福建復(fù)雜基質(zhì)支原體檢測可比性驗證
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發(fā)布時間：2025-11-19
檢測限驗證是支原體 NAT 方法（核酸擴(kuò)增法）合規(guī)性的關(guān)鍵要求，法規(guī)明確界定需為每種目標(biāo)支原體確定陽性檢測臨界值。驗證流程需滿足嚴(yán)格的實驗設(shè)計：每種支原體至少進(jìn)行三次單獨的 10 倍梯度稀釋，每次稀釋后需制備平行管檢測，再確保各稀釋濃度獲得 24 個檢測結(jié)果。陽性臨界值的判定標(biāo)準(zhǔn)為，該濃度下至少 95% 的試驗運行能得到陽性結(jié)果，即 24 個樣品中需至少出現(xiàn) 23 個有效陽性結(jié)果。這一嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計旨在確保 NAT 檢測方法在實際應(yīng)用中，能夠穩(wěn)定檢出低濃度支原體污染，避免因檢測靈敏度不足導(dǎo)致的安全風(fēng)險，為生物制品質(zhì)量控制提供可靠保障。
復(fù)雜樣品在進(jìn)行支原體檢測時，可適當(dāng)稀釋樣本或增加蛋白酶 K 用量，消除基質(zhì)干擾。福建復(fù)雜基質(zhì)支原體檢測可比性驗證
支原體 NAT 檢測的準(zhǔn)確性與可靠性受多重因素綜合影響，需從人員、方法、設(shè)備、試劑耗材、實驗室環(huán)境五方面嚴(yán)格把控。人員需接受專業(yè)培訓(xùn)，熟練掌握 PCR 技術(shù)理論與實操流程，積累足夠經(jīng)驗并具備責(zé)任心，確保操作規(guī)范性。方法建立需遵循合理流程并完成充分驗證，避免因方法缺陷導(dǎo)致結(jié)果偏差。設(shè)備方面，PCR 儀與前處理設(shè)備的性能、精度、穩(wěn)定性及定期校準(zhǔn)至關(guān)重要，直接影響檢測數(shù)據(jù)的重復(fù)性。試劑耗材需滿足要求：前處理試劑能應(yīng)對復(fù)雜樣本基質(zhì)、耐受常見干擾，檢測試劑經(jīng)性能驗證且批間穩(wěn)定性良好，同時需選用質(zhì)量合格的耗材。實驗室需合理布局，建立完善的管理規(guī)范與污染防控措施，為檢測提供潔凈、可控的環(huán)境，避免外部因素干擾。
山東細(xì)胞療法產(chǎn)品支原體檢測技術(shù)服務(wù)湖州申科已為多家頭部企業(yè)提供支原體檢測方案，支持 BLA/NDA 申報。
湖州申科構(gòu)建了覆蓋全領(lǐng)域、全場景的支原體檢測一站式合規(guī)解決方案。產(chǎn)品矩陣豐富，包括支原體 DNA 提取純化試劑盒（2G）、檢測試劑盒（2G，PCR - 熒光探針法）、DNA 校準(zhǔn)品、一體化檢測卡盒、外源因子全自動核酸分析系統(tǒng)，以及 10 余種支原體驗證菌株（已上市豬鼻、肺炎、口腔支原體等，即將上市發(fā)酵、精氨酸支原體等）。方案具備極強的場景適配性，可應(yīng)對 5% 人白、高濃度細(xì)胞等復(fù)雜基質(zhì)樣品，支持從起始材料到終產(chǎn)品的全流程檢測，滿足細(xì)胞療法、抗體、疫苗、CRO/CDMO 等不同領(lǐng)域的檢測需求。服務(wù)層面，提供從方法學(xué)建立、樣品檢測、適用性驗證、傳統(tǒng)法與 qPCR 法比對到特殊菌株定制的全流程技術(shù)支持，配合企業(yè)完成監(jiān)管機(jī)構(gòu)現(xiàn)場審計，滿足企業(yè)從 IND 到 BLA/NDA 的申報需求，實現(xiàn) “極簡操作、一步加樣、避免污染、全量檢測” 的價值。
為解決傳統(tǒng)方法的局限，各國藥典紛紛認(rèn)可支原體核酸檢測（NAT）法作為替代方案。EP 2.6.7、USP <77>、JP <G3-14-170>均明確了 NAT 法的應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)，《中國藥典》3301 也規(guī)定 “可采用經(jīng)國家藥品檢定機(jī)構(gòu)認(rèn)可的其他方法”，并明確 NAT 法替代培養(yǎng)法時檢測限需達(dá) 10 CFU/mL，替代指示細(xì)胞培養(yǎng)法時需達(dá) 100 CFU/mL。NAT 法憑借檢測速度快、特異性強的優(yōu)勢，成為新型生物制品支原體檢測的理想選擇，且法規(guī)明確只要通過相關(guān)驗證，即可正式替代傳統(tǒng)方法，為企業(yè)提供了合規(guī)且高效的檢測路徑。
支原體檢測過程中，需嚴(yán)格遵循 “先陰后陽” 操作原則，避免交叉污染。
全球主流藥典對支原體 NAT 檢測的標(biāo)準(zhǔn)菌株選擇形成了明確共識，中國、歐洲、美國、日本四國藥典一致推薦優(yōu)先使用豬鼻支原體、口腔支原體、肺炎支原體三種菌株，用于 NAT 方法檢測限的驗證，這一選擇基于支原體的污染發(fā)生頻率與進(jìn)化關(guān)系。不同地區(qū)法規(guī)的驗證范圍略有差異：EP、USP、ChP 要求覆蓋特異性、檢測限、耐受性，WHO 還需包含半定量與定性實驗；部分地區(qū)如歐洲藥典額外納入萊氏無膽甾原體、滑液支原體等菌株，針對昆蟲和植物來源物料生產(chǎn)場景則需關(guān)注螺原體等特殊菌株。合規(guī)的標(biāo)準(zhǔn)菌株是 NAT 檢測方法驗證的前提，其溯源性與授權(quán)資質(zhì)直接影響檢測結(jié)果的認(rèn)可度。
USP<77> 要求支原體檢測NAT法專屬性需經(jīng)生信分析與實際樣品驗證，排除近緣菌交叉反應(yīng)。福建復(fù)雜基質(zhì)支原體檢測可比性驗證支原體檢測 NAT 法驗證報告需包含檢測限、專屬性、耐用性等完整數(shù)據(jù)。福建復(fù)雜基質(zhì)支原體檢測可比性驗證
MycoSHENTEK® 支原體 DNA 檢測試劑盒參照 EP 2.6.7 和 JP XVII 支原體檢測相關(guān)要求完成全面性能驗證，是經(jīng)過三方室間驗證、性能完全符合藥典標(biāo)準(zhǔn)的支原體檢測試劑盒。該試劑盒檢測靈敏度高達(dá) 10CFU/mL，可同時替代傳統(tǒng)培養(yǎng)法與指示細(xì)胞培養(yǎng)法，大幅縮短檢測周期。經(jīng)實驗驗證，其對雞滑液支原體、豬鼻支原體、萊氏無膽甾支原體等多種常見污染菌株的檢出率均達(dá)到 100%（24/24），即使對口腔支原體等低濃度菌株，檢出率也滿足 95% 以上。憑借覆蓋范圍廣、靈敏度高、性能穩(wěn)定、合規(guī)性強的關(guān)鍵優(yōu)勢，該試劑盒為生物制品企業(yè)提供了高效、可靠的支原體檢測工具，助力企業(yè)滿足全球監(jiān)管要求并保障產(chǎn)品質(zhì)量。
福建復(fù)雜基質(zhì)支原體檢測可比性驗證
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