原檢測結(jié)果判定

PBMC（外周血單個核細胞）的供體差異會直接導致熱原檢測結(jié)果的波動，主要體現(xiàn)在 IL-6 釋放水平的不一致。不同供體的 PBMC，其單核細胞比例、TLR 受體表達量、免疫活性狀態(tài)存在差異：有的供體 PBMC 受熱原刺激后， IL-6 釋放量高；有的則極低，甚至無明顯響應。實驗數(shù)據(jù)顯示， PBMC 的標曲各濃度點相對偏差有高達 171.43%的，正是這種差異的體現(xiàn)，導致熱原檢測結(jié)果難以標準化，無法準確判斷供試品熱原是否超標，從而增加了藥品的質(zhì)量控制風險。

醫(yī)療器械熱原檢測方法驗證MAT 熱原檢測能幫助分析和解決生物制品生產(chǎn)中出現(xiàn)的低內(nèi)毒素回收（LER）現(xiàn)象。

PBMC（外周血單個核細胞）用于 MAT 熱原檢測時，存在異質(zhì)性與血源供應兩大關鍵問題。從異質(zhì)性來看，PBMC 含 12% 單核細胞與 88% 淋巴細胞，且來自不同供體，細胞組成、功能狀態(tài)及熱原反應存在明顯差異，導致熱原刺激后 IL-6 釋放量波動大，標準化難度高。血源供應方面，除受獻血者數(shù)量、時間及采集血液政策限制外，EP2.6.30 還要求嚴格檢測乙肝、丙肝等標志物，且采集血液、處理、試劑制備全程需無菌操作，流程環(huán)節(jié)多、復雜度高，遠不及單核細胞系制備簡便，易影響熱原檢測的時效性與穩(wěn)定性。

PyroSHENTEK^®熱原檢測試劑盒依據(jù) ICH Q2 (R2)、《中國藥典》（如通則 9301）及歐洲藥典（EP 2.6.30）要求，完成了線性、范圍、定量限、準確度、精密度、耐用性等全維度性能驗證。線性方面，0.0125-1.0EU/mL范圍內(nèi)擬合良好，R2≥0.98；準確度通過加標回收實驗驗證，不同樣品基質(zhì)（如生物制品、化學制藥原料）的回收率均落在 50%-200% 區(qū)間；精密度表現(xiàn)優(yōu)異，批內(nèi)與批間 CV 均≤15%，且無論是 3 復孔還是 4 復孔檢測均能達標。此外，試劑盒使用中國藥典推薦的 MAT 特定標準品，可直接用于國內(nèi)外申報，契合全球 “3R 原則” 監(jiān)管導向—尤其適配《歐洲藥典》刪除家兔法、《美國藥典》鼓勵 MAT 替代等新法規(guī)趨勢，為企業(yè)應對不同地區(qū)的熱原檢測合規(guī)要求提供有力支持。

生物制品的高蛋白、螯合劑基質(zhì)易對鱟試驗產(chǎn)生抑制，rCR與MAT聯(lián)合策略可消除干擾并控制熱原。

一次合格的 MAT 法熱原檢測，需同時滿足 “合格標曲” 與 “合格樣品檢測值及回收率” 兩大關鍵條件。合格標曲需具備四要素：一是良好線性，采用 4-Parameter Logistic 擬合，R2 需接近 1.0，避免線性不佳導致定量偏差；二是良好信號值，各濃度點 OD 值需呈梯度變化，高濃度點 OD 值需足夠（如上限濃度 OD600 達 1.0 左右），信號過低會影響靈敏度；三是良好 CV，復孔間 CV 需控制在合理范圍（定量限內(nèi)≤25%、定量上下限≤30%），確保重復性；四是良好背景值，陰性對照 OD 值需低于標曲下限濃度點 10%，排除外源污染。合格樣品檢測值則需滿足加標回收率在 50%-200%，例如文檔中某樣品 10 倍稀釋回收率 41.3%（不合格），20 倍 71.3%（接近合格），40 倍 97.7%（合格），需在 MVD 范圍內(nèi)調(diào)整稀釋倍數(shù)，同時樣品熱原濃度需低于規(guī)定限值（CLC），方可判定樣品符合要求。

單核細胞活化試驗（MAT）將熱原檢測從經(jīng)驗性觀察，推進至受體-配體相互作用的分子本質(zhì)。黑龍江熱原檢測商業(yè)化試劑盒

鱟試驗法（LAL）法進行熱原檢測靈敏度高、操作方便，但只針對內(nèi)毒素，易受干擾且有 LER 現(xiàn)象。上海血液制品熱原檢測結(jié)果判定

MAT 法熱原檢測的關鍵機制是 “熱原活化單核細胞 TLR 受體，觸發(fā)炎癥因子分泌”，TLR 受體的全覆蓋是保障檢測無遺漏的關鍵。不同熱原需活化不同 TLR 受體：最常見的內(nèi)毒素（LPS）主要活化 TLR4，而革蘭氏陽性菌的非內(nèi)毒素熱原（如脂磷壁酸）需活化 TLR2/6，真菌多糖活化?TLR2/4，病毒核酸活化 TLR3/7/8 等。因此，MAT 試劑盒配套細胞需具備全覆蓋的 TLR 受體表達—湖州申科生物通過 Western blot 驗證，其 HL-60 細胞系表達 TLR1-TLR9，可響應各類熱原。為進一步驗證覆蓋能力，申科用不同非內(nèi)毒素熱原配體（如脂磷壁酸、酵母多糖）刺激細胞，結(jié)果顯示所有配體均能誘導 IL-6 分泌，且呈良好量效關系，證明試劑盒可檢出各類熱原。若細胞 TLR 受體覆蓋不全（如缺失 TLR2），則無法檢測革蘭氏陽性菌的非內(nèi)毒素熱原，導致漏檢風險，因此 TLR 受體的全覆蓋是 MAT 法熱原檢測的關鍵技術指標之一。

上海血液制品熱原檢測結(jié)果判定

標簽：宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測宿主細胞殘留DNA檢測內(nèi)毒素檢測支原體檢測熱原檢測

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