河北疫苗產(chǎn)品支原體檢測核酸擴增法
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發(fā)布時間：2025-11-17
針對不同類型的樣品基質(zhì)，需采用定制化的支原體檢測前處理方案，以消除干擾、提升檢測效果。細(xì)胞懸液需經(jīng)熱處理、樣品處理液作用、細(xì)胞碎片去除、濃縮離心，再 55℃消化；上清或高濃度質(zhì)粒樣品需先濃縮離心，再用樣品處理液作用后 55℃消化；5% 人血白蛋白樣品則采用濃縮離心 + 樣品處理液作用 + 25℃消化的流程。常見干擾基質(zhì)包括凍存保護劑、高濃度細(xì)胞、代謝產(chǎn)物等，優(yōu)化前處理可遵循三大原則：提取前通過離心取上清或去除抑制劑預(yù)處理樣品；高濃度蛋白樣本提取時增加蛋白酶 K 用量，增強蛋白降解效果；細(xì)胞類樣品適當(dāng)降低細(xì)胞數(shù)或先裂解細(xì)胞，減少細(xì)胞基質(zhì)對檢測的干擾。
生物制品企業(yè)需建立支原體檢測質(zhì)量體系，滿足 GMP 與法規(guī)要求。河北疫苗產(chǎn)品支原體檢測核酸擴增法
質(zhì)控結(jié)果是支原體 NAT 檢測可靠性的前提，需嚴(yán)格遵循判定標(biāo)準(zhǔn)，且需結(jié)合實驗室實際條件驗證適配的標(biāo)準(zhǔn)閾值。質(zhì)控樣品的判定規(guī)則明確：NTC（無模板對照）的 FAM 信號需 2 復(fù)孔 Ct≥40 或無明顯擴增曲線，VIC 信號需 2 復(fù)孔 Ct<35 且呈有效 “S” 型擴增；NCS（陰性對照）判定標(biāo)準(zhǔn)與 NTC 一致；PC（陽性質(zhì)控）的 FAM 信號需 2 復(fù)孔 Ct<35 且呈有效 “S” 型擴增，PCS（陽性對照底物）判定標(biāo)準(zhǔn)與 PC 一致。只有質(zhì)控結(jié)果全部滿足要求，才能進一步分析樣本結(jié)果，若質(zhì)控不達(dá)標(biāo)，需排查設(shè)備、試劑、操作等環(huán)節(jié)的問題并重新檢測。
北京生物制品支原體檢測快速檢測實驗室需分區(qū)操作支原體檢測，避免陰陽性樣本交叉污染，配備單獨耗材。
菌株質(zhì)量是支原體檢測 NAT 方法驗證合規(guī)的關(guān)鍵，GC/CFU 比（基因組拷貝數(shù)與菌落形成單位比值）是關(guān)鍵控制指標(biāo)。支原體存在聚集特性，單一 CFU 可能對應(yīng)多個菌體，且 DNA 復(fù)制與細(xì)胞分裂不同步，部分菌體無法形成菌落但會釋放 DNA，導(dǎo)致 GC/CFU 比波動大（研究報道 0.1 CFU 對應(yīng) 30-500 個基因組拷貝）。若使用高 GC/CFU 比菌株，會高估檢測限、導(dǎo)致方法靈敏度不足，因此法規(guī)明確要求菌株 GC/CFU 比＜10。2024 年 EDQM 36.1 草案規(guī)定參考品 GC/CFU 比應(yīng)小于 10，USP 77 征求意見稿要求表征菌株 GC/CFU 比、建立菌株庫 CFU 與核酸拷貝數(shù)關(guān)系，JP G3-14-170 也對菌株質(zhì)量提出明確要求，凸顯合規(guī)菌株選擇的重要性。
湖州申科構(gòu)建了覆蓋全領(lǐng)域、全場景的支原體檢測一站式合規(guī)解決方案。產(chǎn)品矩陣豐富，包括支原體 DNA 提取純化試劑盒（2G）、檢測試劑盒（2G，PCR - 熒光探針法）、DNA 校準(zhǔn)品、一體化檢測卡盒、外源因子全自動核酸分析系統(tǒng)，以及 10 余種支原體驗證菌株（已上市豬鼻、肺炎、口腔支原體等，即將上市發(fā)酵、精氨酸支原體等）。方案具備極強的場景適配性，可應(yīng)對 5% 人白、高濃度細(xì)胞等復(fù)雜基質(zhì)樣品，支持從起始材料到終產(chǎn)品的全流程檢測，滿足細(xì)胞療法、抗體、疫苗、CRO/CDMO 等不同領(lǐng)域的檢測需求。服務(wù)層面，提供從方法學(xué)建立、樣品檢測、適用性驗證、傳統(tǒng)法與 qPCR 法比對到特殊菌株定制的全流程技術(shù)支持，配合企業(yè)完成監(jiān)管機構(gòu)現(xiàn)場審計，滿足企業(yè)從 IND 到 BLA/NDA 的申報需求，實現(xiàn) “極簡操作、一步加樣、避免污染、全量檢測” 的價值。
疫苗病毒種子批支原體檢測需取全量樣品，建議進行 10mL 種子液提取，確保無漏檢。
為解決支原體檢測的污染難題，湖州申科推出AdvSHENTEK® 外源因子全自動核酸檢測分析系統(tǒng) + 一體化支原體檢測卡盒的組合方案，以全封閉設(shè)計從根源規(guī)避污染。該方案只需一步開蓋加樣，后續(xù)流程完全封閉運行，物理隔絕核酸氣溶膠污染，搭配 UNG 酶系統(tǒng)可進一步防止環(huán)境交叉污染，能節(jié)省 100% 污染排查時間。一體化檢測卡盒相當(dāng)于單獨的迷你 qPCR 實驗室，集成試劑準(zhǔn)備、樣品制備、擴增、分析全流程，無需復(fù)雜分區(qū)。同時，方案降低了對實驗環(huán)境和人員的要求，普通實驗室即可開展檢測，人員經(jīng)簡單培訓(xùn)就能操作，徹底擺脫了傳統(tǒng) NAT 法對高技能人員和場地的依賴，大幅提升檢測結(jié)果的穩(wěn)定性。
湖州申科提供支原體檢測技術(shù)培訓(xùn)，助力實驗室提升檢測能力與合規(guī)水平。吉林細(xì)胞療法產(chǎn)品支原體檢測方法學(xué)驗證支原體檢測結(jié)果判定需結(jié)合 FAM 與 VIC 信號，警惕基質(zhì)抑制導(dǎo)致的誤判。河北疫苗產(chǎn)品支原體檢測核酸擴增法
湖州申科外源因子全自動核酸檢測分析系統(tǒng)打造了 “樣本進、結(jié)果出” 的高效檢測流程，徹底簡化支原體檢測操作。檢測只需一步式加樣，最大支持 1mL 樣本直接上樣，無需復(fù)雜前處理，加樣后系統(tǒng)自動完成核酸提取與檢測，全程 3 小時內(nèi)即可獲取結(jié)果，其中樣本準(zhǔn)備時間不足 5 分鐘，檢測流程只需 2.5 小時。相比傳統(tǒng)方法水浴消化、磁珠分離、洗脫等繁瑣步驟，該系統(tǒng)操作極大簡化，且配備 UI 觸屏控制系統(tǒng)，內(nèi)置標(biāo)準(zhǔn)化程序，支持掃碼啟動檢測，無需專業(yè) qPCR 操作培訓(xùn)，普通人員經(jīng)簡單指導(dǎo)即可上手。系統(tǒng)采用 4 通道單獨運行設(shè)計，可同步開展不同樣本檢測，儀器還支持疊加延展通道，進一步提升檢測產(chǎn)能，適配生物藥多批次檢測需求。
河北疫苗產(chǎn)品支原體檢測核酸擴增法
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