化學制藥熱原檢測

來源：發布時間：2025-10-21

相較于傳統家兔法，熱原檢測MAT法在動物福利、檢測性能、適用范圍等方面具有明顯優勢。從動物福利看，MAT法使用分離培養的單核細胞系（如湖州申科 HL-60 細胞系），無需動物，完全符合 “減少、替代、優化” 的 3R 原則，規避家兔法的倫理爭議與飼養成本。檢測性能上，家兔法只能定性且靈敏度低（檢測限≥5EU/kg），結果受動物個體差異、環境溫度影響大；MAT 法可定量檢測，標曲線性范圍 0.0125-1.0EU/mL，檢測限（LOD）達 0.0125EU/mL，批間 CV≤25%，重復性更優。適用范圍方面，家兔法不適用于放射性質藥物、基因療法制劑等可能影響動物體溫的產品；MAT法適配疫苗、血制品、抗體藥、化藥等幾乎所有類型樣品，且支持高通量檢測，單塊 96 孔板可同時分析多個樣品，檢測時間從家兔法的3-7天縮短至1.5天，大幅提升效率。

熱原檢測MAT法可在96孔板中批量檢測，單批次實驗1.5天即可放行，家兔法需3-7天。化學制藥熱原檢測

MAT法熱原檢測中，標曲信號值偏低或線性不佳是常見問題，需按細胞、標準品、ELISA 檢測三環節排查解決。細胞相關問題中，細胞復蘇后若未充分混勻導致結團，種板后細胞分布不均，會使局部信號弱，需振蕩細胞懸液后再種板；細胞活性差或處理時間超半小時，會降低炎癥因子分泌，需嚴格按說明書操作并縮短處理時間；孵育未達 37℃、5% CO?條件，細胞活化不足，需確保培養箱參數穩定；細胞懸液若接觸外源熱原，會引發非特異性反應，操作時需遠離熱原污染源。標準品問題方面，配制稀釋錯誤會直接導致濃度不準，需核對稀釋步驟；振蕩時間不足（未按說明書要求）會使內毒素分散不均，需確保振蕩充分且 4 小時內使用；標準品降解會導致效價下降，需按推薦條件保存（如 - 20℃冷凍）。ELISA 檢測環節，孵育時間短或振蕩速度慢會影響抗體結合，可適當延長孵育或提高振蕩速度；TMB 顯色不足（<3 分鐘）會導致信號低，需顯色 3-10 分鐘，待高濃度點 OD600 達 1.0 時加終止液。

上海化學制藥熱原檢測技術升級湖州申科熱原檢測試劑盒中單核細胞系表面有多種Toll樣受體，可響應革蘭氏陽性菌、病毒等熱原。

PyroSHENTEK^®熱原檢測試劑盒突破傳統檢測方法局限，不僅能檢測革蘭氏陰性菌來源的內毒素，還可準確識別革蘭氏陽性菌（脂磷壁酸 LTA）、病毒、真菌等產生的非內毒素熱原（NEP），契合熱原檢測 “全風險覆蓋” 的法規需求。其定量限低至 0.025EU/mL，實驗數據顯示，對 Flagellin、LTA、Resiquimod、Poly-IC 等多種 NEP 均能有效檢出，且加標回收率穩定在 50%-200% 合格范圍（如貝伐珠單抗注射液中 LTA 加標回收率 66.8%、Zysoman 加標回收率 113%）。此外，試劑盒聯合了國內相關機構完成室間驗證，與傳統家兔熱原試驗（RPT）橋接結果高度一致 —— 如人用狂犬病疫苗（Vero 細胞）中 LPS 加標回收率 152.1%、人血白蛋白中 LPS 加標回收率 71.6%，檢測數據科學性符合國際法規要求，助力企業無縫銜接中美歐等地申報標準。

傳統熱原檢測方法的局限性十分明顯：鱟試驗法只能特異性識別細菌內毒素，對非內毒素熱原完全無響應；家兔熱原試驗雖能篩查全類型熱原，但靈敏度低（檢測限≥5EU/kg），無法檢出微量非內毒素熱原，且無法區分熱原類型，難以追溯污染源頭；單核細胞活化反應測定（MAT）的出現有效解決了上述難題，其關鍵優勢在于：基于人源單核細胞的免疫應答機制，可同時識別所有具備生物活性的熱原（包括內毒素與非內毒素），且檢測靈敏度高（對病毒熱原檢測限低至pg級）；檢測周期短（24-48小時），可滿足產品快速放行需求；能通過細胞因子濃度定量評估熱原活性，避免“無活性熱原”的誤判。

家兔法熱原試驗雖能篩查所有類別熱原，卻因周期長、成本高、靈敏度低而逐步被體外方法取代。

湖州申科生物熱原檢測（MAT法）試劑盒在靈敏度、穩定性與適用性上表現突出，關鍵性能參數符合藥典要求：標曲線性范圍 0.0125-1.0EU/mL，相關系數 R2≥0.98，定量限 0.025EU/mL，檢測限（LOD）0.0125EU/mL，批間精密度 CV≤25%，可準確捕捉微量熱原。其優勢在于特定的單核細胞系 —— 與依賴供體血液的 PBMC 細胞不同，申科 MAT 細胞系來源清晰可溯源，無需倫理審批與血站合作，規避供體差異導致的檢測波動。對比同類型產品（如國外廠家 PBMC 細胞），申科細胞系的標曲各濃度點 CV 更低（低至3.6%）、相對偏差更小（ 12.31%），線性 R2 達 1.000，穩定性更優。此外，細胞凍存液組分經優化，復蘇后活率高，無需額外調整細胞狀態即可直接與供試品共孵育，操作便捷；且適配任何具備 450nm 波長的酶標儀，無需專門的設備，降低實驗室投入成本。

研究建立體外熱原檢測替代方法以替代家兔法，符合3R理論，是熱原檢測國際趨勢，受各國藥監機構重視。上海化學制藥熱原檢測技術升級

通過加標回收實驗，熱原檢測MAT法驗證了對LTA、酵母多糖等非內毒素熱原的檢出能力。化學制藥熱原檢測

單核細胞系憑借標準化、可控性等優勢，有效解決PBMC（外周血單個核細胞）在熱原檢測中的局限。其一，單核細胞系源自永生化細胞株（如 Mono-Mac-6），經篩選后細胞特性高度均一，消除供體差異，讓熱原檢測結果穩定性大幅提升。其二，其培養過程可控，培養基配方與環境（溫度、CO?濃度）可準確調控，能維持細胞好的活性，避免 PBMC 因分選、凍存導致的活性衰減。其三，對培養環境波動耐受性更強，可保障細胞遺傳穩定且無污染物風險，降低熱原檢測的操作復雜度與誤差率。

化學制藥熱原檢測

標簽：內毒素檢測支原體檢測宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測宿主細胞殘留DNA檢測熱原檢測

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