北京熱原檢測MAT法

來源：發布時間：2025-11-12

PyroSHENTEK^®熱原檢測試劑盒以 “簡化流程、提升效率” 為設計理念，采用即用型細胞，凍存細胞無需離心復蘇培養，復融后可直接與供試品混合共孵育，大幅節省傳統細胞預處理（如調整細胞狀態、鋪板培養）的時間成本。實驗流程清晰可控：只需按要求制備待測供試品與內毒素工作標準品，各取對應體積加入細胞懸液（每孔加樣量明確），經 37℃、5% CO?孵育 24 小時后，離心收集上清并通過 ELISA 法檢測 IL-6 含量，全程可在 24 小時內獲得穩定可靠的檢測結果。這種便捷性尤其適配實驗室高通量檢測需求，減少人員操作步驟的同時，降低了因復雜操作引入的誤差風險，兼顧效率與準確性。

細胞因子IL-6因穩定性高、半衰期長，被選為熱原檢測MAT法關鍵定量指標，優于TNF-α與IL-1β。北京熱原檢測MAT法

相較于傳統家兔法，熱原檢測MAT法在動物福利、檢測性能、適用范圍等方面具有明顯優勢。從動物福利看，MAT法使用分離培養的單核細胞系（如湖州申科 HL-60 細胞系），無需動物，完全符合 “減少、替代、優化” 的 3R 原則，規避家兔法的倫理爭議與飼養成本。檢測性能上，家兔法只能定性且靈敏度低（檢測限≥5EU/kg），結果受動物個體差異、環境溫度影響大；MAT 法可定量檢測，標曲線性范圍 0.0125-1.0EU/mL，檢測限（LOD）達 0.0125EU/mL，批間 CV≤25%，重復性更優。適用范圍方面，家兔法不適用于放射性質藥物、基因療法制劑等可能影響動物體溫的產品；MAT法適配疫苗、血制品、抗體藥、化藥等幾乎所有類型樣品，且支持高通量檢測，單塊 96 孔板可同時分析多個樣品，檢測時間從家兔法的3-7天縮短至1.5天，大幅提升效率。

湖南熱原檢測商業化試劑盒一旦熱原涌入人體循環系統，致熱因子直抵下丘腦體溫中樞，導致調定點上移、產熱升散熱降，體溫隨之飆升。

MAT 法熱原檢測背景值偏高會干擾結果判讀，需從試劑、操作兩方面解決。試劑相關問題中，非特異性活化（如試劑含微量熱原）會導致細胞異常分泌 IL-6，需選用低內毒素的試劑與耗材；檢測試劑添加過多（如抗體濃度過高）會增加非特異性結合，需按說明書稀釋試劑或降低推薦濃度。操作環節問題更多見：孔洗滌不充分會殘留未結合抗體與酶，需按方案完成規定洗滌次數（如 3-5 次），確保洗滌液充分浸潤孔底；洗滌緩沖液污染（如滋生微生物）會引入外源信號，需現配現用緩沖液；加終止液后讀板延遲（超 10 分鐘），會因黃色產物降解導致背景虛高，需加終止液后立即讀板；底物孵育時見光會引發非特異性顯色，需在避光環境下進行 TMB 孵育；孔板底部臟（如殘留指紋、液體痕跡）會影響光吸收，需用無塵紙清潔孔板底部后再讀板。通過以上措施，可有效降低背景值，確保檢測信號的真實性，避免因背景干擾導致熱原濃度誤判。

生物制品（如單克隆抗體、重組蛋白、細胞因子）因基質成分復雜（含高濃度蛋白質、螯合劑、表面活性劑、緩沖鹽等），在熱原檢測過程中易出現“反應抑制”或“非特異性增強”現象，嚴重影響檢測結果準確性。選擇抗干擾能力更強的檢測方法至關重要，重組級聯試劑（rCR）因采用完整級聯反應路徑，抗干擾性優于天然 LAL；單核細胞活化反應測定（MAT）對復雜基質耐受性更高，通過適當稀釋即可消除多數干擾，因此生物制品熱原檢測常采用 “rCR 法（內毒素定量）+ MAT 法（全熱原篩查）” 的聯合方案，既保證內毒素檢測的準確性，又防控非內毒素熱原風險。

熱原檢測實驗中，標準化培養基與恒定環境讓單核細胞系活性穩定，避免PBMC凍存后的功能衰減。

在單核細胞活化試驗（MAT）的熱原檢測中，IL-6 被確定為關鍵檢測指標，而非 IL-1β 或 TNF-α，主要源于其在穩定性、生物學關聯性及商業化應用上的優勢。從穩定性來看，IL-6 在體外培養環境中受個體免疫狀態影響較小，半衰期更長，實驗重復性更優，且檢測靈敏度高，能準確定量熱原污染水平；而 TNF-α 和 IL-1β 產生時間短、表達量低，還易被蛋白酶降解，導致檢測信號波動大，難以標準化。從生物學特性而言，IL-6 是先天免疫反應的炎癥介質，可通過活化 JAK-STAT 和 NF-κB 通路驅動急性期反應，如誘導大腦產生前列腺素 E2（PGE2）觸發發熱，與熱原的致熱機制直接關聯，是公認的發熱標志物。同時，MAT 法熱原檢測會輔以 IL-1β 和 TNF-α 監測 ——IL-1β 反映單核細胞活化程度，TNF-α 提示炎癥放大效應，形成多因子協同體系。此外，IL-6 的 ELISA 試劑盒市場成熟度高、跨平臺兼容性強，而 IL-1β 和 TNF-α 的檢測方法在靈敏度和標準化上仍有局限，進一步奠定了 IL-6 的重要地位。

通過加標回收實驗，熱原檢測MAT法驗證了對LTA、酵母多糖等非內毒素熱原的檢出能力。北京合規性熱原檢測

無論是注射劑、生物制品，還是醫療器械的接觸材料，都能在我們的熱原檢測下，得到準確的“安全認證”。北京熱原檢測MAT法

在 MAT 法熱原檢測中，PBMC（外周血單核細胞）與單核細胞系各有優劣，單核細胞系更適合標準化檢測。PBMC 的優勢在于免疫細胞成分豐富（含單核細胞、淋巴細胞等），對熱原反應敏感，靈敏度相對較高；但局限同樣明顯 ——PBMC 需從不同供體獲取，供體免疫狀態差異會導致檢測結果不穩定，且無法長期保存，難以建立標準化方法學。單核細胞系（如 HL-60、MM6、THP1）則克服了 PBMC 的局限：細胞來源穩定（可批量培養），TLR 受體表達覆蓋主要亞型（如 HL-60 表達 TLR1-TLR9），對熱原反應重復性好，更適合商業化試劑盒與法規檢測。不同單核細胞系性能也有差異：MM6/IL-6 法檢測限約 0.05EU/mL，THP1/TNF-α 法因 TNF-α 為一級免疫效應物檢測限更低，但 TNF-α 穩定性差；HL-60/IL-6 法檢測限與穩定性均優于前兩者，成為主流選擇。湖州申科生物MAT試劑盒選用 HL-60 細胞系，正是基于其優異的穩定性與熱原響應適配多場景，確保不同批次檢測結果一致。

北京熱原檢測MAT法

標簽：熱原檢測支原體檢測宿主細胞殘留DNA檢測內毒素檢測宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測

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