原料藥熱原檢測單核細(xì)胞活化反應(yīng)測定法

來源：發(fā)布時(shí)間：2025-10-23

MAT法熱原檢測特定標(biāo)準(zhǔn)品與傳統(tǒng)細(xì)菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品存在本質(zhì)差異，需明確區(qū)分以保障檢測準(zhǔn)確性。MAT 特定標(biāo)準(zhǔn)品為大腸桿菌（E.coli 0113:H10:K）菌株制備，經(jīng)全國 5 家藥品檢驗(yàn)所（含中檢院）用凝膠法、動態(tài)濁度法及動態(tài)顯色法協(xié)作標(biāo)定，溯源至國際標(biāo)準(zhǔn)品，可同時(shí)檢測內(nèi)毒素與非內(nèi)毒素?zé)嵩欢鴤鹘y(tǒng)細(xì)菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品（如 9000EU 規(guī)格）源自大腸桿菌（E.coli O111:B4），只適用于內(nèi)毒素檢測，無法識別非內(nèi)毒素?zé)嵩ｊP(guān)鍵驗(yàn)證數(shù)據(jù)顯示，用 MAT法檢測 9000EU 內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)，加標(biāo)回收率不在 50%-200% 的合格范圍，因此不能替代 MAT 特定標(biāo)準(zhǔn)品。值得注意的是，盡管 MAT 試劑盒用內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)曲，但經(jīng)驗(yàn)證其可識別非內(nèi)毒素?zé)嵩魳悠分写嬖诜莾?nèi)毒素?zé)嵩ㄈ绺锾m氏陽性菌的脂磷壁酸），會觸發(fā)細(xì)胞陽性反應(yīng)，有效避免漏檢，這也是 MAT 法在熱原防控中優(yōu)于單一內(nèi)毒素檢測的關(guān)鍵優(yōu)勢。

憑借深厚的專業(yè)積累，湖州申科生物為行業(yè)提供可靠的熱原檢測解決方案。原料藥熱原檢測單核細(xì)胞活化反應(yīng)測定法

傳統(tǒng)熱原檢測方法的局限性十分明顯：鱟試驗(yàn)法只能特異性識別細(xì)菌內(nèi)毒素，對非內(nèi)毒素?zé)嵩耆珶o響應(yīng)；家兔熱原試驗(yàn)雖能篩查全類型熱原，但靈敏度低（檢測限≥5EU/kg），無法檢出微量非內(nèi)毒素?zé)嵩覠o法區(qū)分熱原類型，難以追溯污染源頭；單核細(xì)胞活化反應(yīng)測定（MAT）的出現(xiàn)有效解決了上述難題，其關(guān)鍵優(yōu)勢在于：基于人源單核細(xì)胞的免疫應(yīng)答機(jī)制，可同時(shí)識別所有具備生物活性的熱原（包括內(nèi)毒素與非內(nèi)毒素），且檢測靈敏度高（對病毒熱原檢測限低至pg級）；檢測周期短（24-48小時(shí)），可滿足產(chǎn)品快速放行需求；能通過細(xì)胞因子濃度定量評估熱原活性，避免“無活性熱原”的誤判。

北京血液制品熱原檢測家兔法替代方案在藥品安全語境中，熱原特指細(xì)菌性熱原—微生物代謝產(chǎn)物、細(xì)菌尸體及內(nèi)毒素的統(tǒng)稱。

PyroSHENTEK^®熱原檢測試劑盒以 “簡化流程、提升效率” 為設(shè)計(jì)理念，采用即用型細(xì)胞，凍存細(xì)胞無需離心復(fù)蘇培養(yǎng)，復(fù)融后可直接與供試品混合共孵育，大幅節(jié)省傳統(tǒng)細(xì)胞預(yù)處理（如調(diào)整細(xì)胞狀態(tài)、鋪板培養(yǎng)）的時(shí)間成本。實(shí)驗(yàn)流程清晰可控：只需按要求制備待測供試品與內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品，各取對應(yīng)體積加入細(xì)胞懸液（每孔加樣量明確），經(jīng) 37℃、5% CO?孵育 24 小時(shí)后，離心收集上清并通過 ELISA 法檢測 IL-6 含量，全程可在 24 小時(shí)內(nèi)獲得穩(wěn)定可靠的檢測結(jié)果。這種便捷性尤其適配實(shí)驗(yàn)室高通量檢測需求，減少人員操作步驟的同時(shí)，降低了因復(fù)雜操作引入的誤差風(fēng)險(xiǎn)，兼顧效率與準(zhǔn)確性。

湖州申科生物熱原檢測（MAT法）試劑盒在靈敏度、穩(wěn)定性與適用性上表現(xiàn)突出，關(guān)鍵性能參數(shù)符合藥典要求：標(biāo)曲線性范圍 0.0125-1.0EU/mL，相關(guān)系數(shù) R2≥0.98，定量限 0.025EU/mL，檢測限（LOD）0.0125EU/mL，批間精密度 CV≤25%，可準(zhǔn)確捕捉微量熱原。其優(yōu)勢在于特定的單核細(xì)胞系 —— 與依賴供體血液的 PBMC 細(xì)胞不同，申科 MAT 細(xì)胞系來源清晰可溯源，無需倫理審批與血站合作，規(guī)避供體差異導(dǎo)致的檢測波動。對比同類型產(chǎn)品（如國外廠家 PBMC 細(xì)胞），申科細(xì)胞系的標(biāo)曲各濃度點(diǎn) CV 更低（低至3.6%）、相對偏差更小（ 12.31%），線性 R2 達(dá) 1.000，穩(wěn)定性更優(yōu)。此外，細(xì)胞凍存液組分經(jīng)優(yōu)化，復(fù)蘇后活率高，無需額外調(diào)整細(xì)胞狀態(tài)即可直接與供試品共孵育，操作便捷；且適配任何具備 450nm 波長的酶標(biāo)儀，無需專門的設(shè)備，降低實(shí)驗(yàn)室投入成本。

單核細(xì)胞活化反應(yīng)試驗(yàn)（MAT）利用人源細(xì)胞釋放IL-6等因子，可同時(shí)檢出病毒、真菌等非內(nèi)毒素?zé)嵩?/p>

基于單核細(xì)胞系的穩(wěn)定性，MAT 熱原檢測可將復(fù)孔數(shù)從藥典要求的≥4 降至≥3。PyroSHENTEK®熱原檢測試劑盒數(shù)據(jù)顯示，單核細(xì)胞系標(biāo)曲的 4 復(fù)孔與 3 復(fù)孔，各濃度點(diǎn)（0.0125-1.0EU/mL）的準(zhǔn)確度（相對偏差）與精密度均在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)，無明顯差異。這一調(diào)整的主要依據(jù)是單核細(xì)胞系消除了 PBMC 的異質(zhì)性，無需依賴多復(fù)孔抵消波動，既能滿足熱原檢測的穩(wěn)定性與統(tǒng)計(jì)學(xué)合理性要求，又能減少試劑與耗材消耗，降低檢測成本，同時(shí)提升實(shí)驗(yàn)效率。因此樣品預(yù)測試時(shí)可選擇3復(fù)孔進(jìn)行初步檢測，產(chǎn)品放行還需按照藥典要求進(jìn)行4復(fù)孔測試。

MAT 熱原檢測中細(xì)胞活性影響巨大，活率需達(dá)一定標(biāo)準(zhǔn)保證檢測效果。北京血液制品熱原檢測家兔法替代方案

一旦熱原涌入人體循環(huán)系統(tǒng)，致熱因子直抵下丘腦體溫中樞，導(dǎo)致調(diào)定點(diǎn)上移、產(chǎn)熱升散熱降，體溫隨之飆升。原料藥熱原檢測單核細(xì)胞活化反應(yīng)測定法

MAT 法熱原檢測的穩(wěn)定性需從細(xì)胞、試劑、操作、樣品四維度嚴(yán)格把控。細(xì)胞層面，細(xì)胞活性與純度直接決定熱原響應(yīng)能力，活性不足會減少炎癥因子分泌，純度低則引入雜細(xì)胞干擾；細(xì)胞批次間一致性也關(guān)鍵，TLR 受體表達(dá)、倍增時(shí)間差異會導(dǎo)致結(jié)果波動。試劑與耗材方面，標(biāo)準(zhǔn)品效價(jià)需溯源國際標(biāo)準(zhǔn)，避免降解影響標(biāo)曲；試劑盒中細(xì)胞因子需質(zhì)控，防止外源熱原污染；培養(yǎng)液、緩沖液及無熱原耗材（吸頭、西林瓶）若熱原控制不當(dāng)，易引發(fā)假陽性。操作上，加樣手法要統(tǒng)一（如 8 通道移液器液面一致），孵育需 37℃、5% CO?穩(wěn)定環(huán)境，試劑配制濃度準(zhǔn)確，設(shè)備（酶標(biāo)儀、洗板機(jī)）定期校準(zhǔn)，操作偏差會直接導(dǎo)致異常。樣品層面，自身干擾物質(zhì)（消除炎癥成分、高鹽）、pH 偏離 6-8 或微生物污染，會抑制細(xì)胞活化或引入外源熱原，需針對性預(yù)處理。

原料藥熱原檢測單核細(xì)胞活化反應(yīng)測定法

標(biāo)簽：內(nèi)毒素檢測熱原檢測宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測支原體檢測宿主細(xì)胞殘留DNA檢測

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