上海抗體藥物熱原檢測(cè)流程

來源：發(fā)布時(shí)間：2025-10-22

單核細(xì)胞系憑借標(biāo)準(zhǔn)化、可控性等優(yōu)勢(shì)，有效解決PBMC（外周血單個(gè)核細(xì)胞）在熱原檢測(cè)中的局限。其一，單核細(xì)胞系源自永生化細(xì)胞株（如 Mono-Mac-6），經(jīng)篩選后細(xì)胞特性高度均一，消除供體差異，讓熱原檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定性大幅提升。其二，其培養(yǎng)過程可控，培養(yǎng)基配方與環(huán)境（溫度、CO?濃度）可準(zhǔn)確調(diào)控，能維持細(xì)胞好的活性，避免 PBMC 因分選、凍存導(dǎo)致的活性衰減。其三，對(duì)培養(yǎng)環(huán)境波動(dòng)耐受性更強(qiáng)，可保障細(xì)胞遺傳穩(wěn)定且無污染物風(fēng)險(xiǎn)，降低熱原檢測(cè)的操作復(fù)雜度與誤差率。

基于人體免疫機(jī)制的 MAT 熱原檢測(cè)，為熱原檢測(cè)提供了新的可靠途徑。上海抗體藥物熱原檢測(cè)流程

PyroSHENTEK^®熱原檢測(cè)試劑盒突破傳統(tǒng)檢測(cè)方法局限，不僅能檢測(cè)革蘭氏陰性菌來源的內(nèi)毒素，還可準(zhǔn)確識(shí)別革蘭氏陽性菌（脂磷壁酸 LTA）、病毒、真菌等產(chǎn)生的非內(nèi)毒素?zé)嵩∟EP），契合熱原檢測(cè) “全風(fēng)險(xiǎn)覆蓋” 的法規(guī)需求。其定量限低至 0.025EU/mL，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，對(duì) Flagellin、LTA、Resiquimod、Poly-IC 等多種 NEP 均能有效檢出，且加標(biāo)回收率穩(wěn)定在 50%-200% 合格范圍（如貝伐珠單抗注射液中 LTA 加標(biāo)回收率 66.8%、Zysoman 加標(biāo)回收率 113%）。此外，試劑盒聯(lián)合了國內(nèi)相關(guān)機(jī)構(gòu)完成室間驗(yàn)證，與傳統(tǒng)家兔熱原試驗(yàn)（RPT）橋接結(jié)果高度一致 —— 如人用狂犬病疫苗（Vero 細(xì)胞）中 LPS 加標(biāo)回收率 152.1%、人血白蛋白中 LPS 加標(biāo)回收率 71.6%，檢測(cè)數(shù)據(jù)科學(xué)性符合國際法規(guī)要求，助力企業(yè)無縫銜接中美歐等地申報(bào)標(biāo)準(zhǔn)。

山西熱原檢測(cè)MAT法通過加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，熱原檢測(cè)MAT法驗(yàn)證了對(duì)LTA、酵母多糖等非內(nèi)毒素?zé)嵩臋z出能力。

湖州申科生物MAT試劑盒配套的即用型細(xì)胞，需嚴(yán)格遵循解凍與使用規(guī)范，避免細(xì)胞活性下降影響熱原檢測(cè)結(jié)果。首先，解凍操作需快速：從液氮罐或 - 80℃冰箱取出細(xì)胞后，立即放入 37℃水浴鍋快速解凍（約 1-2 分鐘），避免緩慢解凍導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)形成冰晶，損傷細(xì)胞膜；解凍后需立即取出，用 75% 酒精擦拭管外壁消毒，防止污染。其次，細(xì)胞解凍后需一次性使用完畢，不建議按量添加培養(yǎng)基或添加劑后分次使用—即用型細(xì)胞經(jīng)工藝優(yōu)化，活性與濃度已預(yù)調(diào)，分次使用會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)不均（如部分細(xì)胞活化、部分休眠），影響熱原反應(yīng)性。使用時(shí)需嚴(yán)格按說明書操作：將解凍后的細(xì)胞直接加入含樣品的微孔板中，無需額外洗滌或稀釋，若樣品為高濃度基質(zhì)，可提前用無熱原培養(yǎng)基稀釋樣品（不超 MVD），但細(xì)胞不可稀釋。此外，解凍后的細(xì)胞需在 30 分鐘內(nèi)完成加樣，避免室溫放置過久導(dǎo)致細(xì)胞活性下降，若無法及時(shí)加樣，需置于 37℃培養(yǎng)箱暫存，但不超過 1 小時(shí)，確保細(xì)胞用于熱原檢測(cè)時(shí)處于較好的活性狀態(tài)。

熱原檢測(cè)MAT法的法規(guī)地位持續(xù)提升，已成為多國藥典認(rèn)可的熱原檢測(cè)替代方法。歐洲藥典（EP）是推動(dòng) MAT 應(yīng)用的關(guān)鍵力量：通則 2.6.30 明確 MAT 可替代家兔熱原試驗(yàn)（RPT），且能同時(shí)檢測(cè)內(nèi)毒素與非內(nèi)毒素?zé)嵩?024 年歐洲藥典委員會(huì)批準(zhǔn)刪除所有條款中的家兔法，修訂文本將于 2025 年7月1日生效，強(qiáng)制鼓勵(lì)使用 MAT 等體外替代方法。美國藥典（USP）<151> 規(guī)定，經(jīng)驗(yàn)證的體外熱原試驗(yàn)（如 MAT）可替代家兔法，且需依據(jù) USP<1225>開展驗(yàn)證；FDA 行業(yè)指南進(jìn)一步明確 MAT 的合規(guī)性。中國藥典 2020 年版通則 9301 將 MAT 列為熱原檢查的補(bǔ)充方法，雖暫未替代家兔法，但明確其適用于復(fù)雜基質(zhì)樣品的全熱原篩查。此外，ISO 10993-1、ICCVAM 等國際標(biāo)準(zhǔn)也優(yōu)先推薦體外熱原檢測(cè)模型，全球法規(guī)協(xié)同推動(dòng) MAT 成為熱原檢測(cè)的主流技術(shù)。

家兔法熱原試驗(yàn)雖能篩查所有類別熱原，卻因周期長、成本高、靈敏度低而逐步被體外方法取代。

傳統(tǒng)熱原檢測(cè)方法的局限性十分明顯：鱟試驗(yàn)法只能特異性識(shí)別細(xì)菌內(nèi)毒素，對(duì)非內(nèi)毒素?zé)嵩耆珶o響應(yīng)；家兔熱原試驗(yàn)雖能篩查全類型熱原，但靈敏度低（檢測(cè)限≥5EU/kg），無法檢出微量非內(nèi)毒素?zé)嵩覠o法區(qū)分熱原類型，難以追溯污染源頭；單核細(xì)胞活化反應(yīng)測(cè)定（MAT）的出現(xiàn)有效解決了上述難題，其關(guān)鍵優(yōu)勢(shì)在于：基于人源單核細(xì)胞的免疫應(yīng)答機(jī)制，可同時(shí)識(shí)別所有具備生物活性的熱原（包括內(nèi)毒素與非內(nèi)毒素），且檢測(cè)靈敏度高（對(duì)病毒熱原檢測(cè)限低至pg級(jí)）；檢測(cè)周期短（24-48小時(shí)），可滿足產(chǎn)品快速放行需求；能通過細(xì)胞因子濃度定量評(píng)估熱原活性，避免“無活性熱原”的誤判。

PyroSHENTEK 熱原檢測(cè)（MAT）試劑盒的單核細(xì)胞系無需供體，避免PBMC血源供應(yīng)受限及標(biāo)志物檢測(cè)環(huán)節(jié)。山西熱原檢測(cè)MAT法

在藥品安全語境中，熱原特指細(xì)菌性熱原—微生物代謝產(chǎn)物、細(xì)菌尸體及內(nèi)毒素的統(tǒng)稱。上海抗體藥物熱原檢測(cè)流程

PBMC（外周血單個(gè)核細(xì)胞）的供體差異會(huì)直接導(dǎo)致熱原檢測(cè)結(jié)果的波動(dòng)，主要體現(xiàn)在 IL-6 釋放水平的不一致。不同供體的 PBMC，其單核細(xì)胞比例、TLR 受體表達(dá)量、免疫活性狀態(tài)存在差異：有的供體 PBMC 受熱原刺激后， IL-6 釋放量高；有的則極低，甚至無明顯響應(yīng)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示， PBMC 的標(biāo)曲各濃度點(diǎn)相對(duì)偏差有高達(dá) 171.43%的，正是這種差異的體現(xiàn)，導(dǎo)致熱原檢測(cè)結(jié)果難以標(biāo)準(zhǔn)化，無法準(zhǔn)確判斷供試品熱原是否超標(biāo)，從而增加了藥品的質(zhì)量控制風(fēng)險(xiǎn)。

上海抗體藥物熱原檢測(cè)流程

標(biāo)簽：支原體檢測(cè) 熱原檢測(cè) 內(nèi)毒素檢測(cè) 宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè) 宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)

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