MAT法熱原檢測(cè)特定標(biāo)準(zhǔn)品與傳統(tǒng)細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品存在本質(zhì)差異，需明確區(qū)分以保障檢測(cè)準(zhǔn)確性。MAT 特定標(biāo)準(zhǔn)品為大腸桿菌（E.coli 0113:H10:K）菌株制備，經(jīng)全國(guó) 5 家藥品檢驗(yàn)所（含中檢院）用凝膠法、動(dòng)態(tài)濁度法及動(dòng)態(tài)顯色法協(xié)作標(biāo)定，溯源至國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品，可同時(shí)檢測(cè)內(nèi)毒素與非內(nèi)毒素?zé)嵩欢鴤鹘y(tǒng)細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（如 9000EU 規(guī)格）源自大腸桿菌（E.coli O111:B4），只適用于內(nèi)毒素檢測(cè)，無(wú)法識(shí)別非內(nèi)毒素?zé)嵩ｊP(guān)鍵驗(yàn)證數(shù)據(jù)顯示，用 MAT法檢測(cè) 9000EU 內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)，加標(biāo)回收率不在 50%-200% 的合格范圍，因此不能替代 MAT 特定標(biāo)準(zhǔn)品。值得注意的是，盡管 MAT 試劑盒用內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)曲，但經(jīng)驗(yàn)證其可識(shí)別非內(nèi)毒素?zé)嵩魳悠分写嬖诜莾?nèi)毒素?zé)嵩ㄈ绺锾m氏陽(yáng)性菌的脂磷壁酸），會(huì)觸發(fā)細(xì)胞陽(yáng)性反應(yīng)，有效避免漏檢，這也是 MAT 法在熱原防控中優(yōu)于單一內(nèi)毒素檢測(cè)的關(guān)鍵優(yōu)勢(shì)。

PyroSHENTEK^®熱原檢測(cè)試劑盒（MAT法）已完成 25 個(gè)品種樣品的檢測(cè)驗(yàn)證，覆蓋單抗類(lèi)、疫苗類(lèi)、基因工程類(lèi)、血液制品類(lèi)、生化藥品類(lèi)與注射液，結(jié)果顯示其適配性范圍廣但需關(guān)注部分樣品的干擾。疫苗類(lèi)（如麻腮風(fēng)聯(lián)合減毒活疫苗、人用狂犬病疫苗）、基因工程類(lèi)（重組人促紅素、干擾素 α-2b）、血液制品類(lèi)（人血白蛋白、凝血因子 Ⅷ）與注射液（生理鹽水、琥珀酰明膠）的加標(biāo)回收率均在 50%-200% 范圍內(nèi)，無(wú)明顯干擾，檢測(cè)結(jié)果可靠。單抗類(lèi)（如貝伐珠單抗、阿達(dá)木單抗）、中藥注射液等樣品雖存在不同程度的抑制作用，需通過(guò)提高稀釋倍數(shù)（如稀釋至 MVD 上限）、超聲處理或添加中和劑消除抑制，優(yōu)化后回收率均可達(dá)標(biāo)。此外，MAT 法可有效檢測(cè)非內(nèi)毒素?zé)嵩鐚?duì)貝伐珠單抗注射液中添加的酵母多糖（Zymosan，200μg/mL）、脂磷壁酸（LTA，10μg/mL），回收率分別達(dá) 113%、66.8%，證明其可解決傳統(tǒng)鱟試劑漏檢非內(nèi)毒素?zé)嵩膯?wèn)題，尤其適用于高風(fēng)險(xiǎn)生物制品的熱原防控。

MAT 法熱原檢測(cè)標(biāo)曲采用非倍比稀釋?zhuān)?1-0.5-0.25 的倍比稀釋?zhuān)?span>主要優(yōu)勢(shì)在于提升標(biāo)曲準(zhǔn)確性與適用性，避免稀釋誤差影響。一是可密集覆蓋關(guān)鍵濃度區(qū)間：熱原檢測(cè)的重點(diǎn)關(guān)注區(qū)為低濃度拐點(diǎn)（如 0.0125-0.1EU/mL）與高濃度平臺(tái)區(qū)（如 0.5-1EU/mL），非倍比稀釋可在這些區(qū)間設(shè)置更多濃度點(diǎn)（如 0.0125、0.025、0.05、0.1、0.25、0.5、1EU/mL），提升曲線擬合精度，而倍比稀釋低濃度點(diǎn)少，易導(dǎo)致低濃度熱原定量不準(zhǔn)。二是降低稀釋誤差累積：倍比稀釋需連續(xù)稀釋?zhuān)ㄈ?1EU/mL→0.5EU/mL→0.25EU/mL），每一步誤差會(huì)累積，導(dǎo)致低濃度點(diǎn)實(shí)際濃度偏離理論值；非倍比稀釋通過(guò)單獨(dú)配制每個(gè)濃度點(diǎn)（如直接用標(biāo)準(zhǔn)品配制 0.025EU/mL），避免誤差累積，提升標(biāo)曲可靠性。三是適配不同樣品濃度：非倍比稀釋可根據(jù)樣品預(yù)期濃度調(diào)整標(biāo)曲范圍，如樣品預(yù)期濃度 0.05EU/mL，可增加 0.025、0.05、0.1EU/mL 點(diǎn)，確保樣品濃度落在標(biāo)曲線性區(qū)，而倍比稀釋范圍固定，靈活性差。這些優(yōu)勢(shì)使非倍比稀釋成為 MAT 法標(biāo)曲配制的優(yōu)先選擇方式。

MAT 法熱原檢測(cè)的穩(wěn)定性需從細(xì)胞、試劑、操作、樣品四維度嚴(yán)格把控。細(xì)胞層面，細(xì)胞活性與純度直接決定熱原響應(yīng)能力，活性不足會(huì)減少炎癥因子分泌，純度低則引入雜細(xì)胞干擾；細(xì)胞批次間一致性也關(guān)鍵，TLR 受體表達(dá)、倍增時(shí)間差異會(huì)導(dǎo)致結(jié)果波動(dòng)。試劑與耗材方面，標(biāo)準(zhǔn)品效價(jià)需溯源國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，避免降解影響標(biāo)曲；試劑盒中細(xì)胞因子需質(zhì)控，防止外源熱原污染；培養(yǎng)液、緩沖液及無(wú)熱原耗材（吸頭、西林瓶）若熱原控制不當(dāng)，易引發(fā)假陽(yáng)性。操作上，加樣手法要統(tǒng)一（如 8 通道移液器液面一致），孵育需 37℃、5% CO?穩(wěn)定環(huán)境，試劑配制濃度準(zhǔn)確，設(shè)備（酶標(biāo)儀、洗板機(jī)）定期校準(zhǔn)，操作偏差會(huì)直接導(dǎo)致異常。樣品層面，自身干擾物質(zhì)（消除炎癥成分、高鹽）、pH 偏離 6-8 或微生物污染，會(huì)抑制細(xì)胞活化或引入外源熱原，需針對(duì)性預(yù)處理。

基于單核細(xì)胞系的穩(wěn)定性，MAT 熱原檢測(cè)可將復(fù)孔數(shù)從藥典要求的≥4 降至≥3。PyroSHENTEK®熱原檢測(cè)試劑盒數(shù)據(jù)顯示，單核細(xì)胞系標(biāo)曲的 4 復(fù)孔與 3 復(fù)孔，各濃度點(diǎn)（0.0125-1.0EU/mL）的準(zhǔn)確度（相對(duì)偏差）與精密度均在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)，無(wú)明顯差異。這一調(diào)整的主要依據(jù)是單核細(xì)胞系消除了 PBMC 的異質(zhì)性，無(wú)需依賴(lài)多復(fù)孔抵消波動(dòng)，既能滿足熱原檢測(cè)的穩(wěn)定性與統(tǒng)計(jì)學(xué)合理性要求，又能減少試劑與耗材消耗，降低檢測(cè)成本，同時(shí)提升實(shí)驗(yàn)效率。因此樣品預(yù)測(cè)試時(shí)可選擇3復(fù)孔進(jìn)行初步檢測(cè)，產(chǎn)品放行還需按照藥典要求進(jìn)行4復(fù)孔測(cè)試。