MRC-5宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法開發

來源：發布時間：2025-10-22

方法選擇是影響宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測結果的因素之一。酶聯免疫吸附法（ELISA）與液相色譜 - 質譜聯用技術（LC-MS），是當前 HCP 檢測領域的兩類常用方法。據文獻統計，當前在總 HCP 定量檢測中，ELISA 仍為主流技術；而 MS 法可用于特定蛋白（如高風險蛋白）的鑒定與定量，已成為重要的互補手段。此外，檢測過程中所用試劑與耗材的質量，會直接影響檢測結果的準確性。質量不達標的試劑，可能引發檢測結果出現假陽性或假陰性。舉例來說，若抗體的特異性與親和力不足，可能在 ELISA 檢測中產生交叉反應；若抗原代表性不足或抗體覆蓋率偏低，則可能造成漏檢；而稀釋液抗干擾能力較弱時，也會對檢測準確性產生影響。相關案例研究顯示，采用定制化方法替代原有商業化試劑盒后，抗原代表性與抗體覆蓋率明顯提升，HCP 檢測值也呈現整體升高的趨勢。

湖州申科建立宿主特異 HCP 數據庫，支持高風險蛋白準確鑒定與分析。MRC-5宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法開發

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宿主細胞蛋白（HCP）殘留監測是生物藥物生產中的關鍵質量屬性（Critical Quality Attribute, CQA），需在藥物開發與生產階段對 HCP 的存在實施嚴格監控、管理及記錄。隨著生產流程推進，生物制品目標蛋白純度逐步提升，HCP 含量則相應持續下降，這導致對單抗、融合蛋白等富含目標蛋白的下游工藝樣品進行 HCP 分析監測時，難度明顯增加。在此背景下，高效的 HCP 富集材料與技術顯得尤為重要。SHENTEK^®AbunProteoX 是基于磁珠構建的親和配體，能高效識別并結合目標蛋白；借助磁性納米顆粒的獨特特性，它可快速高效捕獲 HCP，大幅提升檢測靈敏度。此外，該親和配體的普遍適用性，讓 AbunProteoX 處理多種生物樣本時表現優異，可確保樣品中存在高濃度目標蛋白時，對低濃度 HCP 的質譜、電泳等檢測分析具備準確性與可靠性。

MRC-5宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法開發HCP 檢測試劑盒開發要兼顧法規合規、物料充足穩定、團隊專業響應與案例積累，形成系統性保障能力。

宿主細胞蛋白殘留檢測中，抗體覆蓋率評估實驗的操作難度較高，需在實驗方法建立階段對關鍵步驟開展充分驗證，以確保實驗方法具備穩健性。湖州申科研發的磁珠捕獲式 IMBS 技術（immunomagnetic beads separation，免疫磁珠分離），在開發過程中已對關鍵步驟進行充分驗證，相關驗證結果已通過專業評審，具體驗證內容（部分）如下：① 方法優化：圍繞磁珠與抗體的偶聯比例、洗滌液體積、洗滌次數、洗脫次數等關鍵參數開展優化驗證，確保方法穩健性；② 過程質控：二維電泳存在實驗步驟繁瑣、時間跨度大、中間環節難把控等問題，因此在等電聚焦實驗環節引入熒光標記多肽，可快速判定等電聚焦效果；同時在 SDS-PAGE 電泳兩側增設 40 ng 銀染質控樣品，用于控制銀染顯色過程；③ 方法重復性：針對 2D 分析與 LC-MS 分析開展重復性驗證，其中 2D 分析方法的重復性可達 80% 以上，LC-MS 分析方法的重復性可達 90% 以上；④ 上樣量優化：針對 2D 分析與 LC-MS 分析實施上樣量驗證，規避上樣量差異對檢測結果的影響；⑤ 假陽性排查：排查樣品與陰性抗體間是否存在非特異性結合，確認 IMBS 實驗設定的步驟與參數是否會導致假陽性結果。

昆蟲細胞桿狀病毒表達系統（IC-BEVS）是一種真核表達系統，以桿狀病毒為外源基因載體，以昆蟲細胞為宿主實現外源蛋白的生產。該系統具備便于規模化生產、培養成本低、生物安全性高等優勢，近年已逐步應用于重組蛋白、rAAV 載體、亞單位疫苗（如病毒樣顆粒（VLP）疫苗）等產品的生產，在生物制品重組蛋白表達領域已得到廣泛應用。Sf9 細胞系源自草地夜蛾細胞系（Spodoptera frugiperda cell line，簡稱 Sf），是當前較為常用的昆蟲細胞系之一。SHENTEK^® Sf9 HCP 殘留蛋白檢測試劑盒（一步酶聯免疫吸附法），可對采用 Sf9 細胞系生產的生物制品中宿主細胞蛋白（HCP）殘留進行定量檢測。該試劑盒的抗體覆蓋率分別為 70.4%-96.0%（采用 IMBS-2D 法）和 91.2%（采用 IMBS-MS 法，Unique Peptide ≥2）。

宿主檢測方法替換需橋接驗證，確保新舊方法結果一致性與可比性。

大腸埃希氏菌（Escherichiacoli，簡稱E.coli，又稱大腸桿菌）作為模式微生物，在生命科學研究領域應用較多。伴隨基因治療產業的快速發展，它還成為質粒DNA（pDNA）生產的主要宿主菌。質粒樣品常規提取工藝中，常使用強堿性溶液進行細胞裂解與蛋白質變性，這種處理使其中的宿主細胞蛋白（HCPs）與傳統物理破碎法得到的HCPs差異明顯，進而導致采用免疫學原理的檢測方法時，殘留檢測結果偏差較大。湖州申科生物的E.coli克隆菌堿裂HCP殘留檢測試劑盒，適用于大腸埃希氏菌（即大腸桿菌）克隆菌株的HCPs檢測，涵蓋DH5α、Top10、JM109等常見菌株。該試劑盒的抗體制備過程中，采用堿裂工藝制備的HCPs免疫動物，得到專屬抗體，可用于經堿液裂解工藝處理后的宿主細胞蛋白（HCPs）定量檢測。

篩選HCP試劑盒需考慮線性稀釋（一步法尤重）抗基質干擾穩定檢測值、批間一致性、工藝匹配性等因素。MRC-5宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法開發

湖州申科生物目前已承接常見宿主類型的HCP定制化開發，如期交付率達到100%。MRC-5宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法開發

MDCK（Madin-DarbyCanineKidney，馬丁達比犬腎上皮細胞）細胞系是源于犬腎的持續性細胞系，廣泛應用于流感病毒增殖純化、流感疫苗生產等過程，作為細胞基質使用。憑借高病毒產量與滴度、無適應性突變、易馴化等優勢，MDCK細胞已成為業界公認的流感病毒毒株分離及流感疫苗生產適配細胞系。和其他產品雜質類似，MDCK宿主殘留蛋白（HCP）可能對生物制品的安全性與有效性產生不良影響，因此在生產監測、產品放行等環節，需對其開展定量研究并實施嚴格控制。SHENTEK^®MDCK HCP殘留檢測試劑盒（一步酶聯免疫吸附法），是湖州申科生物自主研發、擁有完全自主知識產權且關鍵試劑實現全國產化的MDCK HCP通用檢測試劑盒。該試劑盒適用于基于MDCK細胞基質的病毒增殖純化、疫苗生產等過程，可對其中的MDCK宿主殘留蛋白進行定量檢測，且操作步驟簡便快捷、檢測專一性高、性能穩定可靠。

MRC-5宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法開發

標簽：宿主細胞殘留DNA檢測宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測熱原檢測支原體檢測內毒素檢測

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